乳腺癌是女性最为常见的恶性肿瘤之一，具有发病率高、死亡率高的特点，严重威胁女性的身体健康[1]。其中三阴性乳腺癌（TNBC）是一种特殊的乳腺癌亚型，是指孕激素受体（PR）、雌激素受体（ER）以及人类表皮生长因子受体-2（Her-2）三种受体均为阴性的乳腺癌[2]。TNBC在所有乳腺癌类型中的占比为10%～20%，其生物学行为和临床病理特征均存在一定的特殊性，癌细胞的侵袭性强，远处转移的风险更高[3]。加上TNBC患者特殊的免疫组化分型，使得内分泌治疗、靶向治疗的效果不佳，因此患者的预后更差[4]。近年来，乳腺癌的高危筛查逐渐受到临床的重视。乳腺癌易感基因1（BRCA1）和BRCA2是遗传性乳腺癌的主要易感基因之一[5]。BRCA1/2基因突变者发生乳腺癌的风险远高于未发生突变的人群。也有学者发现，BRCA1/2基因突变与TNBC的形成和发展有一定的关联性[6]。因此了解TNBC患者的BRCA1/2基因突变状态，对于其防治和预后评估均有积极的意义。本研究选取2017年4月～2019年4月我院收治的55例TNBC患者作为研究对象，探究分析其BRCA1/2基因突变状态及与临床特征的关系，以期为临床诊治提供一定的参考依据。

选取2017年4月～2019年4月我院收治的55例TNBC患者作为研究对象，均为女性，年龄68～25岁，平均（47.5±6.4）岁；美国癌症联合会（AJCC）的TNM分期[7]：Ⅰ期22例，Ⅱ期25例，Ⅲ期8例；病理类型分布情况：浸润性导管癌28例，浸润性小叶癌19例，其他类型8例。

病例入选标准：①经临床诊断符合乳腺癌的相关标准[8]，并经病理学检验证实者；②免疫组化显示ER（-）、PR（-）、Her-2（-）者；③临床资料完整者；④自愿参与本研究，并签署知情同意书者；⑤排除合并有其他恶性肿瘤者。

1.2.1 逆转录聚合酶链反应 将55例TNBC患者的肿瘤组织经石蜡包埋处理后，采用QIAamp DNA FFPE的组织试剂盒（北京华夏远洋科技有限公司，生产批号：20170351）进行提取其中的DNA。提取完后，将其作为模板，置于无菌PCR管中，进行逆转录聚合酶链反应（PCR）进行扩增，根据相关文献合成引物。PCR体系总体积25μl，其中模板DNA 100 ng，含Mg2+的10×PCR缓冲液（上海康朗生物科技有限公司，生产批号：20170812）5μl，10 mmol/L的dNTP（上海康朗生物科技有限公司，生产批号：20170509）0.8μl、Taq DNA聚合酶（上海康朗生物科技有限公司，生产批号：20170525）2 U以及上下游引物各0.5μmol/L。PCR条件：94℃条件下进行预变性，然后以94℃5 min、94℃45 s、57℃30 s进行30个循环。完成后在72℃条件下进行延伸10 min。

1.2.2 DNA序列测序 通过琼脂凝胶对获得的PCR产物进行电泳鉴定，确定单一亮条带后进行纯化回收，并应用DNA序列测序法对PCR产物进行正反向双端测序。

1.2.3 信息处理 将测序结果与GenBank的野生型序列进行对照，分析BRCA1/2基因的突变情况。根据人类基因组变异学会的规则对基因突变的碱基进行命名。并将基因突变的位点与ClinVar数据库、BRCA Exchange数据库进行比较，以明确是否为新的突变。

分析55例TNBC患者BRCA1/2基因的突变情况，根据基因测序对比结果中是否存在基因突变，将其分为突变组和未突变组，比较分析两组患者的临床资料。

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，符合正态分布的计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，不符合正态分布者转换为正态分布后行统计学分析；计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

55例TNBC患者中共计检测出9例BRCA1/2基因突变，突变总检出率为16.36%；其中BRCA1基因突变6例，BRCA2基因突变3例。1例BRCA1基因突变c.4779_4780delAC的缺失移码突变为新发现的致病突变（表1）。

突变组和未突变组患者的年龄、月经状态、肿瘤大小、病理类型、淋巴结转移、临床分期比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。突变组患者的乳腺癌家族史比例高于未突变组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

TNBC患者的免疫组织分型特殊，由于ER、PR、Her-2三种受体的缺失，使其失去了相应的3个治疗靶点，因此治疗的难度高，预后不良[9]。而TNBC的发生发展是原癌基因、抑癌基因等多基因共同作用的结果。原癌基因突变后的激活、抑癌基因的突变或缺失，打破了细胞增殖的正常调控机制，使得细胞进入恶性增殖的状态[10]。而BRCA1/2均是临床公认的抑癌基因之一，能激活DNA损伤的修复并参与细胞周期的调控，从而抑制乳腺癌的形成。其中前者位于染色体chr17上，后者位于chr13上，两者均与遗传性乳腺癌的发生密切相关[11]。临床数据[12]统计显示，亚洲人群的BRCA1/2突变发生率在20%以下。本研究结果显示，55例TNBC患者中共计检测出9例BRCA1/2基因突变，突变总检出率为16.36%，基本符合既往报道[13]。其中BRCA1突变6例，BRCA2突变3例，BRCA1突变的比例要高于BRCA2。所有的突变均为外显子突变，有2例BRCA2和5例BRCA1突变均由于碱基的改变提前产生终止信号，通过截短蛋白或无义介导的mRNA衰变导致BRCA蛋白质正常生物功能的丧失，使其失活，进而影响受损DNA的修复，参与TNBC的形成[14]。BRCA1基因中的c.5470_5477delATTGGGCA突变在多个中国家族遗传性乳腺癌、早发性三阴性乳腺癌患者中检出，被认为是中国人群特有的致病变异，与家族遗传性乳腺癌、卵巢癌发生发展相关[15]。同时，本研究还检测出BRCA1基因中1个意义未明位点c.5402G＞A，这一错义突变，导致1801号氨基酸编码由甘氨酸的密码子突变为天冬氨酸，可能会影响蛋白结构或功能，但由于这种突变较为罕见，目前尚无足够证据确定该变异致病性或良性。而BRCA1基因中c.4779_4780delAC突变在数据库中暂无记录，可视为新的突变位点，VEP生信注释软件预测该变异对蛋白质影响较大，并综合受检者具体情况，综合判定该变异的临床意义为可能致病。BRCA2基因的c.5164_5165delAG缺失移码突变可能会影响BRCA2蛋白活性和功能，影响携带者罹患乳腺癌或卵巢癌[16]。BRCA2基因的错义突变c.7975A＞G不是常见人群的良性多态性，但目前临床意义不明确。

本研究还对BRCA1/2基因突变与TNBC患者的临床特征进行了分析，结果显示突变组患者乳腺癌家族史比例高于未突变组，差异有统计学意义（P＜0.05）。这一结果验证了张丹峰等[17-18]的研究，提示BRCA1/2基因是与家族性乳腺癌发病关系最为密切的两个易感基因，BRCA1/2基因突变容易出现乳腺癌家族聚焦，但两组患者的年龄、月经状态、肿瘤大小、病理类型、淋巴结转移、临床分期比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。这与朱亚宁等[19]的研究中突变组的分期高、淋巴结转移率高有所不同，可能是由于本研究纳入的样本均为TNBC，且样本量较少有关，故而结果存在偏倚。因此，今后还需临床进一步的大样本研究，以探讨BRCA1/2基因突变与TNBC患者临床特征之间的关系。

综上所述，TNBC患者BRCA1/2基因突变的发生率较高，且BRCA1/2基因突变者的乳腺癌家族史的比例更高。

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Analysis of BRCA1/2 gene mutation status and clinic characteristics in patients with triple-negative breast cancer

WANGYi-nuo JIN Feng▲
Department of Breast Surgery,the First Hospital of China Medical University,Liaoning Province,Shengyang 114000,China

[Abstract]Objective To analyze the mutation status and clinic characteristics of breast cancer susceptibility gene(BRCA)1/2 in patients with triple-negative breast cancer(TNBC).Methods From April 2017 to April 2019,55 patients with TNBC treated in our hospital were selected as the research objects.Reverse transcription polymerase chain reaction (PCR)method and DNA sequence sequencing method were used to determine the mutation of BRCA1/2 gene on the pathological tissue sections of all patients.Analyze the characteristics of BRCA1/2 gene mutation in TNBCpatients,and divide them into mutation group and non-mutation group according to whether there are gene mutations,and the clinical data of the two groups of patients were compared and analyzed.Results A total of 9 cases of BRCA1/2 gene mutation were detected in 55 patients with TNBC,including 6 cases of BRCA1 gene mutation and 3 cases of BRCA2 gene mutation,the total detection rate was 16.36%.There were no significant differences in the age,menstrual status,tumor size,pathological type,lymph node metastasis,and clinical stage between the mutation group and the non-mutation group (P＞0.05).The proportion of breast cancer family history in the mutation group was higher than that in the non-mutation group,and the difference was statistically significant(P＜0.05).Conclusion The incidence of BRCA1/2 gene mutation is higher in TNBC patients,and the proportion of breast cancer family history in patients with BRCA1/2 gene mutation is higher.

[Key words]Triple-negative breast cancer;Breast cancer susceptibility gene;Gene mutation;Clinical features

（收稿日期：2020-02-17）