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中成药的研发和使用是我国中医药产业的一大特点，降血脂类中成药在临床上使用较为广泛，在三高人群中用药较为普遍。近年来，由于利益的驱使，中成药中非法添加化学物质的情况时有发生[1-8]，严重危害了用药患者的身体健康，也影响了中医药产业的健康发展。本文所用方法可从降血脂类中成药中快速检验出普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀4种常见的降血脂用化学成分，方法简便、有效，可满足此类药物的快检筛查，为药品检验机构和药品监管部门提供技术支持，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1260 InfinityⅡ高效液相色谱仪（安捷伦公司）；BP211D电子分析天平（赛多利斯公司）；AR2140电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；STARTER 2100 PH计（奥豪斯仪器上海有限公司）；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；色谱柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5 μm，4.6 mm×150 mm；DAD检测器；普伐他汀钠对照品（中国食品药品检定研究院，批号100689-200603，纯度96.7%）、阿托伐他汀钙对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100590-201001，纯度95.0%）、洛伐他汀对照品（中国食品药品检定研究院，批号100600-201003，纯度99.4%）、辛伐他汀对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100601-201003，纯度99.0%）。甲醇为色谱纯；磷酸二氢钠为分析纯；降血脂类中成药样品共4批，依次为血脂康胶囊、通脉降脂片、血脂宁胶囊、血脂宁丸，均由当地药店购买。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5 μm，4.6 mm×150mm；柱温:30℃；检测器：DAD检测器；流速：1.0ml/min；进样量：1～5 μl；流动相∶甲醇-0.03 mol/L、磷酸二氢钾（磷酸调 pH 至 3.5）=75∶25；检测波长：238 nm。

2.2 供试品溶液的制备

取样品研细，称取一次最大服用剂量，置25 ml离心管中,加入甲醇15 ml，精密称定，超声处理15 min，放冷，用甲醇补足重量，振摇使混匀放置取上清液滤过，取续滤液，即得。

2.3 混合对照品溶液的制备

精密称取普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀对照品各100 mg，置同一100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备

取处方中不含上述4种化学成分的降血脂类中成药，按2.2的方法制备，即得。

2.5 阳性对照溶液的制备

精密称取普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀4种对照品，加入处方中不含上述4种化学成分的降血脂类中成药中，混匀，按“2.2”的方法制备成每毫升中含上述4种对照品各1 mg的溶液，即得。

2.6 方法专属性试验

通过对混合对照品溶液、阴性对照溶液、阳性对照溶液按“2.1”项下色谱条件分别进行检测，结果表明混合对照品分离度好，阴性对照溶液无干扰，阳性对照溶液能达到分离（图 1、2、3）。

图1 普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀混合对照品溶液色谱图

图2 阴性对照品溶液色谱图（X-轴：时间 Y-轴：峰高）

图3 阳性对照品溶液色谱图（X-轴：时间 Y-轴：峰高）

2.7 4种成分的线性范围、r值及回归方程

分别精密称取普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀4种对照品，加甲醇稀释成一系列标准溶液，以对照品浓度为横坐标X，各自对应的峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线（表1）。

表1 4种成分的线性范围、r值及回归方程

2.8 精密度试验

精密吸取 2.3 中混合对照液各 1 μl，按“2.1”项下色谱条件和方法，注入液相色谱仪，连续进样6次，普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀峰面积的RSD分别为0.5%、0.8%、0.4%、0.5%。

2.9 回收率试验

采用加样回收试验，精密称取同一批号阴性样品6份，分别精密加入一定量的混合对照品溶液，按照“2.2”项下方法制备成供试品溶液,按上述方法进行测定，结果表明本方法回收率良好（表2）。

表2 4种成分的回收率及其RSD（%）

2.10 稳定性试验

取“2.3”项下混合对照液，按“2.1”项下色谱条件和方法，分别于 0、2、4、8、12 h进样测定，记录色谱图，测得上述4种化学成分的峰面积在12 h内无明显变化，RSD均＜1.0%。

2.11 样品的测定

取市售4批降血脂类中成药制剂，分别按“2.2”项下方法提取各样品供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件及方法测定，结果血脂康胶囊中检出洛伐他汀（图4），通脉降脂片、血脂宁胶囊、血脂宁丸3批供试品色谱图中均未呈现与对照品保留时间一致的色谱峰，即该3批样品均未非法添加上述4种化学成分。

图4 血脂康胶囊色谱图

3 讨论

3.1 高效液相色谱法检测波长的选择

参照《中国药典》2015年版二部、相关国家药品标准以及有关文献报道[9-12]，普伐他汀钠、洛伐他汀、辛伐他汀的高效液相法检测波长为238 nm，阿托伐他汀钙的检测波长为244 nm。本试验中采用DAD检测器，同时选取238 nm和244 nm两个参比波长进行比较，通过光谱图对比，最后选定检测波长为238 nm。

3.2 提取溶剂的选择

上述4种化学成分在甲醇中均易溶解，故本试验采用甲醇超声溶解的提取方法，超声时间＞15 min后，4种成分的含量无明显差异，故确定超声时间为15 min。

3.3 检测方法的验证

血脂康胶囊的主要成分为红曲，而红曲中含有洛伐他汀早有报道[13-15]，通过本试验在血脂康胶囊中检出洛伐他汀也验证了这一点，从而进一步验证本方法的可行有效。

3.4 实验中出现的问题及讨论

实验中发现流动相在双泵条件下高效液相色谱仪压力不稳定，考虑可能是甲醇与酸性溶液——磷酸二氢钾溶液在混合过程中产生较多气泡所致，故本试验最终采取混合流动相单泵条件下进行检测，压力稳定，基线平稳。

3.5 本方法的实用性

目前，高效液相色谱仪在各地市、县、区食品药品检验机构已经普及使用，本试验采用高效液相法，在一个色谱条件下，可从中成药中一次性检测普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀4种较为常见的降血脂类化学成分，方法简便快捷，可以满足此类药物的快检筛查。

3.6 本方法的适用范围

本研究主要针对中成药中非法添加普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀四种化学成分，同理，保健品中非法添加上述4种化学成分，亦可采用本方法进行检测分析。

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