丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测在血液筛查中的价值研究
李结敏 陈志忠 陈尚良 廖扬勋 余文潮 卢少芬 梁剑锋 李勋伟
广东省肇庆市中心血站，广东肇庆 526040
[摘要]目的 研究丙氨酸氨基转移酶（ALT）与甲型肝炎病毒（HAV）、庚型肝炎病毒（HGV）的关系，评估其在血液筛查中的价值。方法 随机收集2017年1 ～12月肇庆地区无偿献血者血液标本进行考察，检测输血五项[乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒抗体（Anti-HCV）、人类免疫缺陷病毒抗体（Anti-HIV）、梅毒螺旋体（TP）、人类T淋巴细胞白血病病毒（Anti-HTLV）]均为阴性。将ALT正常（ALT≤50 U/L）的874份标本作为对照组（其中393份标本作为对照组1，481份标本作为对照组2），ALT异常（ALT>50 U/L）的135份标本作为研究组。采用核酸检测技术（NAT）、酶联免疫吸附实验（ELISA）检测输血感染五项，采用速率法检测ALT，采用ELISA方法检测HAV-IgG、HGV-IgG。回顾性分析2003 ～2017年肇庆市无偿献血者血液标本，考察HBsAg阳性献血者（2216例）、Anti-HCV阳性献血者（664例）中的ALT异常率。结果 对照组1和研究组标本分别检测HAV-IgG，对照组检出352例（89.6%）阳性，研究组检出110例（81.5%）阳性，研究组的HAV-IgG检测阳性率低于对照组1，差异有统计学意义（P<0.05）。对照组2和研究组标本的HGV-IgG阳性率均为0.0%。Anti-HCV阳性献血者标本中的ALT异常率为109例（4.9%），高于HBsAg组的161例（24.2%），差异有统计学意义（P<0.05）。2216例HBsAg阳性者中，ALT异常109例（4.9%），664例Anti-HCV阳性者中，ALT异常161例（24.2%），HBsAg阳性者中，ALT异常率低于Anti-HCV阳性者，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 ALT与HCV有关联，但经特异性的ELISA和NAT检测HCV后，ALT检测再无益于改善HCV残余风险。研究组的HAV-IgG阳性率低于对照组，但HAV为非经血液传播疾病，也无助于改善血液安全残余风险。
[关键词]丙氨酸氨基转移酶；献血者；血液筛查；残余风险
[中图分类号]R457.12
[文献标识码]A
[文章编号]1674-4721（2018）9（b）-0158-04
[基金项目]广东省肇庆市科技创新计划项目（2014E1814）
Value of Alanine Aminotransferas in blood screening
LI Jie-min CHEN Zhi-zhong CHEN Shang-liang LIAO Yang-xun YU Wen-chao LU Shao-fen LIANG Jianfeng LI Xun-wei
Zhaoqing Central Blood Station,Guangdong Province,Zhaoqing 526040,China
[Abstract]Objective To study the relationship between alanine aminotransferase (ALT)and hepatitis A virus(HAV)and hepatitis G virus(HGV)and to evaluate its value in blood screening.Methods Blood samples from unpaid blood donors in Zhaoqing area from January to December 2017 were randomly collected,and five bloods transfusion tests(hepatitis B virus surface antigen[HBsAg],hepatitis C virus antibody[Anti-HCV],human immunodeficiency virus antibody[Anti-HIV],syphilitic spirulina[TP],human T lymphocytic leukemia virus[Anti-HTLV])were negative.Altogether 874 specimens with normal ALT(ALT≤50 U/L)were used as control group(393 specimens were used as the control group 1,and 481 specimens were used as the control group 2),and 135 specimens with abnormal ALT (ALT>50 U/L)were used as study group.Five blood transfusion infections were detected by nucleic acid detection technology(NAT)and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).ALT was detected by rate method,and HAV-IgG and HGV-IgG were detected by ELISA.The blood samples from unpaid blood donors in Zhaoqing City from 2003 to 2017 were retrospectively analyzed.The abnormal rate of ALT in HbsAg positive blood donors (2216 cases)and Anti-HCV positive blood donors(664 cases)was investigated.Results HAV-IgG was detected both in the control group 1 and in the study group,352 cases(89.6%)were positive in the control group,and 110 cases(81.5%)were positive in the study group.The positive rate of HAV-IgG in the study group was lower than that in the control group 1,and the difference was statistically significant(P<0.05).The positive rate of HGV-IgG in the control group 2 and in the study group was 0.0%.There were 109 cases(4.9%)of ALT abnormalities in 2216 HBsAg-positive cases and 161 cases(24.2%)of ALT ab-normalities in 664 Anti-HCV-positive cases.The abnormal rate of ALT in HBsAg-positive cases was lower than that in Anti-HCV-positive cases,and the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion ALT is related to HCV,but after the specific test of ELISA and NAT,ALT test is no longer helpful to improve the residual risk of HCV.The positive rate of HAV-IgG in the study group is lower than that in the control group,but HAV is a non-bloodborne disease and did not help to improve the residual risk of blood safety.
[Key words]Alanine aminotransferase;Blood donors;Blood screening;Residual risk
2012版《血站技术操作规程》规定，对献血者进行丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测。然而，随着酶联免疫吸附实验（ELISA）以及核酸检测技术（NAT）的逐步完善，近年来有关ALT在血液筛查中的作用，逐渐成为学术界争论的焦点。ALT异常与肝炎性疾病特别是丙型肝炎存在显著的相关性，是指示肝功能的指标之一，在肝炎的诊断和治疗方面有重要作用。但另一方面，不少学者研究后指出，随着肝炎特异性诊断试剂技术的完善以及核酸检测技术在血站全面开展的情况下，继续开展ALT检测对保障血液安全显得意义不大。因此，本研究拟对单纯ALT升高的无偿献血者进行血清学研究分析，旨在探讨ALT与丙肝、乙肝等肝炎性疾病的关系，重新评估ALT检测在血液筛查安全中的作用，为血液安全管理部门以及决策者提供基础数据。
1 资料与方法
1.1 标本
选取2017年1 ～12月肇庆地区无偿献血者的标本进行考察。纳入标准：①输血五项[乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒抗体（Anti-HCV）、人类免疫缺陷病毒抗体（Anti-HIV）、梅毒螺旋体（TP）、人类T淋巴细胞白血病病毒（Anti-HTLV）]检测阴性，HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的核酸检测阴性；②对照组及研究组标本均无溶血或严重脂血，采用NAT检测后血浆量应>2 ml。排除标准：①输血五项（HB-sAg、Anti-HCV、Anti-HIV、TP、Anti-HTLV） 或 HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的核酸检测任一项阳性的标本；②溶血、严重脂血或血浆量<2 ml的标本。将ALT正常 （ALT≤50 U/L）的874份标本作为对照组（其中393份标本作为对照组1，481份标本作为对照组 2），ALT 异常（ALT>50 U/L）的 135 份标本作为研究组。回顾性分析2003 ～2017年肇庆市的2880份无偿献血者血液标本，考察HBsAg阳性献血者（2216份）、Anti-HCV阳性献血者（664份）中的ALT异常率。本研究经肇庆市中心血站医学伦理委员会审核批准。
1.2 试剂与仪器
1.2.1 检测试剂 乙型肝炎病毒/丙型肝炎病毒/人类免疫缺陷病毒（Ⅰ型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光法）（中山大学达安基因股份有限公司）；HBsAg检测试剂盒（北京万泰生物药业股份有限公司、法国伯乐公司）；抗-HCV检测试剂盒[英科新创（厦门）科技有限公司、北京万泰生物药业股份有限公司]；抗-HIV检测试剂盒（北京万泰生物药业股份有限公司）；HIV-Ab/Ag检测试剂盒（法国伯乐公司）；梅毒抗体检测试剂盒[英科新创（厦门）科技有限公司、北京万泰生物药业股份有限公司]；HTLV检测试剂盒（北京万泰生物药业股份有限公司）；ALT检测试剂盒（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）；HAV-IgG检测试剂盒 （北京贝尔生物工程有限公司）；HGV-IgG检测试剂盒 （北京贝尔生物工程有限公司）。
1.2.2 仪器 Freedom evo全自动加样器处理分析系统（瑞士Tecan公司）；BEPⅢ全自动酶免分析系统（德国西门子公司）；TECAN.SUNRISE酶标仪（瑞士Tecan公司）；ABI7500型实时荧光定量PCR仪（美国应用生物系统公司）；Chemagic STAR核酸提取仪（瑞士Hamilton公司）；HH.W21.600型电热恒温水温箱（上海予卓仪器有限公司）；BS-800型全自动生化仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）。
1.3 方法
采用 NAT、ELISA检测输血感染五项（HBsAg、TP、Anti-HCV、Anti-HIV，Anti-HTLV） 和 HAV-IgG、HGV-IgG，采用速率法检测ALT，采用PCR-荧光法检测乙型肝炎病毒/丙型肝炎病毒/人类免疫缺陷病毒（Ⅰ型）核酸。
1.4 统计学方法
采用IBM SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组标本HAV-IgG检出阳性率的比较
研究组的HAV-IgG检出阳性率低于对照组1，差异有统计学意义（P<0.05）（表 1）。
表1 两组标本HAV-IgG检出阳性率的比较（例）

2.2 两组标本HGV-IgG检出阳性率的比较
对照组2标本共481份，研究组标本共135份，两组均未检出HGV-IgG阳性标本，对照组2和研究组标本的HGV-IgG阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
2.3 HBsAg、HCV阳性献血者中ALT异常率的比较
Anti-HCV阳性献血者标本中的ALT异常率高于 HBsAg组，差异有统计学意义（P<0.05）（表 2）。
表2 HBsAg、HCV阳性献血者中ALT异常率的比较（例）

3 讨论
近年来有关ALT在血液筛查中的作用逐渐成为学术界争论的焦点。以往由于检测技术的限制，非甲、非乙型肝炎缺乏特异性检测方法，而ALT检测则成为了这类肝炎的替代试验[1-2]。随着检测技术的不断发展，特别是在筛查试剂技术的不断完善以及核酸检测技术全面开展的情况下，继续开展ALT检测对保障血液安全显得意义不大[3-6]。2012年国家卫生健康委员会提出全面开展献血前筛查ALT，ALT异常单项报废的血液已位居首位，甚至报废率高达4.8%[7]，全面开展献血前筛查ALT后仍有约0.7%单项ALT异常的报废。在血液资源日趋紧张的情况下，不少学者建议取消ALT检测，从而避免血液的不必要报废[8]。因此，本研究重点分析了ALT检测对血液残余风险的影响。
本研究结果提示，研究组的HAV-IgG阳性率低于对照组1，差异有统计学意义（P<0.05），但HAV为非经血液传播疾病，故无助于改善血液安全残余风险。HGV病毒是可经血液传播疾病，目前又尚未纳入常规血液筛查项目。但研究结果提示，对照组2和研究组标本的HGV-IgG阳性率均为0%，尚未发现存在差异，故此认为ALT检测也无助于通过检出HGVIgG来改善血液安全残余风险。
为进一步探讨ALT在血液安全检测中的价值，笔者回顾性分析2003 ～2017年肇庆市无偿献血者血液标本，进一步分析HBsAg阳性献血者 （2216份）、Anti-HCV阳性献血者（664份）中的ALT异常率。结果提示，Anti-HCV阳性献血者标本中的ALT异常率高于 HBsAg组，差异有统计学意义（P<0.05），提示ALT与HCV存在显著相关性。但后续的结果提示，135例ALT异常的标本，NAT检测HBV、HCV结果均为阴性，提示进行特异性的HCV抗体筛查和HCV RNA检测后，ALT作为HCV非特异性的筛查手段，对降低输血传播风险的意义不大。刘仁强等[9]研究中ALT水平为40 ～60 U/L的肝炎标志物阴性献血者的NAT结果均为阴性，谢月娜等[10]研究中ALT异常率与HCV RNA检测结果无相关性，证实ALT异常的主要因素并非HBV和HCV感染。国内外不少专家学者研究认为，由于ALT升高绝大部分为非病理性因素引起，过度运动、饮酒、服用特殊药物、肥胖、疲劳等因素也可导致ALT的升高[11-13]，ALT水平的升高并不能准确反映献血者是否患有病毒性肝炎[14-15]，ALT的检测已经失去了其保障血液安全的意义。但我国始终将ALT作为血液筛查项目之一，随着核酸检测技术在全国血站实验室全覆盖，其试剂的高灵敏度能大大缩短HBV、HCV感染检测的“窗口期”[16-17]，能更早发现肝炎窗口期及隐匿性肝炎，在常规开展HBV、HCV、和HIV的NAT血液筛查以后，ALT检测再无益于改善HCV残余风险。
综上所述，在筛查试剂技术不断完善以及核酸检测技术全面开展的情况下，继续开展ALT检测对保障血液安全显得意义不大。
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（收稿日期：2018-06-08 本文编辑：孟庆卿）