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香麻寒喘贴是由麻黄、芥子、丁香、细辛、矮地茶、生姜六味中药材制成的贴膏剂，具有宣肺平喘、化痰止咳的作用，用于儿童轻、中度哮喘急性发作期寒饮停肺证的辅助治疗[1-2]。近年来，贴剂以其独特的优势逐渐得到人们的重视，其不仅具有良好的靶向和性价高的生物利用度，而且还可随时给药，简单方便[3-4]，人们不断地对贴剂进行改进，在研究如何促进其渗透吸收、制备工艺等方面也做了很多相关工作[5-7]。贴剂的临床应用[8-9]非常广泛，现已普遍用于肩周炎[10]、颈椎病[11-12]、哮喘[13-14]、镇痛[15-16]等。为了保证贴剂的疗效与质量，本文对香麻寒喘贴中盐酸麻黄碱含量[17-20]进行测定，并对该含量测定方法进行方法学验证。实验显示，该方法简单，可以有效地检测香麻寒喘贴中盐酸麻黄碱的含量，准确地控制贴剂有效成分，保证产品质量，现报道如下。

1 仪器与材料

Agilent 1260高效液相色谱仪（紫外检测器，型号：G1314F，美国安捷伦公司），MS105DU型电子天平。盐酸麻黄碱（批号：171241-201508）对照品来源于中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈为色谱纯，来源于美国天地有限公司；水为纯化水，其他试剂均为分析纯。香麻寒喘贴样品来源于翔宇药业股份有限公司，批号160601、160602、160603。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为 Thermo C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为0.01 mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调节pH值至2.5）-甲醇（96︰4），检测波长 210 nm，流速 1.0 mol/min，柱温为25℃，进样量为5 μl。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于1000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液的制备取160601批样品6片，精密测量，除去盖衬，置于带塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，浸泡过夜。超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤即得。

2.2.2 对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，用甲醇溶解，制成500 μg/ml的盐酸麻黄碱作为对照品储备液。用甲醇稀释，制成50 μg/ml的盐酸麻黄碱作为对照品溶液。

2.2.3 阴性供试品溶液制备取不含麻黄药材的阴性样品6片，精密测量，同供试品溶液制备处理方法，制成阴性样品溶液。

2.3 专属性试验

分别精密量取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各5 μl，用高效液相色谱仪测定（图1）。在该色谱条件下阴性样品对样品峰无干扰；主峰保留时间在22 min左右，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算＞1000，提示该方法专属性良好。

图1 HPLC色谱图

A.对照品溶液；B供试品溶液；C阴性样品溶液

2.4 盐酸麻黄碱溶液线性关系试验

精密吸取对照品储备液适量分别置于10 ml量瓶中，加甲醇溶液稀释制成浓度分别为15.20、30.39、50.65、60.78、75.98、91.17 μg/ml的线性溶液，依法测定。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。由试验结果可知，盐酸麻黄碱含量为15.20～91.17 μg/ml，线性方程为 A=11.576C＋2.3606，r=0.9997 （n=6）（表 1），峰面积和浓度均呈现良好线性关系（图2）。

表1 盐酸麻黄碱溶液线性关系试验

图2 盐酸麻黄碱线性关系图

2.5 盐酸麻黄碱溶液精密度试验

取对照品溶液，重复测5次，并记录色谱图。结果显示，峰面积的RSD值为1.13%（表2），提示该方法的系统精密度良好。

表2 盐酸麻黄碱精密度试验

2.6 盐酸麻黄碱重复性试验

精密称取样品（批号：160601）6份，按供试品制备方法制备供试品溶液，依法测定，计算含量为3.13 mg/100 cm2，含量 RSD 为 1.10%（表 3），提示该方法的重复性较好。

表3 盐酸麻黄碱溶液重复性试验

2.7 盐酸麻黄碱溶液稳定性试验

将供试品溶液于室温条件下放置12 h，每隔1 h测定1次。结果显示，在室温条件下放置12 h内，测得供试品峰面积的相对标准偏差为0.70%（表4），提示供试品溶液在12 h内稳定性良好。

表4 盐酸麻黄碱溶液稳定性试验

2.8 盐酸麻黄碱溶液回收率试验

取160601批样品（含量为3.13 mg/100 cm2）27片，平均分成9份，每份3片，精密测量，除去盖衬，置9个带塞锥形瓶中分为3组，分别加入适量对照品溶液与供试品中待测成分含量之比为0.5︰1、1︰1、1.5︰1，依法测定（表5）。由试验结果可知，含量测定各浓度下平均回收率为98.0%～101.0%，回收率RSD为0.59%，提示该方法准确度良好。

表5 盐酸麻黄碱溶液加样回收率试验（n=9）

2.9 盐酸麻黄碱耐用性试验

2.9.1 柱温在20、25、30℃柱温条件下，分别测定含量。结果显示，柱温在20～30℃变化时，盐酸麻黄碱含量为3.13 mg/100 cm2，RSD为0.69%，柱温变化对测定结果无明显的影响。

2.9.2 流速在流速为 0.8、1.0、1.2 ml/min条件下，分别测定含量。结果提示，流速在0.8～1.2 ml/min变化时，盐酸麻黄碱含量为 3.17 mg/100 cm2，RSD为1.06%，流速对测定结果无明显的影响。

2.9.3 流动相比例在流动相磷酸二氢钾与乙腈的比例为94︰6、96︰4、98︰2条件下，分别测定含量。结果提示，流动相比例在94︰6～98︰2变化时，盐酸麻黄碱含量为3.16 mg/100 cm2，RSD为0.71%，流动相比例变化对测定结果的影响较小。

2.9.4 流动相pH值在流动相pH值为2.3、2.5、2.7条件下，分别测定含量。结果提示，pH值在2.3～2.7变化时，盐酸麻黄碱含量为 3.17 mg/100 cm2，RSD为0.89%，流动相pH值对测定结果的影响较小。

2.9.5 检测波长在检测波长为208、210、212 nm条件下，分别测定含量。结果提示，检测波长在208～212 nm变化时，盐酸麻黄碱含量为3.17 mg/100 cm2，RSD为0.91%，检测波长耐用性较好。

2.9.6 色谱柱采用Inertsil ODS-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）、Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Agilent C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），分别测定含量。结果提示，使用不同型号的色谱柱，盐酸麻黄碱含量为3.25 mg/100 cm2，RSD为2.82%，色谱柱的耐用性较好。

表6 盐酸麻黄碱耐用性试验

2.10 香麻寒喘贴样品盐酸麻黄碱含量测定结果

取3批香麻寒喘贴，依法测定盐酸麻黄碱含量，结果如下（表7）。

表7 香麻寒喘贴样品盐酸麻黄碱含量测定结果（n=3）

3 讨论

近年来，经皮给药制剂飞速发展，贴剂以其操作简单、安全方便的特点越来越受到医药行业的重视。香麻寒喘贴是纯中药制剂，安全有效、副作用小，普遍用于宣肺平喘、化痰止咳。经查阅文献，香麻寒喘贴含量测定的方法鲜有报道，为进一步控制药品质量，本文对香痳寒喘贴中盐酸麻黄碱的含量测定方法进行研究。

采用甲醇为溶剂，对样品进行超声溶解，操作过程简单、毒性低，用高效液相色谱法对香麻寒喘贴中盐酸麻黄碱的含量进行测定，常见含量测定方法有薄层色谱法、紫外色谱法及高效液相色谱法等，其中高效液相色谱法准确性高，并对该方法进行了专属性、线性、精密度、重复性、稳定性、回收率及耐用性验证。实验结果显示，该方法专属性强、准确度高，能精确控制药品质量，保证药物的准确有效。

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