皮肤鳞状细胞癌简称鳞癌，是临床上最常见的非黑色素瘤皮肤癌之一。多发生在颜面、耳部、下唇和手背等曝光部位的皮肤[1-3]。目前皮肤鳞癌治疗方法有手术治疗、放疗、化疗，但常常出现复发和耐药情况，严重影响患者的身心健康。从分子角度了解皮肤鳞癌发生发展对皮肤鳞癌有效治疗具有重要意义。NF-κB即增强型核因子激活B 细胞轻链κ，是一种控制转录、细胞因子产生和细胞存活的蛋白质复合物[4-5]。NF-κB 在调节机体对感染的免疫应答中起着关键作用[6-7]。本研究选择贵州医科大学附属医院和赣南医学院附属医院收治的50 例皮肤鳞状细胞癌患者组织病理切片作为癌组织组，相对应癌旁组织作为癌旁组，探讨NF-κB p65蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的表达。

选择贵州医科大学附属医院和赣南医学院第一附属医院2018年1月—2019年12月收治的50 例皮肤鳞状细胞癌患者组织病理切片作为癌组织组，相应癌旁组织作为癌旁组织组。50 例患者中，男28 例，女22 例；年龄24～77 岁，平均（52.34±5.24）岁。纳入标准：①病理诊断为皮肤鳞状细胞癌；②所有标本均有完整的临床资料；③签署知情同意书。排除标准：①合并其他恶性肿瘤患者；②肝肾功能和心肺功能严重异常的患者；③精神病患者；④孕妇或哺乳期妇女；⑤术前放疗或化疗者。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2.1 主要材料 NF-κB p65 鼠抗人多克隆抗体（圣克鲁斯公司）；PV-9000 免疫组织化学染色试剂盒（北京中山金桥有限公司）；NF-κb p65 Rabbit polyAb（10745-1-AP，Proteintech）；辣根酶标记山羊抗兔IgG（H+L）（ZB-2301，中杉金桥）；DAB 显色试剂盒（CW0125，CWBIO）；中性树脂（CW0136，CWBIO）；苏木素染色（AR1180-1，博生德生物）等。

1.2.2 免疫组织化学检测 进行石蜡切片预处理准备（烤片、脱蜡、水化）、切片抗原修复、消除内源性过氧化物酶、非特异性封闭、免疫反应，最后进行显色复染，先是DAB 显色5～10 min，在显微镜下掌握染色程度，PBS 或自来水冲洗1 min 之后苏木精复染3 min，盐酸酒精分化，返蓝；再自来水冲洗1 min，脱水、透明、封片、镜检。免疫组织化学检测流程见图1。染色结果说明：目的蛋白棕色，细胞核蓝紫色。

 

图1 免疫组织化学检测流程

1.2.3 阳性表达的测定 切片采用双盲法，由医院两名有经验的病理学专家独立观察。在400×高倍显微镜下，每个切片随机抽取10 个视野，观察阳性细胞百分率和细胞染色强度。

观察两组NF-κB p65 蛋白的表达差异，分析NF-κB p65蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的表达与患者性别、年龄、疾病临床分期和分化程度之间的关系。

采用SPSS 21.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示；计数资料采用率表示，组间比较采用χ2 检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。

癌组织组NF-κB p65 蛋白表达的阳性率为70.00%（35/50），高于癌旁组织组的16.00%（8/50），差异有统计学意义（P<0.05）。

患者不同性别、年龄情况下的NF-κB p65蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的表达情况比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

表1 患者不同性别、年龄情况下NF-κB p65蛋白在皮肤鳞状细胞癌中表达情况的比较[n（%）]

Ⅲ～Ⅳ期患者的NF-κB p65 蛋白表达阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者，低分化患者的NF-κB p65 蛋白表达阳性率高于高中分化患者，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。

表2 患者不同疾病临床分期和分化程度下NF-κB p65蛋白在皮肤鳞状细胞癌中表达情况的比较

皮肤鳞状细胞癌是皮肤科的恶性肿瘤之一，其发病率有逐年上升的趋势，特别是在特殊环境或特殊职业的人群中[2]。皮肤鳞状细胞癌发病原因尚不清楚，其发生可能与以下因素有关：①紫外线照射和日常暴露；②化学致癌物刺激；③辐射、电离辐射；④其他因素，如病毒致癌物、遗传等。该疾病容易被患者忽视，如果不能进行有效治疗并任其发展，将导致肿瘤恶化和转移，最终危及生命[8-9]。研究发现，皮肤鳞状细胞癌与癌基因、抑癌基因、生长因子、细胞因子和微环境等因素有关[2]。作为多种细胞因子NF-κB 在皮肤鳞状细胞癌的发生发展中也起着重要作用，但其作用机制尚不清楚[10-11]。

NF-κB 是一种具有多向转录调控功能的蛋白质。NF-κB 与其他转录因子共同作用，形成复杂的基因调控网络，并以这个网络进行抗凋亡、细胞增殖和免疫激活的参与作用，这一过程使其在免疫和炎症反应中发挥重要作用[12-14]。当NF-κB 结合位点受到免疫和其他激活因子刺激时，IκB 通过细胞膜被激活，磷酸化为IκB，然后与泛素结合[15-16]。高表达的NF-κB与鳞状细胞癌的严重程度呈正相关，可作为临床诊断的分子标记鳞状细胞癌。在皮肤鳞状细胞癌早期，由于NF-κB 的快速增加促进了肿瘤细胞的增殖或增强了肿瘤细胞与下游分子的竞争能力，临床检测的NF-κB 表达量明显高于正常皮肤[17-18]。

本研究结果显示，癌组织组的NF-κB p65 蛋白表达阳性率高于癌旁组织组，差异有统计学意义（P<0.05）。患者不同性别、年龄情况下的NF-κB p65蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的表达情况比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Ⅲ～Ⅳ期患者的NF-κB p65 蛋白表达阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差异有统计学意义（P<0.05）。低分化患者的NF-κB p65 蛋白表达阳性率高于高中分化患者，差异有统计学意义（P<0.05）。可见临床分期越高，NF-κB p65 蛋白阳性率越高；分化程度越低，NF-κB p65 蛋白阳性率越高。

NF-κB 中最常见的异源二聚体由p50 和p65两个亚基组成。癌组织组NF-κB p65 蛋白阳性表达率高于癌旁组，提示皮肤癌组织组织中NF-κB p65蛋白高表达；且临床Ⅲ～Ⅳ期皮肤癌组织组织中NF-κB p65 阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ期皮肤癌组织组织，提示随着皮肤鳞状细胞癌临床分期的发展，NF-κB p65 阳性表达率明显增高。NF-κB p65 在低分化皮肤鳞状细胞癌中的阳性表达率高于高、中分化皮肤鳞癌，说明NF-κB p65 的阳性表达随皮肤鳞状细胞癌分化程度的升高而降低。NF-κP65 蛋白在皮肤鳞状细胞癌中高表达，且随着疾病的加重表达增强，与相关研究结果[19-21]类似，认为其可作为判断病程和治疗的新指标，具有重要的研究意义，值得临床参考。

综上所述，NF-κB p65蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的表达高于在癌旁正常组织，且皮肤鳞状细胞癌的分期越高，则NF-κB p65 蛋白表达越高；皮肤鳞状细胞癌的分化程度越低，则NF-κB p65 蛋白表达越高。而NF-κB p65 蛋白表达和患者的年龄、性别之间无明显的关系。

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Expression analysis of NF-κB p65 protein in skin squamous cell carcinoma

LI Juan1 ZHANG Zhi-chao1 LIU Hong-fu2 SHEN Xiao-ping3
1.Department of Dermatology,Guiyang Center for Disease Control and Prevention,Guizhou Province,Guiyang 550002,China;2.Department of General Surgery,the First Affiliated Hospital of Gannan Medical University,Jiangxi Province,Ganzhou 341000,China;3.Department of Dermatology,Affiliated Hospital of Guizhou Medical University,Guizhou Province,Guiyang 550002,China

[Abstract]Objective To investigate the expression of NF-κB p65 protein in skin squamous cell carcinoma.Methods The pathological sections of 50 patients with skin squamous cell carcinoma treated in the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University and the First Affiliated Hospital of Gannan Medical University from January 2018 to December 2019 were selected as cancer tissue group,and 50 cases of paracancerous tissue was selected as control group.The expression of NF-κB p65 protein was compared between the two groups.The relationship between the expression of NFκB p65 protein in skin squamous cell carcinoma and the patient′s gender,age,clinical stage and degree of differentiation was analyzed.Results The positive rate of NF-κB p65 protein expression in the cancer tissue group was higher than that in the paracancerous tissue group,and the difference was statistically significant(P<0.05).There was no statistically significant difference in the expression of NF-κB p65 protein in skin squamous cell carcinoma under different genders and ages(P>0.05).The positive rate of NF-κB p65 protein expression in patients with stage Ⅲ-Ⅳwas higher than that of patients with stage Ⅰ-Ⅱ,and the difference was statistically significant(P<0.05).The positive rate of NFκB p65 protein expression in poorly differentiated patients was higher than that in highly differentiated patients,and the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion The expression of NF-κB p65 protein in skin squamous cell carcinoma is higher than that in paracancerous tissue,and the higher the stage of skin squamous cell carcinoma is,the higher the expression of NF-κB p65 protein is,and the lower the degree of differentiation of skin squamous cell carcinoma is,the higher the expression of NF-κB p65 protein is.However,there is no significant relationship between the expression of NF-κB p65 protein and the age and gender of the patients.

[Key words]NF-κB p65 protein;Skin squamous cell carcinoma;Degree of differentiation;Paracancerous tissue;Cancer tissue

[基金项目]贵州省卫生健康委科学技术基金项目（gzwjkj2020-1-089）

[作者简介]李娟（1980-），硕士，副主任医师，从事皮肤病、性病防治工作

（收稿日期：2020-11-20）