微转移现象的存在可能是导致肺癌病变再次复发和转移的一个重要根源[1]。肺癌微转移方面的研究主要涉及到淋巴结微转移、骨髓微转移、外周血微转移、胸膜腔微转移等几部分内容[2]。如果能够及时地发现病变，或将肺癌微转移确定，并明确肺癌微转移的临床意义，进而在恰当的时机采取及时、系统的方法进行治疗，则非小细胞肺癌患者的预后则有望得到改善[3]。恶性肿瘤细胞可能会随血液循环系统在体内种植和转移，测定外周血液中肿瘤细胞的相关标记物情况，对于该病治疗效果的评估、肺癌转移和复发的判断具有非常重要的意义[4]。因此，本研究旨在探讨非小细胞肺癌患者的肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 三种基因在外周血液有核细胞中的阳性表达情况，以为临床提供参考。

选择2018年3月至2019年12月在江西省胸科医院接受治疗的肺部良性疾病和非小细胞肺癌确诊患者各60 例，分别作为研究1 组和研究2 组，再抽取同期在江西省胸科医院接受健康体检的同年龄段健康人资料60 例作为对照组。研究1 组中，男41 例，女19 例；年龄39～74 岁，平均（49.7±6.5）岁；肺部疾病史1～10 个月，平均（3.5±0.6）个月。研究2 组中，男44例，女16 例；年龄42～71 岁，平均（49.3±6.7）岁；肺部疾病史1～13 个月，平均（3.7±0.4）个月。对照组中，男38例，女22 例；年龄35～79 岁，平均（49.1±6.3）岁。三组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究已经医院医学伦理委员会审核批准，患者及家属知情且签署同意书。

纳入标准：①患者确诊为非小细胞肺癌；②年龄＞18 岁。排除标准：①合并其他肿瘤疾病患者；②合并严重肝肾患者疾病患者；③妊娠期女性；④近期接受药物或手术治疗。

患者在接受治疗前（对照组在体检当日），于空腹状态下抽取外周静脉血液标本4 ml，第1 管弃去，选用第2 管血液，从而有效避免潜在的标本污染风险事件的发生，放入到EDTA 抗凝管当中，在一小时之内送实验室进行有核细胞分离处理，然后可以进行提取RNA 操作，并采用酶标仪对抽提的RNA 浓度及纯度水平进行测定。随后按照逆转录试剂盒说明书的具体要求实施RNA 逆转录处理。采用荧光定量PCR 检测法对三组研究对象的肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 三种基因在外周血液有核细胞中的阳性表达情况进行测定，并比较检测结果。

比较三组肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 三种基因在外周血液有核细胞中表达以及阳性率。肺组织特异性蛋白水平在2.5×106 以上为阳性、细胞角蛋白19 水平在5.0 μg/L 以上为阳性，钙结合蛋白A4 水平在2.5 μg/L 以上为阳性。

采用SPSS 18.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t 检验，以P<0.05为差异有统计学意义；计数资料用率表示，组间比较采用χ2 检验，两两比较采用Bonferroni 方法校正，检验水准α=原α 水平/比较次数，即0.05/3=0.017。

研究2 组肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 水平高于研究1 组、对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；研究1 组肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 三组研究对象肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 基因表达量的比较（±s）

研究2 组研究对象肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 三种基因在外周血液有核细胞中表达的阳性率高于研究1 组、对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；研究1 组研究对象肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 三种基因在外周血液有核细胞中表达的阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2 三组研究对象特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 在外周血液有核细胞中表达阳性率的比较[n（%）]

 

与研究1 组比较，aP＜0.017，与对照组比较，bP＜0.017

血源性和淋巴源性播散属于肺癌患者的病灶在体内发生转移的两种方式，CT、B 超、骨扫描、手术标本的组织病理学检查，是目前临床上较为常用的两种对肺癌转移情况进行判断的主要方式，但是这些方法对骨髓、淋巴结、外周循环中的隐性微转移灶进行检查的准确性往往不是十分理想[5-6]。对肺癌微转移和术后肿瘤病变再次复发在早期阶段进行监测目前仍然缺乏有效的手段，以致有些时候会导致最佳治疗时机被延误，导致这一情况出现的最主要原因在于没有找到敏感性和特异性较高的肺癌转移标志物，所以肿瘤微转移诊断近年来在临床上逐渐成为肺癌基础性研究领域的一个热点[7-8]。

细胞角蛋白19 在肺癌、乳腺癌、胃肠癌等临床上常见的多种上皮性肿瘤组织当中都会有稳定的表达，细胞角蛋白19 对于肿瘤病变的特异性较高，且最为常用，其基因定位在人染色体的17q21～q23，被认为是揭示非小细胞肺癌微转移的一个非常重要的标志物[9-11]。肺组织特异性蛋白属于人类肺组织特异性基因的一种[12]。肺组织特异性蛋白mRNA 是对肺癌外周血微转移进行检测的一种良好的标志物，其表达与肺癌分期、癌细胞分化程度之间有着非常密切的关系。钙结合蛋白A4 基因在肿瘤病变的发生、发展、转移过程中均发挥着非常重要的作用[13-15]。钙结合蛋白A4可以通过上调MMP 的表达水平，为肿瘤细胞的转移清除造成一定的障碍。且其与淋巴结转移与病变复发之间有着密切的联系，可作为肺鳞癌的一种独立预后预测因子[16]。

有研究[17]表明，肺组织特异性蛋白mRNA、细胞角蛋白19mRNA、钙结合蛋白A4mRNA 在大多数肺癌患者的外周血液当中会呈现阳性表达状态，而在健康人群当中的阳性表达率极低，三个基因可以作为对肺癌微转移进行检测的指标。肿瘤病理类型和位置与上述三种基因的表达情况有一定的关系。肿瘤分期越高、发生淋巴结转移，会使阳性表达率增高，而肿瘤病灶的直径则基因阳性表达基本不会产生影响[18-19]。肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 在外周血液当中的联合阳性表达，仅会在肺癌病变患者当中出现，可作为判断肺部疾病性质的参考指标[20]。

本研究结果显示，研究1 组肺组织特异性蛋白以及钙结合蛋白水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；研究2 组肺组织特异性蛋白水平高于研究1 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；研究2 组肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 三种基因在外周血液有核细胞中表达的阳性率高于研究1 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；研究1 组肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 三种基因在外周血液有核细胞中表达的阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，非小细胞肺癌患者的肺组织特异性蛋白、细胞角蛋白19、钙结合蛋白A4 三种基因在外周血液有核细胞中表达的阳性率高于肺部良性疾病患者及健康人群，临床上可以将这一特征作为非小细胞肺癌诊断和治疗效果评价的重要参考依据。

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Significance of positive expression of three genes in peripheral blood nucleated cells of non-small cell lung cancer

NONG Xue-ping
Department of Pathology,Jiangxi Chest Hospital,Jiangxi Province,Nanchang 330006,China

[Abstract]Objective To study the expression of lung tissue-specific protein,cytokeratin 19 and calcium binding protein A4 in peripheral blood nucleated cells of patients with non-small cell lung cancer.Methods Each of 60 patients with confirmed lung benign and non-small cell lung cancer treated at Jiangxi Chest Hospital from March 2018 to December 2019 were respectively selected as study group 1 and study group 2.Then 60 healthy people of the same age who received physical examination in Jiangxi Chest Hospital during the same period were selected as the control group.The positive expression of lung tissue-specific protein,cytokeratin 19 and calcium binding protein A4 in peripheral blood nucleated cells of the three groups were detected by fluorescence quantitative PCR,and the detection results were compared.Results The levels of lung tissue-specific protein and calcium binding protein in the study 1 group were higher than those in the control group,the differences were statistically significant(P<0.05).The level of lung tissue-specific protein in the study 2 group was higher than that in the study 1 group,the difference was statistically significant(P<0.05).Three genes of expression of lung tissue-specific protein,cytokeratin 19,and calcium-binding protein A4 in peripheral blood nucleocytes in the study 2 group were higher than that in the study 1 group,the differences were statistically significant(P<0.05).Three genes of expression of lung tissue-specific protein,cytokeratin 19,and calcium-binding protein A4 in peripheral blood nucleocytes in the study 1 group were higher than that in the control group,the differences were statistically significant(P<0.05).Conclusion The positive rates of lung tissue-specific protein,cytokeratin 19 and calcium binding protein A4 in peripheral blood nucleated cells of patients with nonsmall-cell lung cancer are significantly higher than those of patients with benign lung diseases and healthy people,which could be used as an important reference for the diagnosis and treatment of NSCLC.

[Key words]Non-small cell lung cancer;Lung tissue specific protein;Cytokeratin 19;Calcium-binding protein A4;Peripheral blood fluid;Nucleated cells;Positive expression

[基金项目]江西省卫生计生委科技计划项目（20175512）。

（收稿日期：2021-01-15）