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宫颈癌（cervical cancer，CC）在我国女性生殖道恶性肿瘤中发病率位居第一[1]，淋巴结转移发生率高、局部复发和远处转移是治疗失败的主要原因，严重影响着女性的身心健康。Gab2（Grb2-associated binding protein 2，Gab2）属于 Gabs蛋白家族（Grb2-associated binder family proteins）的多位点衔接蛋白[2]，具有潜在的原癌基因特性，在多种恶性肿瘤的发生、发展中有着重要作用，如在肺癌、乳腺癌及结直肠癌等肿瘤中显著表达[3-5]。然而，有关Gab2蛋白在宫颈癌中的表达模式和临床意义尚不清楚。本实验通过免疫组织化学法检测Gab2在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达水平及其与临床病理特征的关系，评估Gab2在宫颈癌预后判断标志物的潜在临床价值，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

选取遵义医学院附属医院病理科保存的2012年1月～2013年12月经病理确诊的80例宫颈癌组织标本，取材前均无化疗或放疗病史，年龄33～74岁；病理类型：72例鳞癌，6例腺癌，2例其他类型癌（包括小细胞癌1例，腺鳞癌1例）；组织学分级：低中分化48例，高分化32例；临床分期：按FIGO分期，Ⅰ～Ⅱ期40例，Ⅲ～Ⅳ期40例；其中42例有淋巴结转移，38例无淋巴结转移。选取同期的20例正常宫颈组织标本作为对照组，年龄31～67岁。上述蜡块经4 μm厚度连续切片，分别进行免疫组化染色。

1.2 实验方法

应用免疫组化PV-9000二步法检测Gab2的表达情况。HRP标记的山羊抗兔多克隆抗体、免疫组化试剂盒PV-9000和DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，Gab2兔抗人单克隆抗体购自Origene公司。实验步骤依照PV-9000免疫组化试剂盒说明书严格操作，采用PBS液替代一抗做阴性对照。

1.3 结果判定标准

Gab2蛋白主要表达于细胞质，故细胞质染色呈黄色或棕褐色为Gab2蛋白阳性表达。每张免疫组化切片随机选择3个不同的视野（×200）观察，并判读阳性表达强度和阳性率。染色结果采用半定量分析方法，以染色强度结合阳性细胞数百分比进行评分。染色强度以多数细胞呈现的染色强度并减去背景着色计分，无明显着色为0分，轻微为1分，中度为2分，重度为3分。阳性细胞百分比：0～5%为0分，＞5%～25%为 1分，＞25%～50%为 2分，＞50%～75%为 3分，＞75%为4分。对每个视野均进行染色强度计分与阳性细胞百分比评分，最终评分以阳性细胞百分比与染色强度的加和：0 分为阴性（－），＞0～＜4 分为弱阳性（＋），4～6 分为中度阳性（＋＋），＞6～7 分为强阳性（＋＋＋），－、＋视为低表达，＋＋、＋＋＋视为高表达。阳性率=阳性病例数/总病例数×100%。

1.4 随访

80例宫颈癌患者通过规范治疗后，均按宫颈癌规定标准随访时间进行定期随访，通过门诊或电话随访，了解其复发及转移情况，随访内容包括临床症状、妇科检查、CT或MRI等，随访截止时间为2017年5月。其中失访5例，随访率为93.75%。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行处理，采用χ2检验或Fisher确切概率法进行数据分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组织化学检测Gab2蛋白在宫颈癌组织及正常宫颈组织中的表达情况

Gab2蛋白主要表达于细胞质，细胞核中未见明显表达。检测的20例正常宫颈组织中，仅3例呈弱表达，其余均为阴性。80例宫颈癌组织中，阳性47例，阴性33例，阳性率为58.75%，其中鳞癌、腺癌、其他类型癌Gab2的阳性表达率分别为58.33%、66.67%、50.00%，均显著高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），但三组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）（表 1、图 1）。

表1 Gab2在正常宫颈组织及宫颈癌组织中的表达情况

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图1 Gab2在宫颈癌组织中的免疫组化染色结果（SP，×200）

A.阴性 B.弱阳性 C.阳性 D.强阳性

2.2 Gab2在宫颈癌组织中的表达情况与其临床病理特征的相关性

Gab2蛋白在宫颈癌中的表达水平与有无淋巴结转移呈正相关（P＜0.05），而与年龄、肿瘤大小、组织学分级、FIGO 分期无明显相关性（P＞0.05）（表 2）。

表2 Gab2在宫颈癌组织中的表达与临床病理特征的相关性

2.3 Gab2蛋白表达水平与宫颈癌复发转移的关系

所有患者随访时间均＞3年。47例Gab2高表达的宫颈癌患者中，除2例失访外，24例发生局部盆腔复发或远处转移，复发转移率51.06%；而33例Gab2低表达患者中，3例失访，5例出现了局部复发或远处转移，复发转移率15.16%，差异有统计学意义（P=0.001）。

3 讨论

目前研究提示，Gab2是一个重要的癌症相关基因[6]，其定位于 11q13.4～q13.5，蛋白分子量为 97～100 kD，包含多个特殊结构，如N端的PH结构域、中间富含脯氨酸的PRD结构域及C-端的多个酪氨酸残基序列[7]。其中PH结构域能识别如磷酸肌醇类物质的膜成分，参与Gab2的膜定位；富含脯氨酸的PRD和酪氨酸残基序列可与SH-3和SH-2结构域结合，在生物活性分子刺激下，Gab2被酪氨酸磷酸化激活，通过与SHP-2、PI3K等信号分子的相互作用而激活各种信号通路，如经典的PI3K/AKT、SHP2/RAS/ERK通路[8-10]。近年来的研究提示，Gab2蛋白在多种恶性肿瘤中存在过表达[11]，包括乳腺癌[4]、急性骨髓性白血病[12]、肺癌[3]、卵巢癌[13]、胃癌[14]、结肠直肠癌[5]、黑色素瘤[15]和胶质瘤[16]等。上述研究显示，Gab2过表达与肿瘤的恶性程度有关，如Gab2蛋白能促进HER-2诱导的乳腺癌的发生和转移[4，17]；Gab2通过上调 E-ca的表达，激活PI3K/Zeb1通路从而增强卵巢癌细胞的迁移及侵袭能力[13]；而在结直肠癌中，Gab2可通过上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）促进结直肠癌的转移[5]等。

本实验结果显示，80例宫颈癌组织中，Gab2表达的阳性率为58.75%，而正常宫颈组织中仅3例呈弱阳性表达，两组结果比较差异有统计学意义（P＜0.05），提示Gab2在宫颈癌中存在过表达，但在鳞癌、腺癌、其他类型癌三组中比较差异无统计学意义（P＞0.05）。因本实验腺癌及其他类型癌样本量较少，该实验结果尚需进一步大样本证实。另外，在宫颈癌组织中，Gab2的表达水平与有无淋巴结转移呈正相关（P＜0.05），而与年龄、肿瘤大小、组织学分级、FIGO分期无显著相关性（P＞0.05）。随访结果显示，Gab2高表达患者的复发转移率显著高于Gab2低表达的患者（P=0.001），提示Gab2过表达可能预示着肿瘤恶性程度高、易发生复发转移、预后差等，可能具有作为宫颈癌预后判断标志物的潜能。

[参考文献]

[1]Chen W，Zheng R，Baade PD，et al.Cancer statistics in China，2015[J].CA Cancer J Clin，2016，66（2）：115-132.

[2]Pan XL，Ren RJ，Wang G，et al.The Gab2 in signal transduction and its potential role in the pathogenesis of Alzheimer′s disease[J].Neurosci Bull，2010，26（3）：241-246.

[3]Xu XL，Wang X，Chen ZL，et al.Overexpression of Grb2 associated binder 2 in human lung cancer[J].Int J Biol Sci，2011，7（5）：496-504.

[4]Bocanegra M，Bergamaschi A，Kim YH，et al.Focal amplification and oncogene dependency of GAB2 in breast cancer[J].Oncogene，2010，29（6）：774-779.

[5]Ding C，Luo J，Yu W，et al.Gab2 is a novel prognostic factor for colorectal cancer patients[J].Int J Clin Exp Pathol，2015，8（3）：2779-2786.

[6]Addams SJ，Aydin IT，Celebi JT.GAB2-ascaffolding protein in cancer[J].Mol Cancer Res，2012，10（10）：1265-1270.

[7]Ke Y，Wu D，Princen F，et al.Role of Gab2 in mammary tumorigenesis and metastasis[J].Oncogene，2007，26（4）：4951-4960.

[8]Wohrle FU，Daly RJ，Brummer T.Function regulation and pathological roles of the Gab/DOS docking proteins[J].Cell Commun Singnal，2009，7（1）：1186-1214.

[9]Nishida K，Hirano T.The role of Gab family scaffolding adapter proteins in the signal transduction of cytokine and growth factor receptors[J].Cancer Sci，2003，94（12）：1029-1033.

[10]Maus M，Medgyesi D，Kvesdi D，et al.Grb2 associated binder 2 couples B cell receptor to cell survival[J].Cell Signal，2009，21（2）：220-227.

[11]Ding CB，Yu WN，Feng JH，et al.Structure and function of Gab2 and its role in cancer （Review）[J].Mol Med Rep，2015，12（3）：4007-4014.

[12]Zatkova A，Schoch C，Speleman F，et al.GAB2 is a novel target of 11q amplification in AML/MDS[J].Genes Chromosomes Cancer，2006，45（9）：798-807.

[13]Wang Y，Sheng Q，Spillman MA，et al.Gab2 regulates the migratory behaviors and E-cadherin expression via activation of the PI3K pathway in ovarian cancer cells[J].Oncogene，2012，31（20）：2512-2520.

[14]Lee SH，Jeong EG，Nam SW，et al.Increased expression of Gab2，a scaffolding adaptor of the tyrosine kinase signalling，in gastric carcinomas[J].Pathology，2007，39（3）：326-329.

[15]Chermoff KA，Bordone L，Horst B，et al.GAB2 amplifications refine molecular classification of melanoma[J].Clin Cancer Res，2009，15（13）：4288-4291.

[16]Shi L，Sun X，Zhang J，et al.Gab2 expression in glioma and its implications for tumor invasion[J].Acta Oncol，2013，52（8）：1739-1750.

[17]Bentires-Alj M，Gil SG，Chan R，et al.A role for the scaffolding adapter GAB2 in breast cancer[J].Nat Med，2006，12（1）：114-121.