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miR-203 是一种短链非编码RNA，在不同组织中的表达水平存在显著差异。miR-203 主要表达在皮肤、食管黏膜等鳞状上皮细胞中，参与鳞状上皮的形成。在食管癌发展进程中，miR-203 可以与多个信号通路相互作用，抑制癌症的发展。PI3K/AKT 是参与食管癌发生发展的重要通路之一，有关研究表明，miRNA 可与磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）通路共同影响食管癌的发展[1]。miR-203 为miRNA 中的一员，本文对食管癌中PI3K/AKT 通路机制、miR-203 在PI3K/AKT 通路中的作用以及基于该通路的靶向治疗作一综述。

1 食管癌中PI3K/AKT 信号通路机制

磷脂酰肌醇激酶（PIKs）是一种脂质激酶，其作用是使磷酸肌醇的肌醇环磷酸化，根据磷酸化位点，PIKs 分为三个家族：PI3Ks、PIP4Ks 和PIP5Ks。其中激活的PI3K 在细胞外可激活几乎所有细胞和组织中的AKT。因此，PI3K 及其脂质产物通常被认为是激活AKT 的限速因子[2]。PI3K 活性受多种致癌基因和生长因子受体的刺激，而PI3K 信号的升高被认为是癌症的一个标志。PI3K 可参与调节多种细胞的功能，包括癌症的发生[3]。丝氨酸/苏氨酸激酶AKT，也称为蛋白激酶B（PKB），主要包括AKT1/α、AKT2/β 和AKT3/γ 3 个亚型，是细胞中刺激下游信号传导的中心节点。AKT 激活异常的缺失或获得是多种复杂疾病（包括2型糖尿病和癌症）病理生理特性的基础[4]。

根据CST 公司官网提供的PI3K/AKT 信号通路图可知，PI3K 诱发三磷酸（3,4,5）磷脂酰肌醇（PIP3）产生的刺激可以激活AKT 信号级联放大，AKT 可通过作用于mTORC1/mTORC2 等调节细胞的生长，抑制转录因子FoxO、凋亡蛋白Bim 等调节细胞的凋亡，靶向palladin、Cyclin 蛋白等调节细胞的增殖、侵袭。PI3K/AKT 作为重要的信号通路，与肿瘤发生发展密切相关，是近年来研究热点。

PI3K/AKT 对食管癌的发展进程有重要的作用[5]。Tasioudi 等[6]研究发现在食管癌中存在异常激活的PI3K/AKT/mTOR 信号通路，其中mTOR 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，可以控制细胞多种生命活动。Li 等[7]通过实验发现食管癌细胞中p-AKT 表达上调时，PI3K/AKT 上游负调控因子PTEN 表达水平显著降低。p-AKT 表达水平与食管癌转移呈正相关。上调PTEN 的表达，可显著抑制肿瘤细胞的侵袭。说明PI3K/AKT 与食管癌进程密切相关，PTEN 对PI3K/AKT 通路有负调控作用。

PI3K/AKT 通路的作用机制复杂，常被用于食管癌的研究[8]。Sheng 等[9]通过实验发现激活PI3K/AKT通路可促进食管癌细胞系EC109 的侵袭和迁移。Wang 等[10]发现下调PI3K 的表达和AKT、mTOR 的磷酸化水平可负调控食管癌细胞的增殖和迁移，说明PI3K/AKT 与食管癌发展紧密相关。Xia 等[11]发现异常表达的miRNA 可参与PI3K/AKT 在食管癌中的调节作用。

2 miR-203 在PI3K/AKT 信号通路中的作用

miR-203 是一种内源性非编码单链小RNA，位于人类第14 号染色体q32.33，属于染色体不稳定的脆性区域，该区域的杂合性丢失是肿瘤发生的重要因素。同所有哺乳动物miRNA 一样，miR-203 首先在细胞核内经RNA 聚合酶Ⅱ转录形成原始pri-miR-203，pri-miR-203 由Drosha-DGCR8 复合体加工，成为前体pre-miR-203，再由转运蛋白经跨膜转运转出细胞核，在细胞质中Dicer 酶对其进行剪切、解链，形成两条核酸单链，长度为19～22 个核苷酸，其中一条分解消失，另一条则成为成熟的单链miR-203。miR-203特异性表达于上皮组织[12]，在肿瘤中发挥致癌或抑癌作用。在食管癌细胞中miR-203 水平明显降低，当通过转染上调miR-203 的表达，食管癌细胞的增殖与侵袭能力显著下降，说明miR-203 的表达与食管癌的发生发展呈负相关[13]。

在食管癌中miR-203 可以作用于不同靶点、信号通路。Yuan 等[14]研究发现miR-203 可与ΔNp63 的3′UTR 互补配对，参与ΔNp63 相关通路，抑制了食管癌的发展。LASP1 在多种高侵袭转移癌中呈高表达，Takeshita 等[15]发现在食管癌中miR-203 作为抑癌基因可靶向下调LASP1 的表达，抑制肿瘤细胞的侵袭、转移。Ran 是一种小分子蛋白质，属于原癌基因Ras家族，Zhang 等[16]发现当miR-203 明显上调时，Ran 水平显著降低，食管癌细胞增殖、侵袭及迁移力均降低，凋亡率上升，说明miR-203 可对Ran 蛋白进行负性调控，起到抑癌作用。Zong 等[17]通过双荧光素酶检测发现MAP3K1 是miR-203 直接作用的靶点，MAP3K1的过表达可降低miR-203 对食管癌细胞增殖、凋亡和侵袭的抑制作用。殷彩桥等[18]通过调节miR-203 在食管癌细胞系中的表达，检测GAT6 蛋白水平和食管癌细胞的存活、侵袭能力发现，miR-203 可靶向作用GAT6 参与食管癌的调控。

PI3K/AKT 是食管癌常见的异常信号通路之一，PI3K/AKT 的异常激活有助于促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，mTOR 可影响蛋白质合成、血管生成等生命活动[6]。食管癌中miR-203 可以通过3′UTR靶向PI3K/AKT/mTOR 信号级联的多个关键组成部分，包括PIK3CA、AKT2、RPS6KB1[19]。其中，PIK3CA位于3q26.3 号染色体上，全长34 kb，该基因突变在大多数实体恶性肿瘤中具有重要的临床意义，这些突变会使PI3K 通路被过度激活，导致细胞增殖失调[20]。miR-203 通过直接靶向作用于PIK3CA，从而调控PI3K/AKT 信号通路[21]。AKT2 为AKT 亚型之一，是控制细胞生长、增殖、存活的关键，与肿瘤的生长、转移和耐药有关。AKT2 可以与不同的信号通路相互作用，包括PI3K/AKT/mTOR 等[22]。miR-203 可直接作用于AKT2，AKT2 的3′UTR 有miR-203 的两个靶点，miR-203 与AKT2 的3′UTR 结合可导致AKT2 mRNA 的降解[23]。RPS6KB1 属蛋白激酶，可通过磷酸化激活，与细胞多个过程密切相关，包括mRNA 处理、蛋白质合成等[24]。双荧光素酶报告基因实验显示miR-203 可以直接作用于RPS6KB1[19]，其具体机制仍有待研究。

3 PI3K/AKT 信号通路的靶向治疗

PI3K/AKT/mTOR 在食管癌中有着重要作用，临床试验中开发针对PI3K 通路多个成员的抑制剂是近来热点。这些候选药物包括PI3K 抑制剂、AKT 抑制剂、mTOR 抑制剂以及PI3K/mTOR 双重抑制剂。

PI3K 抑制剂在临床治疗上应用较广。AZD8186是选择性的PI3K 催化亚基PI3Kβ 和PI3Kδ 的抑制剂。AZD8186 对肿瘤的血管、炎性渗出影响甚小，具有高效、代谢稳定等优点[25]。除此之外，匹拉利塞（pilaralisib、SAR245408、XL147）、Pictilisib（GDC-0941）、布帕利塞（buparlisib，BKM120）等也是目前较为常见的PI3K 抑制剂。但无论单独使用哪种PI3K 抑制剂进行治疗，效果均不显著，这可能与线粒体向特定区域移动，促进肿瘤的发展有关[26]。

在临床试验中，MK2206 和BEZ235 已经被证明是癌症治疗的有竞争力的候选药物。MK2206 是一种高选择性AKT 抑制剂，能使AKT 去磷酸化，有抗肿瘤作用。MK2206 单一作用于临床，疗效有限，MK2206联合标准剂量的卡铂、紫杉醇、多西他赛或厄洛替尼可以安全地应用于晚期实体肿瘤患者[27]。BEZ235 是对I 类PI3K 和mTOR 具有高选择性的新型咪唑喹啉衍生物，与MK2206 相比，BEZ235 可抑制AKT 在Thr308和Ser473 位点的磷酸化，并显著降低mTOR 的磷酸化水平。有研究表明，单抑制剂治疗可通过代偿性激活上、下游分子来诱导耐药性[28]。因此，针对同一信号通路中多个分子的抑制剂可能有助于克服这种代偿性激活，作为PI3K/mTOR 双重抑制剂，BEZ235 可能表现出更强的抑癌作用。MK2206 和BEZ235 均可抑制食管癌细胞的增殖，增加细胞凋亡。研究发现，与单独使用MK2206 或BEZ235 相比，MK2206 和BEZ235联合使用具有更强的抗肿瘤作用[29]。

mTOR 抑制剂主要包括雷帕霉素及其衍生物，雷帕霉素是一种天然的大环内酯类化合物，可参与抗真菌、抗增殖和免疫抑制等。20 世纪90年代，雷帕霉素被发现具有抗肿瘤作用而成为第一代mTOR 抑制剂。mTOR 有两种结构和功能不同的酶复合物（mTORC1和mTORC2），mTORC1 磷酸化S6K 和4E-BP 用于调节翻译、自噬、细胞生长、脂类合成等，mTORC2 磷酸化SGK1、AKT、Rac1、PKCα 用于调节生存、新陈代谢、细胞增殖等[30]。雷帕霉素并不是直接抑制mTOR 的催化活性，而是在一个复合物中与FK506 结合蛋白12（FKBP12）结合，变构抑制mTORC1 的FKBP12-雷帕霉素结合（FRB）域，使Raptor 与mTORC1 解离，从而抑制蛋白质的合成及转录，最终导致细胞的凋亡[31-32]。

NVP-BEZ235 是一种PI3K/mTOR 双重抑制剂，可以抑制PI3K 的催化亚基p110a 和mTOR 的活性，当联合纳米白蛋白结合紫杉醇时具有更加明显的抑制作用[33]。NVP-BEZ235 通过靶向mTOR 复合物和p110的ATP 结合位点抑制mTORC1/mTORC2 和PI3K 的α、β 及γ 亚基，导致PI3K/AKT 通路完全阻断。在实验条件下，NVP-BEZ235 可使细胞停滞在G1 期，抑制细胞的生长，但不诱导细胞的凋亡，与传统细胞毒性药物（如阿霉素、长春新碱）或其他信号抑制剂联用能增加疗效[34]。

4 基于PI3K/AKT 途径治疗食管癌的中药及其他药物

近年来，许多临床研究发现中药可通过PI3K/AKT 通路发挥抗肿瘤作用，且在食管癌治疗中取得较好疗效。人参皂苷Rk3 是从人参和三七中分离而来。Liu 等[35]通过实验发现人参皂苷Rk3 可使食管癌细胞停滞在G1 期，诱导细胞凋亡、自噬，而AKT 抑制剂或mTOR 抑制剂的预处理可促进人参皂苷Rk3 对食管癌细胞的诱导作用，说明人参皂苷Rk3 可通过阻断PI3K/AKT/mTOR 途径，激活细胞凋亡和自噬，抑制食管癌细胞增殖。苦马豆素是从苦马豆中提取而来具有很强的毒性，有研究者[36]采用不同剂量的苦马豆素对人食管癌细胞进行处理，检测细胞活力、侵袭性和凋亡，发现苦马豆素通过下调Twist1 和抑制PI3K/AKT通路来抑制食管癌细胞的侵袭和上皮间质转化，苦马豆素对食管癌细胞活力和凋亡并无影响，但能显著降低细胞侵袭，且呈剂量依赖性。此外，Tang 等[37]通过实验发现在PI3K/AKT/mTOR 通路中，二甲双胍降低了IGF-IR、PI3K、AKT、pAKT、mTOR 和PKM2 的表达水平，在体内外均可抑制食管癌细胞增殖，二甲双胍有望成为一种新型、有效的食管癌治疗药物。获得性耐药影响了食管癌等癌的放疗疗效，导致肿瘤复发，生存期短，Jin 等[38]通过实验发现辛伐他汀可以抑制PI3K/AKT 通路的激活，可通过增加放射敏感性和通过PTEN-PI3K/AKT 通路逆转上皮间质转化来抑制食管癌细胞的生长，辛伐他汀可有望用于对抗食管癌耐药，减少肿瘤复发。

5 总结

综上所述，miR-203 介导的PI3K/AKT 信号通路在食管癌发展进程中有重要作用，抑制该通路的激活状态是治疗食管癌的有效方法。目前，多项针对该通路各分子的靶向抑制剂已进入临床研究阶段，单药长期应用产生的耐药问题，PI3K/AKT 双重或多重抑制剂的开发应用成为一个有待解决的问题。虽然有少量研究报道miR-203 在食管癌PI3K/AKT 信号通路中的作用，但其具体机制仍有待阐明。miR-203 能否作为食管癌中PI3K/AKT 靶向治疗的分子标志物将需大量的研究。

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