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肌酐（creatinine，CREA）作为高能量化合物磷酸肌酸的分解物，由肌肉组织及神经组织释放至血液中，血液中的CREA经肾小球滤过后大部分不被再吸收，而是直接由尿排出体外。血清中的CREA浓度会因肾功能不全、尿毒症而上升，CREA作为肾功能的监测指标在肾脏疾病的诊断及治疗过程中具有重要意义[1]。

酚磺乙胺又名止血敏，主要用于血小板功能不全引起的出血、胃肠道出血、脑出血及泌尿道出血等多种出血的预防和治疗[2]。已有文献资料报道称[3-4]，使用酚磺乙胺的患者在通过酶法检测血清CREA所得出的结果会大幅度波动，与患者的临床表现有较大差异，导致医生与患者对检验结果的准确性提出质疑，且不准确的结果还会造成对患者病情的误判，从而耽误治疗。通常医生和患者会误以为是酚磺乙胺的药理作用，也有可能是酚磺乙胺对酶法检测CREA存在药物干扰所导致。酚磺乙胺在临床中应用非常广泛，因此它的干扰效应应该充分被临床医生和检验人员认识和关注。

目前关于酚磺乙胺对酶法检测血清CREA干扰的具体研究报道少见，且其干扰原理一直有待阐明。本研究参照美国临床和实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）EP7-A2文件[5]和文献生物变异[6]推荐的干扰实验方法，通过体外干扰实验，探讨酚磺乙胺对酶法检测CREA的干扰效应，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2019年10月于贵州省人民医院就诊患者的新鲜血清，配置成高、低浓度CREA混合血清各一份。纳入标准：①近期未用药治疗的体检者标本；②标本无黄疸、无溶血；③按EP7-A2的要求，各分析物的测试浓度是医学决定水平的高值或异常值。

1.2 仪器

美国雅培C16000全自动生化分析仪。

1.3 试剂

①酚磺乙胺注射液（国药集团容生制药有限公司，国药准字H20057257），其主要成分为酚磺乙胺，规格：0.5 g/2 ml，根据《中华人民共和国药典》[7]及其药代动力学特性，本实验采用0.3 g/L酚磺乙胺的最高血药浓度。②酶法CREA试剂及配套校准品（日本积水公司，批号：840RCQ）。

实验前对检测仪器进行精密度评估，采用试剂原装标准品对CREA进行校准并进行定期质控，观察检测方法的稳定性[8]，室内质控品由美国伯乐公司（BIORAD）生产的多项目临床化学定值质控血清，两个水平，批号为26421、26422。

1.4 方法

1.4.1 干扰筛选实验 ①取酚磺乙胺注射液一瓶（浓度为250 g/L）与生理盐水按照1∶50比例配置成酚磺乙胺浓度为5 g/L的实验样本（原液），将原液与CREA浓度440μmol/L左右的混合血清按照1∶9的比例配置成酚磺乙胺浓度为500 mg/L的溶液，同时用生理盐水和CREA血清按同比例混合为对照样本，分析酚磺乙胺对酶法检测CREA是否存在干扰。②按交互顺序分析测试实验样本和对照标本并记录结果。

1.4.2 干扰剂量效应实验预稀释：取一支酚磺乙胺溶液，配置成药物浓度为5000.00、3000.00、1500.00、750.00、375.00、187.50、93.80、46.90、23.50及0.00 mg/L的溶液，将高、低两种不同浓度的CREA混合血清与上述方法配置的不同浓度酚磺乙胺的溶液按照9∶1的比例配置成干扰物浓度为500.00、300.00、150.00、75.00、37.50、18.75、9.38、4.69、2.35 mg/L及0.00 mg/L的药物干扰剂量效应测试样本（实验组）。对照组将酚磺乙胺注射液换成等体积生理盐水，其他步骤同上。

1.4.3 干扰实验的测量根据生物学变异质量规范中允许总误差（Tea%）和临床专家的意见以CREA偏差6.9%作为干扰实验的可接受标准（dmax），实验室CREA批内标准差（s）由基础实验样本重复测定10次计算得出，计算出最大允许干扰值（dmax）与批内标准差（s）的比值dmax/s，采用95%置信区间（95%CI），查EP7-A2文件附表得出干扰筛选实验的重复测量次数为3次。干扰剂量效应实验，2个不同系列的实验样本和对照样本分别检测血清CREA，每个标本重复检测3次[9]。

1.4.4 干扰效应分析干扰筛选实验：计算干扰值（dabs）和dabs 95%CI，dabs为干扰实验样本的均值减去对照样本均值的差值，dabs 95%CI=dabs±t0.975（n-1）×（2s2/n）1/2，干扰的判断标准为dabs 95%CI最低值＞dmax时认为存在药物干扰[10]。干扰剂量效应实验：将不同浓度的干扰物实验样本检测的均值减去对照样本均值得到单独的dabs值，用SPSS 22.0软件制作X轴（不同干扰物浓度）和Y轴（单独的dabs）的散点图，绘制干扰剂量实验的效应图。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示。对剂量效应实验中不同方法的干扰效应与酚磺乙胺注射液浓度进行非线性回归分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 干扰筛选实验结果

根据干扰实验的测量，CREA累积批内标准差（s）：1.39，CREA偏差6.9%即dmax=403.44μmol/L×6.9%=27.84μmol/L，dmax/s＞3，根据EP7-A2文件附表得出单个标本重复检测次数为3次，含酚磺乙胺浓度（50 mg/L）实验组均值：166.28μmol/L，对照组均值：403.44μmol/L，dabs=实验组均值-对照组均值=-237.16μmol/L，dabs 95%CI=（-237.16±1.82）μmol/L，∣dabs 95%CI∣＞dmax。

2.2 干扰剂量效应实验结果

酚磺乙胺浓度0.00～500.00 mg/L范围内所对应高低CREA样本的dabs值见表1，剂量效应回归曲线分析图见图1～2。低值CREA（68.50μmol/L）样本，用计算机得出干扰剂量效应回归方程显著性检验F=406.080，R2=0.981，P=0.000，酚磺乙胺浓度在1.174 mg/L以下时dabs＜dmax；高值CREA（386.37μmol/L）样本，干扰剂量效应回归方程检验F=1483.642，R2=0.995，P=0.000，酚磺乙胺在9.727 mg/L浓度以下时dabs＜dmax，随着血中酚磺乙胺浓度的升高，血清CREA测定结果低于真实结果的程度越大。

表1 高、低系列干扰剂量效应样本对应的dabs值

图1 酚磺乙胺对低浓度CREA样本的干扰剂量效应回归曲线

图2 酚磺乙胺对高浓度CREA样本的干扰剂量效应回归曲线

3 讨论

CREA是磷酸肌酸的代谢终产物，由肾小球排出，是临床评价肾功能最简单、最广泛的肾功能血清指标，血清CREA浓度受肌肉质量、肾小管分泌物和炎症等多种因素的影响[11-12]。本研究结果提示，系统偏差、不精密度和干扰是导致患者检测值与真实值之间差距的主要原因。我国临床实验室检测CREA的方法主要有两大类：苦味酸法和酶法[13-15]。苦味酸法反应为非特异性反应，由于不稳定因素较多，准确性相对较差，苦味酸法现已被酶法取代。在本实验中，选择的是日本积水酶法CREA试剂，其检测原理包括如下。反应一：标本中的CREA在肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、过氧化氢酶的作用下被分解成水和氧；反应二：标本中的CREA在CREA酶的作用下生成肌酸，肌酸在肌酸酶的作用下生成肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生成过氧化氢，过氧化氢与过氧化物酶的存在使N-乙基-N-磺丁基-m-甲苯安钠与4-氨基安替匹林氧化缩合产生醌色素。通过测定醌色素的吸光度，求出CREA的浓度。

本实验室为ISO 15189认可实验室，运行着一套完整且严格的质量管理体系，同时CREA项目全年参加卫生管理部门室间质评，结果成绩优异，故在本实验中CREA的检测值与真实值之间的差距是由药物干扰所导致。临床实验室研究干扰实验是用来衡量方法的准确度，即在加入一定浓度的干扰物质后来明确干扰物质对结果的差异。干扰物质的浓度不同，造成的结果误差也不同。根据EP7-A2文件[5]和文献生物变异[6]提供的方案将本研究分为干扰筛选实验和干扰剂量效应实验，先利用干扰筛选实验在高浓度下对干扰物作初步筛选，在确定酚磺乙胺为干扰物质后，再进一步利用干扰剂量效应实验评估干扰物浓度与干扰程度的关系，分析酚磺乙胺对CREA项目造成干扰的原因。干扰剂量效应实验选取的药物浓度是依据酚磺乙胺的动力学特点尽可能选择药物进入人体后所能够达到的峰值水平，模拟药物浓度在人体的相对浓度，从而保证实验的真实性、准确性。干扰实验的临床dmax并无明确指标，在EP7-A2文件[5]和文献生物变异[6]中提出了一些参考的依据，包括部分分析物的准确度要求（总允许误差）、基于生物学变异的质量规范以及临床专家的意见等。本研究综合以上各因素确定选用基于生物学变异的质量规范中允许总误差的期望值作为干扰实验dmax。

本实验结果显示，干扰筛选实验dabs=-237.16μmol/L，dabs 95%CI为-237.16±1.82μmol/L，∣dabs95%CI∣＞dmax，提示酚磺乙胺对酶法检测血清CREA存在严重的负干扰。查阅文献并结合CREA酶法原理发现[16]，血清中的CREA是在酶的催化作用下生成H2O2，H2O2又继续参与Trinder反应从而形成红色醌亚胺化合物，通过比色最后得出结果。H2O2酶的特异性较低，一些还原性物质可与色原性物质竞争H2O2，从而干扰氧化酶法的测定。酚磺乙胺是一种强还原性药物，可促使酶法反应过程中的过氧化氢消耗，从而抑制酶法反应过程中的色酚氧化显色，造成CREA测定假性降低而产生负干扰，导致医生对患者肾功能的评估受到影响[17-18]。干扰剂量效应实验分析结果得出，酚磺乙胺药物浓度越高对CREA检测结果的负干扰越大，在低、高浓度CREA样本中，酚磺乙胺的浓度分别在9.73和1.17 mg/L以上时，负干扰程度高于预设的dmax 95%CI。

由酚磺乙胺药代动力学特性可知，静注后1 h血药浓度可达到高峰，作用持续4～6 h，平均峰值300 mg/L，血液中半衰期为5 h，8个半衰期排泄99.61%。根据酚磺乙胺浓度与CREA干扰效应曲线方程得出酚磺乙胺对CREA能够产生干扰所需的最小浓度为血药峰值浓度的0.39%～3.24%，为尽量避免酚磺乙胺对CREA检验结果的干扰，建议使用酚磺乙胺的患者检测CREA时，应在用药后至少48 h再进行抽血检测。而对于肾功能不全的患者，酚磺乙胺代谢所需的时间会更长，需要更长时间关注其对检验结果所造成的干扰。

鉴于酚磺乙胺对检测血清CREA时造成的干扰，建议使用酚磺乙胺患者的在进行肾功能检测时务必告知医生服用此药物的情况，必要时可进行血药浓度检测或等体内药物代谢完全后再进行相关检测[19-20]。作为实验室医生，当发现患者使用酚磺乙胺或者患者的CREA结果与上次相比较有明显下降的趋势时，要考虑可能是药物干扰影响了检测结果，必要时可采取其他的检测方法进行复检，以便对患者肾功能做出正确客观的评价。

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