Article Info

延胡索咀嚼片（CorydalisRhizomaChewableTablets）是由醋延胡索、枯矾、海螵蛸（去壳）组成的。原方安胃片，为《中国药典》2015年版一部收载品种[1]。具有行气活血、制酸止痛的功效，用于气滞血瘀所致的胃脘刺痛、吞酸嗳气、脘闷不舒，胃及十二指肠溃疡、慢性胃炎见上述症候者[2]。本方原为吞服片剂，每次服用5～7 片，服用剂量大，患者依从性较差，因此本研究将其剂型改为咀嚼片，并验证了新剂型疗效稳定、方便服用。方中君药为延胡索（Corydalis Rhizoma），为罂粟科植物延胡索的块茎，性温、味苦，归肝、心、脾经，功效为活血、行气、止痛[3]。现代药理作用研究表明，延胡索具有抗溃疡作用，对胃及十二指肠溃疡有可靠的疗效[4]。延胡索乙素可安定中枢，尤适用于疼痛引起的失眠[5]。因此本研究利用延胡索乙素为对照品，采用薄层色谱法对延胡索咀嚼片进行定性鉴别[6-7]，并采用高效液相色谱法（HPLC）测定延胡索咀嚼片中延胡索乙素含量[8-9]，结果表明，上述两种方法操作简便、快速、准确、重现性好、结果直观，可用于该产品的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津LC-10Atvp 高效液相色谱仪；Kromasil-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；N-2000 色谱工作站；ZF-2 型三用紫外分光光度仪（上海市安亭仪器厂）；十万分之一分析天平（瑞士）；KQ3200 超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

延胡索乙素对照品（批号：110726-201819）采购自中国食品药品检定研究所；乙醇、甲醇为色谱纯；水为纯水；延胡索咀嚼片（自制）；其余均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 延胡素咀嚼片薄层鉴别

2.1.1 对照品溶液制备取延胡素乙素对照品2.08 mg，精密称定，加甲醇50 ml 溶解，即得。

2.1.2 供试品溶液制备取延胡索咀嚼片3 g，粉碎，药粉加甲醇50 ml，超声30 min 后，滤过，蒸干滤液，残渣用水溶解后，以浓氨液调至pH 值为碱性，乙醚提取3 次，每次10 ml，合并乙醚液，蒸干，用甲醇1 ml溶解，即得。

2.1.3 阴性溶液制备取处方中除延胡索外的两味药材，按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.1.4 薄层色谱条件分别吸收上述溶液10 μl，点于同一硅胶G 板上，以正己烷-氯仿-甲醇（7.5：4：1）为展开剂，展开，晾干后，置碘缸中约3 min 后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外灯下（365 nm）检视，在供试品色谱中，与对照品溶液相同的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性液无斑点，结果如图1所示。

图1 延胡索咀嚼片薄层色谱图

1：延胡索乙素对照品；2：供试品溶液；3：阴性对照液

2.2 延胡素咀嚼片中延胡素乙素的含量测定

2.2.1 色谱条件采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，Hypersil BDS C18（5 μm，4.6 mm×150 mm），流动相为甲醇-0.1%磷酸（60：40）（用三乙胺调节pH 至6.0），体积流速1.0 ml/min，检测波长为280 nm，进样量为10 μl。典型色谱图具体见图2。

图2 典型色谱图

2.2.2 对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成41.6 μg/ml 的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备取延胡索咀嚼片30 片，研细，精密称定，采用以下三种方法分别进行处理，作为供试品溶液，进行测定，结果进行比较。

方法1[10]：取2 g，精密称定，置索氏提取器中，加入乙醚适量，浓氨液2 ml 浸泡过夜，加热回流提取，取乙醚液，水浴蒸干，残渣加甲醇1 ml 溶解后转移至10 ml 容量瓶中，定容后，以0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

方法2[11]：置具塞三角瓶中，精密加入浓氨试液-甲醇（1：15）混合溶液50 ml，称定重量，冷浸1 h 后，回流提取60 min，放凉，精密称定，以浓氨试液-甲醇（1：15）补足减少重量，滤过后，取续滤液25 ml 蒸干，残渣加水30 ml 溶解，并移至分液漏斗中，加盐酸调pH 值至2～3，用石油醚（60～90℃）洗涤2 次，每次20 ml，弃去石油醚层。水层加浓氨试液调pH 值至9～10，用氯仿提取4 次，30 ml/次，合并氯仿层，用水20 ml 洗涤，氯仿层置水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 ml 容量瓶中，定容后，以0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

方法3[12]：精密加水50 ml，水浴加热温浸1 h 使溶解，用氨水调节pH 值至10 后，至分液漏斗中，乙醚萃取4 次（30、30、20、20 ml），合并乙醚液，水浴挥干，残渣加甲醇定容至10 ml，摇匀，滤过，以0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

取以上三种不同方法制备的供试品溶液各10 μl，分别注入高效液相色谱仪，经实验观察结果显示，方法1 中成分分离较好，延胡索乙素含量较高；方法2 分离较好，但延胡索乙素含量低；方法3 种杂质成分多，不能完全分离。比较决定采用方法1 的处理方法作为样品溶液的制备方法。

2.2.4 阴性对照溶液的制备取处方中除延胡索外的两味药材，按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.2.5 线性关系考察精密吸取0.1664 mg/ml 延胡索对照品溶液5、10、12.5、15、20 μl，分别注入高效液相色谱仪，以浓度为横坐标，对照品锋面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程y=13794x+4042.9，r=0.9997（n=5），结果显示，在0.0832～0.4160 μg 内线性关系良好。

2.2.6 精密度试验考察精密吸取对照品溶液10 μl，按上述色谱条件，连续进样（n=6），计算色谱峰面积，对照品及供试品RSD 分别为1.01%和1.79%，结果符合规定。

2.2.7 重复性试验考察取延胡索咀嚼片，研细，精密称定6 份，按“2.2.3 供试品溶液的制备”项下的方法制备，分别精密吸取10 μl 注入高效液相色谱仪。测得延胡索乙素含量RSD 为1.00%，重复性良好，结果符合规定。

2.2.8 稳定性试验考察取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h 进样，结果表明，10 h 内稳定，RSD为1.30%，结果符合规定。

2.2.9 回收率试验考察分别取样品6 份，每份1 g，精密称定，加入一定量的延胡索乙素的对照品溶液，按“2.2.3 供试品溶液的制备”项下制备方法制备，进样，测定含量，并计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验测定结果（n=6）

2.2.10 样品测定取3 批次延胡索咀嚼片，按上述供试品制备方法，制备延胡索咀嚼片供试品溶液，分别精密吸取10 μl 注入HPLC 进行分析，记录峰面积，计算测得各批次延胡索乙素的含量，结果见表2。根据上述测定结果，暂定本品每片含延胡索以延胡索乙素计算，不得少于1.71 mg。

表2 延胡索咀嚼片中延胡索乙素含量测定结果

3 讨论

3.1 指标成分选择

延胡索咀嚼片中君药为延胡索，且药理活性强[13]，主要指标成分为延胡索乙素，以HPLC 测定延胡索咀嚼片中延胡索乙素含量[14]，方法简单、专属性强、准确度高、重现性良好，可作为延胡索咀嚼片的质量控制依据。

3.2 提取条件优化

查阅文献对延胡索咀嚼片的提取条件进行优化[15]，对比回流提取法与索氏提取法的提取效率，结果提示，索氏提取法提取效率高，提取完全，故采用索氏提取法进行提取。同时对提取溶媒进行考察，对比氨水及乙醚混合液[16]、氨水及氯仿混合液两种溶媒[17]，结果提示，氨水及乙醚混合液提取效率较高，故选用氨水及乙醚混合液作为提取溶媒。

综上所述，对延胡索咀嚼片进行质量标准研究，采用薄层色谱法对延胡索咀嚼片中对延胡索进行定性鉴别，采用HPLC 对处方中的延胡索乙素进行含量测定，该方法操作简单、重现性好、专属性高，可作为含量测定的指标。

[参考文献]

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京：化学工业出版社，2015：139，877-878.

[2]赵丽沙，董宇，寿旦.延胡索生物碱类化学成分及质量控制研究进展[J].中华中医药学刊，2017，35（2）：299-302.

[3]杨波，纪宏宇，郑东友，等.中药延胡索的炮制工艺和药理作用的研究进展[J].药学实践杂志，2017，35（2）：112-115.

[4]颜晶晶，俸珊，何丽娜，等.延胡索乙素对映体对人肝微粒体细胞色素P450 酶抑制作用机制研究[J].中草药，2015，46（4）：534-540．

[5]何晓凤，张晶，张梅.延胡索化学成分、药理活性及毒副作用研究进展[J].上海中医药杂志，2017，51（11）：97-100.

[6]张丹，王昌利，卜雕雕，等.高效液相色谱法同时测定延胡索中5 种生物碱含量的方法学研究[J].中南药学，2018，16（12）：1759-1762.

[7]黄传奇，熊鑫，马浩然，等.醋延胡索饮片及其混伪品零余子的系统鉴别[J].时珍国医国药，2018，29（6）：1363-1366.

[8]杜颖川.高效液相色谱法对复方健胃分散片中延胡索乙素的含量测定及分析[J].中国民康医学，2018，30（21）：79-81.

[9]胡珂，何忠臻，彭华胜，等.延胡索块茎中延胡索乙素含量分布的研究[J].中国现代中药，2018，20（7）：825-828.

[10]龚青，周蒂，王碧娟.HPLC 法测定延胡索中延胡索乙素的含量[J].中国现代应用药学，2000，17（4）：177-179.

[11]赵君颖.胃安舒颗粒质量标准的研究[J].中医学报，2007，22（5）：24-25.

[12]房方，丁选胜.延胡索药材中延胡索乙素的含量测定[J].现代中药研究与实践，2005，19（1）：54-56.

[13]李凯，杨靖，彭晶晶，等.中药延胡索研究进展[J].陕西农业科学，2018，64（6）：93-96.

[14]冯自立，赵正栋，刘建欣.延胡索化学成分及药理活性研究进展[J].天然产物研究与开发，2018，30（11）：2000-2008.

[15]唐逸丰.延胡索化学成分与药理作用研究概况[J].中国临床研究，2018，10（23）：144-146.

[16]接强，贺吉香.延胡索提取工艺研究[J].辽宁中医药大学学报，2017，19（2）：49-52.

[17]徐忠坤，陈广波，殷洪梅，等.延胡索药材提取工艺研究[J].世界科学技术-中医药现代化，2015，17（11）：2318-2321.