基于CRISPR-Cas9构建树突状细胞相关C型凝集素-1基因敲除小鼠模型

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摘要目的利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建树突状细胞相关C型凝集素-1（Dectin-1）基因缺失小鼠模型，研究Dectin-1基因缺失对小鼠肿瘤生长的影响。方法通过CRISPR-Cas9基因编辑技术设计靶向目的基因的sgRNA实现Cas9蛋白对DNA双链的特异性切割。将体外转录纯化得到的sgRNA和ssDNA并与Cas9混合后，通过显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵内并经胎盘移植到代孕小鼠体内，获得F0代小鼠。F0代小鼠通过基因鉴定和DNA测序获得Dectin-1基因缺失阳性子代小鼠。最后构建野生型与Dectin-1敲基因小鼠的肿瘤模型，经β-葡聚糖治疗后，观察两组小鼠的肿瘤生长情况。结果利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功敲除C57BL/6野生型小鼠的Dectin-1基因。PCR技术及DNA测序进一步显示Dectin-1基因部分碱基缺失，功能实验显示Dectin-1敲基因小鼠口服β-葡聚糖后肿瘤生长速度高于对照组小鼠，差异有统计学意义（P<0.05）。结论利用CRISPRCas9基因编辑技术构建Dectin-1基因敲除小鼠模型，验证了Dectin-1对β-葡聚糖抗肿瘤的影响，为进一步研究Dectin-1基因在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础。

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关键词 ： CRISPR-Cas9基因编辑技术, 树突状细胞相关C型凝集素-1, 肿瘤免疫治疗, β-葡聚糖

Abstract：Objective To investigate the effect of the deletion of the dendritic cell-associated C-type lectin-1(Dectin-1)gene on the tumor growth in mice.Methods CRISPR-Cas9 gene editing technology was used to construct the Dectin-1 gene knockout mouse model.sgRNA targeting the gene of interest was designed to achieve specific cutting of DNA double strand by Cas9 protein.The F0 generation mice were obtained from C57BL/6 surrogate mice,which were fertilized egg micro-injected with sgRNA and ssDNA purified in vitro and Cas9,and Dectin-1 deficient mice were obtained from F0 generation mice by gene identification and DNA sequencing.The tumor models of Wild-type and Dectin-1 knockout mice were further established to evaluate Dectin-1 on the antitumor effect of beta-glucan.Results The Dectin-1 gene of C57BL/6 wild-type mice was successfully knocked out using CRISPR-Cas9 gene editing technology.The deletion of partial nucleotides of Dectin-1 gene was confirmed by PCR technology and DNA sequencing,and the functional experiment showed that the tumor growth rate of Dectin-1 knockout mice was higher than that of wild-type mice,the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion The Dectin-1 gene knockout mouse model is successfully constructed,and the mouse tumor model further confirms the effect of Dectin-1 on the antitumor of beta-glucan,which can lay a foundation for the further study of the role of Dectin-1 in tumor immunotherapy.

Key words： CRISPR-Cas9 gene editing technology Dendritic cell-associated C-type lectin-1 Tumor immunotherapy Beta-glucan

基金资助:江苏省基础研究计划（自然科学基金）青年基金项目（BK20200178）。

通讯作者: 丁骏（1985-），女，江苏常州人，硕士，副研究员，科研组长，研究方向：肿瘤免疫。

引用本文:

陈洁；谢叶文；潘洁；丁骏. 基于CRISPR-Cas9构建树突状细胞相关C型凝集素-1基因敲除小鼠模型[J]. 中国当代医药, 2021, 28(32): 40-44.
CHEN Jie；XIE Ye-wen；PAN Jie；DING Jun. Construction of Dectin-1 gene knockout mouse models based on CRISPRCas9. 中国当代医药, 2021, 28(32): 40-44.

链接本文:

http://dangdaiyiyao.com/CN/ 或 http://dangdaiyiyao.com/CN/Y2021/V28/I32/40

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