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卵巢癌死亡率在女性生殖道恶性肿瘤中仅次于宫颈癌[1]。全球每年新发患者约19.2万，死亡人数却高达11.4万[2]。由于早期难以检测且生长部位隐蔽，发现时70%～80%已发展为晚期[3-4]。目前，常规的手术、化疗严重影响患者的生存质量。因此，针对肿瘤无法切除或者情况较差的患者，急需新的治疗模式来改善预后。高强度聚焦超声（HIFU）是一种非侵入性治疗肿瘤的新技术[5-6]，研究发现，HIFU除可以有效破坏癌组织外[7]，还提高机体的抗肿瘤免疫力[7]，为卵巢癌的治疗提供新思路。

本课题首次采用Walker-256建立原位卵巢癌模型，观察HIFU的治疗效果以及对肿瘤免疫的影响，以探寻一种较好的微创治疗方法。

1 材料与方法

1.1 实验材料

Walker-256肿瘤细胞由中国医学科学院提供，40只雌性SD大鼠[许可证编号：SYXK（赣）2015-0001]，购自南昌大学动物中心，体重250～300 g，所有大鼠饲养于实验室动物房，实验中对动物的处置符合医学伦理学标准。

1.2 动物模型的建立

大鼠卵巢癌模型构建根据本课题组前期研究方法[8]，SD大鼠麻醉后固定于手术台，取腹部旁纵切口逐层进腹。将1 mm3大小的Walker-256肿瘤组织块种植在卵巢内。构建成功14 d后，随机分为对照组和HIFU组，每组20只。HIFU组大鼠进行HIFU治疗，对照组给予假照射处理。

1.3 HIFU治疗过程

大鼠麻醉固定后扫描皮下肿瘤超声图像，点间距1.6 mm，功率 30 W，时间 1 s，总治疗时间约 60 s，治疗过程中实时监控超声图像，根据消融后超声灰度图的变化估算消融体积，消融1次完成。

1.4 观察指标

大鼠解剖后分离收集肿瘤组织进行称量，计算抑瘤率。抑瘤率（%）=（对照组平均瘤重-HIFU组平均瘤重）/对照组平均瘤重×100%。HE染色法观察肿瘤组织形态学变化；利用流式细胞仪检测血浆中CD4+与CD8+百分比，并计算 CD4+/CD8+值。

1.5 统计学方法

利用SPSS 22.0软件分析数据，计量资料以均数±标准差（

±s）表示，两组间数据比较采用 t检验，多组数据比较采用单因素方差分析，采用Kaplan-Meier进行生存分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠的一般状况及两组生存时间的比较

大鼠在构建卵巢癌模型14 d后逐渐出现皮毛松散、行动迟缓以及腹水，14 d内均无死亡。大鼠经HIFU治疗7 d内，生活状态无变化或有好转，对照组大鼠逐渐衰竭。HIFU组大鼠中位生存时间为（48.0±4.5）d，明显长于对照组的（40.0±3.6）d（P<0.05）（图1）。

图1 两组大鼠的生存曲线

2.2 大鼠瘤体生长情况

HIFU 组大鼠瘤体平均重量为（1.37±0.92）g，显著低于对照组的（2.86±0.73）g（P<0.05）；其抑瘤率为52.11%，提示HIFU治疗具有显著抑制肿瘤生长的作用。

2.3 大鼠卵巢肿瘤组织形态学变化

大鼠卵巢组织经HE染色在光镜下观察，对照组大鼠卵巢组织内可见不规则癌巢，肿瘤细胞排列紧密，异型性明显，形态不规则，浆少、核分裂相多见、肿瘤内部可见部分坏死（图2A）；HIFU组大鼠卵巢组织细胞呈现皱缩，核染色质边集，可见明显大面积坏死，并伴有炎症细胞浸润（图2B）。

图2 HIFU治疗对大鼠卵巢癌组织形态学变化的影响（HE 染色，100×）

A：对照组大鼠卵巢组织，可见不规则癌巢及部分坏死；B：HIFU组大鼠卵巢组织，组织细胞呈现皱缩，可见明显大面积坏死，并伴有炎症细胞浸润。

2.4 两组大鼠治疗后细胞免疫功能相关指标的比较

卵巢癌大鼠经HIFU治疗后，血液中CD4+较对照组显著增高，CD8+较对照组显著降低，CD4+/CD8+较对照组提高，差异均有统计学意义（P<0.05）（表1）。

表1 两组大鼠治疗后细胞免疫功能相关指标的比较（

±s）

与对照组相比，*P<0.05

3 讨论

HIFU最早被应用于脑部实验与神经选择性损伤实验研究[9]，其原理是利用超声波可以穿透软组织的物理特性，使靶区的组织出现凝固性坏死[10-12]，该技术为卵巢癌等实体肿瘤患者的治疗提供了新思路[13]。

本实验利用原位移植法构建大鼠卵巢癌模型，该模型的生物学行为与临床病程更相似[14]。经HIFU治疗后大鼠生存状态无恶化，并能降低大鼠瘤体平均重量，抑瘤率超过50%，且病理检查证实能引起卵巢组织形态学改变，加速癌组织的坏死，这都较直观地证实了HIFU能有效抑制卵巢癌大鼠肿瘤组织的生长。

研究发现，HIFU在破坏癌组织的同时，可提高机体的抗肿瘤免疫力[15-16]。有报道称，HIFU治疗能影响瘤荷W256肝癌鼠局部组织中T淋巴细胞亚群组成而提高其免疫能力[17]。本研究结果显示，卵巢癌大鼠经HIFU治疗后CD4+细胞和CD8+细胞发生变化，其中CD4+细胞增加明显，且CD4+/CD8+细胞比值＞1，提示HIFU治疗能改善大鼠的免疫功能。

HIFU抑瘤作用主要是加速瘤组织的凝固性坏死[18-19]。此外，HIFU可暴露隐蔽的肿瘤抗原，加速清除残余癌细胞[20]。但HIFU在治疗卵巢肿瘤中的效果仍需进一步研究。

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