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黄芪，又名绵芪[1]。多年生草本，高 50～100 cm。主根肥厚，木质，常分枝，灰白色。茎直立，上部多分枝，有细棱，被白色柔毛。黄芪多糖是从黄芪的干燥根经提取、浓缩、纯化而成的水溶性杂多糖，淡黄色，粉末细腻，均匀无杂质，具引湿性；其由己糖醛酸、葡萄糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等组成，可作为免疫促进剂或调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用[2]。本研究考察了黄芪多糖多次给药（14～17 d）对小鼠免疫功能的影响[3]，旨在为临床研究提供参考，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 试验动物

雄性昆明种小鼠由天津药物研究院动物室繁殖，试验动物设施合格证为“津试验动物设施第013号”，由天津市试验动物管理委员会颁发，符合一级标准，动物正常饲养3 d后供用。

1.2 主要试剂与仪器

1.2.1 主要试剂

1.2.1.1 受试药物 ①黄芪多糖为供试品：淡黄色粉末，由天津中新药业集团天津中新制药厂提供，含量为70%，产品批号为050609。临用前以0.9%的羧甲基纤维素（CMC）或5%聚维酮（PVP）配制成适当浓度的混悬液。②灵芝多糖为阳性对照药，市售品，陕西省昂盛医药生物科技有限公司产品，产品批号为20160307。

1.2.1.2 试剂 ①环磷酰胺（Cy）：白色粉末，上海研生医药股份有限公司购入，产品批号为2016060。②抗小鼠IgG血清：中国药品生物制品检定所购入，产品批号为20160609。

1.2.1.3 培养基 ①M-H培养基（琼脂）：pH为7.4±0.2，由中国药品生物制品检定所生产，产品批号为20160619。②M-H培养基（肉汤）：pH为7.4±0.2，由中国药品生物制品检定所生产，产品批号为20160620。

1.2.1.4 菌种 ①绿脓假单胞菌：中国药品生物制品检定所购入，产品批号为20160725。②萄球菌（临床菌）：天津医科大学总医院购入，产品批号为20160725。③流感病毒（A/PR/8/34）：中国预防医学科学院病毒所流感室购入，产品批号为20160725。

1.2.2 仪器

YSQG02型电热式蒸汽消毒器（无锡建仪实验器材有限公司），TJ型洁净工作台（天津市净化设备厂），HZQ-D水浴振荡器（常州市国旺仪器制造有限公司）。

1.3 试验分组及模型制备

1.3.1 黄芪多糖对体液免疫功能的影响[4]

选取96只体重为18～22 g的雄性昆明种小鼠，按体重随机分为8组，分别为空白对照组（考虑到纤维素本身也是多糖，为了排除其作用，特设空白组对照，下同）、正常对照组、模型组、灵芝多糖1000 mg/kg、黄芪多糖125、250、500和1000 mg/kg剂量组，每组12只，每天早8:00禁食，下午2:00根据体重灌胃给药，给药量为0.4 ml/20 g，空白组不给药或溶媒，正常和模型组给予同体积的0.5%的CMC，给药2 h后按3 g/只动物的量喂食。

1.3.2 黄芪多糖对细胞免疫、非特异性免疫功能的影响[5-7]

选取141只体重为20～24 g的雄性昆明种小鼠，依照体重分为7组，每组12～22只，分别为空白对照组、正常对照组、模型组（Cy模型）、阳性对照组（灵芝多糖 1 g/kg）、黄芪多糖 125、250、500 mg/kg 剂量组。

选取72只体重为20～24 g的雄性昆明种小鼠，依照体重随机分为6组，每组12只，分别为空白对照组、正常对照组、阳性对照组（灵芝多糖1 g/kg）、黄芪多糖 125、250、500 mg/kg 剂量组。

选取129只体重为20～24 g的雄性昆明种小鼠，依照体重随机分为6组，每组20～22只，分别为正常对照组、模型组（Cy模型）、阳性对照组（灵芝多糖1 g/kg）、黄芪多糖 125、250、500 mg/kg剂量组。

选取60只体重为20～24 g的雄性昆明种小鼠，依照体重随机分为5组，每组12只，分别为正常对照组、阳性对照组（灵芝多糖 1 g/kg）、黄芪多糖 125、250、500 mg/kg剂量组。

各组小鼠灌胃给药，1次/d，连续14 d，药物用3%PVP溶解。每天早上8:30禁食，于下午2:30～3:00根据体重灌胃给药，灌胃体积为0.4 ml/20 g，给药后2 h，按3 g/只动物进食量给饲料。空白、正常对照组分别给予同体积的空白溶媒。

1.4 观测指标及检测方法

1.4.1 IgG含量的影响

给药15 d，于给药第10天除空白和正常对照组外其余所有小鼠右侧腋部均接种S180荷瘤细胞，于末次给药24 h后小鼠眼眶取血，分离血清，将血清稀释3倍测定IgG沉淀环的直径，以标准IgG相对照，计算样品中IgG的相对含量。

1.4.2 对放射损伤小鼠血清IgG含量的影响

给药17 d，于给药第8天除空白和正常对照组外给于其余所有小鼠1次照射铯源，剂量为3.0 Gy，于末次给药24 h后小鼠眼眶取血，分离血清，将血清稀释3倍后测定IgG沉淀环的直径，以标准IgG相对照，计算样品中IgG的相对含量。

1.4.3 对Cy所致免疫低下小鼠血清IgG含量的影响

给药15 d，于给药第6天除空白和正常对照组外给于其余所有小鼠皮下1次注射Cy 100 mg/kg造模，末次给药24 h后小鼠眼眶取血，分离血清，将血清稀释3倍测定IgG沉淀环的直径，以标准IgG相对照，计算样品中IgG的相对含量。

1.4.4 Cy所致免疫低下小鼠T细胞介导的迟发性过敏反应（DTH）的影响[6]

第8天除空白对照组外，各组小鼠腹部去毛（面积约 3×3 cm），用 1%2，4-二硝基氟苯（DNFB）的丙酮－麻油溶液涂抹腹部致敏，每鼠50 μl，并在致敏后2 h腹腔注射Cy 80 mg/kg造免疫低下模型，次日加强致敏并注射1次同剂量的同剂量Cy，于第13天用1%DNFB丙酮－麻油溶液10 μl均匀涂抹在小鼠右耳部攻击，攻击后24 h将小鼠称重，造成迟发性变态反应（DTH），随后处死动物，剪两侧耳壳，用打孔器打直径6 mm的片，称重测定，比较两侧耳片重量差值的差别。

1.4.5 对正常小鼠DTH反应的影响

用两侧耳片重量的差值作为肿胀度指标，比较各组小鼠耳片肿胀度的差别，观察黄芪多糖对正常小鼠DNFB所致DTH反应的影响。

1.4.6 对Cy[8]所致免疫低下小鼠碳粒廓清的影响

第8天除对照组外，腹腔注射Cy 80 mg/kg造免疫低下模型，次日再注射1次同剂量Cy，于第15天小鼠尾静脉注射25%印度墨汁0.1 ml/10 g，分别于1 min（t1）和 5 min（t2）取血 20 μl，加入 2 ml 0.1%Na2CO3溶液中，振荡混匀，680 nm波长比色测定，并取肝脏和脾脏加以称重，计算各剂量组小鼠碳廓清指数K和吞噬指数 α。碳廓清指数 K＝（LogOD1－LogOD2）/（t2－t1）；吞噬指数 α＝（K）1/3×体重/（肝和脾重）。

1.4.7 对正常小鼠碳廓清的影响

第15天小鼠尾静脉注射25%印度墨汁0.1 ml/10 g，分别于 1 min（t1）和 5 min（t2）取血 20 μl，加入 2 ml 0.1%Na2CO3溶液中，振荡混匀，680 nm波长比色。随后处死动物，取肝脏和脾脏加以称重，计算各剂量组小鼠碳廓清指数K和吞噬指数α。碳廓清指数K＝（LogOD1－LogOD2）/（t2－t1）；吞噬指数 α＝（K）1/3×体重/（肝和脾重）。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行分析，计量资料采用均数±标准差（

±s）表示，采用 t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义[9]。

2 结果

2.1 黄芪多糖对荷瘤小鼠血清Ig G含量的影响

正常对照组与空白对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），Cy模型组与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），阳性对照组（灵芝多糖）与正常对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），小鼠灌胃黄芪多糖500、1000 mg/kg与正常对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），而与同剂量的灵芝多糖相比作用相当（表 1）。

表1 黄芪多糖对荷瘤小鼠血清Ig G含量的影响组别

与正常对照组比较，#P＜0.05；与 Cy模型组比较，**P＜0.01；与 Cy模型组比较，*P＜0.05

2.2 黄芪多糖对放射损伤小鼠血清IgG含量的影响

正常组对照与空白对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），Cy模型组与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），阳性对照组（灵芝多糖）与正常对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），小鼠灌胃黄芪多糖500、1000 mg/kg与正常对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），而与同剂量的灵芝多糖相比作用相当（表 2）。

表2 黄芪多糖对放射损伤小鼠血清IgG含量的影响

与正常对照组比较，#P＜0.05；与Cy模型组比较，**P＜0.01；与Cy模型组比较，*P＜0.05

2.3 黄芪多糖对Cy所致免疫低下小鼠血清IgG含量的影响

正常对照组与空白对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），Cy模型组与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），阳性对照组（灵芝多糖）与正常对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），小鼠灌胃黄芪多糖500、1000 mg/kg，与正常对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），而与同剂量的灵芝多糖相比作用相当（表 3）。

表3 黄芪多糖对Cy所致免疫低下小鼠血清IgG含量的影响

与正常对照组比较，#P＜0.05；与 Cy模型组比较，**P＜0.01；与 Cy模型组比较，*P＜0.05

2.4 黄芪多糖对Cy所致免疫低下小鼠DTH反应的影响

正常对照组与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），Cy模型组与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），阳性对照组（灵芝多糖）与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），小鼠灌胃黄芪多糖125、500 mg/kg，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），而与同剂量的灵芝多糖相比作用相当（表 4）。

表4 黄芪多糖对Cy所致免疫低下小鼠DTH反应的影响（

±s）

与正常对照组比较，＃＃P＜0.01；与 Cy模型组比较，*P＜0.05；与 Cy 模型组比较，**P＜0.01

2.5 黄芪多糖对DNFB致正常小鼠DTH反应的影响

正常对照组与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），阳性对照组（灵芝多糖）与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），小鼠灌胃黄芪多糖250、500 mg/kg，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），且高于同剂量的灵芝多糖（表 5）。

表5 黄芪多糖对DNFB致正常小鼠DTH反应的影响

与空白对照组比较，##P＜0.01；与正常对照组比较，*P＜0.05

2.6 黄芪多糖对Cy所致免疫低下小鼠碳粒廓清的影响

Cy模型组与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），阳性对照组（灵芝多糖）与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），小鼠灌胃黄芪多糖250、500 mg/kg，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），而与同剂量的灵芝多糖相比作用相当（表6）。

表6 黄芪多糖对Cy所致免疫低下小鼠碳粒廓清的影响（

±s）

与正常对照组比较，＃＃P＜0.01；与 Cy 模型组比较，*P＜0.05；与 Cy 模型组比较，**P＜0.01

2.7 黄芪多糖对正常小鼠碳粒廓清的影响

阳性对照组（灵芝多糖）与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），小鼠灌胃黄芪多糖 500 mg/kg，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），而与同剂量的灵芝多糖相比作用相当（表7）。

表7 黄芪多糖对正常小鼠碳粒廓清的影响（

±s）

与正常对照组比较，**P＜0.05；与正常对照组比较，*P＜0.01

3 讨论

多糖[10]类化合物作为免疫调节剂能在多途径对免疫系统发挥免疫调节作用[11]，本研究从体液免疫[12]、细胞免疫、非特异性免疫等方面研究了黄芪多糖对机体免疫功能[13]的影响。

实验结果提示,正常对照组和空白对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05），小鼠接种S180瘤细胞后IgG含量明显低于空白对照组，体液免疫功能下降，小鼠灌胃黄芪多糖500 mg/kg和1000 mg/kg 15 d后能明显增加荷S180瘤小鼠血清IgG的含量；小鼠经放射损伤后，模型组动物血清的IgG含量明显低于正常对照组。小鼠灌胃黄芪多糖500、1000 mg/kg 17 d后能明显升高放射损伤小鼠血清的IgG含量；小鼠皮下注射1次Cy后，IgG含量明显低于正常对照组，小鼠经口灌胃黄芪多糖 125、250、500、1000 mg/kg 15 d 后能明显升高小鼠血清IgG的含量；与同剂量的灵芝多糖相比作用相当，提示黄芪多糖具有明显的增加体液免疫的功能。

T细胞介导的DTH反应，是反应T细胞功能的指标，在不致敏的情况下，DNFB对两耳几乎没有影响，致敏后可以明显引起耳肿胀，Cy 80 mg/kg可明显抑制由DNFB诱发的DTH反应，黄芪多糖125、500 mg/kg使小鼠受抑制的DTH反应明显恢复；黄芪多糖灌胃给药14 d，可增加DNFB所致的DTH反应。其中250、500 mg/kg剂量组可显著增加小鼠耳片肿胀度，提示黄芪多糖对T淋巴系免疫细胞的功能有一定的促进作用。小鼠腹腔注射Cy 80 mg/kg×2次，可明显抑制小鼠吞噬细胞的功能，碳粒廓清指数和吞噬指数下降，黄芪多糖250 mg/kg和500 mg/kg给药14 d，能明显恢复Cy所致免疫低下小鼠的吞噬细胞功能，其中250 mg/kg剂量组与灵芝多糖500 mg/kg剂量组药效相近；黄芪多糖500 mg/kg可使正常小鼠碳廓清指数K和吞噬指数α显著增加，与阳性药灵芝多糖的作用接近，提示黄芪多糖可显著提高正常小鼠的非特异性免疫功能[14]。

黄芪多糖将作为免疫增强剂广泛应用于多种疾病术前术后的治疗、免疫力低下引起的感染以及肿瘤放化疗后的综合治疗，具有巨大的市场开发前景[15]。

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