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龙血竭为百合科龙血树属物剑叶龙血树Dranaenacochinchinensis(Lour.)S.C.Chen的含脂木材中经提取得到的树脂，主产于广西和云南南部[1]，其呈不规则块片，红棕色至黑棕色，有光泽，质脆，气特异，微有清香，味淡、微涩。嚼之有碳粒感并微粘齿。本品具有活血散瘀、定痛止血、敛疮生肌等功效，主要用于跌打损伤、外伤出血等[2]，其外用可以治疗急性软组织损伤、糖尿病足溃疡及压疮等[3-6]。目前市售龙血竭制剂，有龙血竭胶囊剂、散剂、片剂等，大多用于口服，但也有人采用将胶囊壳打开，把内容物直接洒在伤口上外用或与75%乙醇混合使用的方式[7-9]，还有人把片剂粉碎用生理盐水调成糊状使用[10]，但上述用药方式既不方便也不规范。目前市售含有龙血竭原料药的外用制剂，例如复方金凤搽剂[11]，使用时直接涂抹，存在涂抹时有效成分流失性大且易污染衣物等缺点。药品研究机构和医院也对龙血竭的外用剂型进行了研究，例如复方龙血竭凝胶剂和复方龙血竭巴布剂等[12-13]，但上述剂型往往还添加有其他药材，同时存在着不易涂抹均匀的问题。为了提高药效，方便使用，制备出一种喷雾膜剂可以较好解决上述存在的问题。喷雾膜剂是一种外用长效制剂，其同时结合了喷雾剂、涂剂、膜剂、贴剂的优点，使用时不仅能呈雾状喷出，而且能快速成膜，既延长了药物在病灶部位的滞留时间，提高疗效，也因其成膜状覆盖病灶部位，减少了二次感染[14-15]。本实验对一种新型的龙血竭喷雾膜剂的制备进行了研究，现报道如下。

1 实验材料

1.1 仪器

DMHL生物显微镜[徕卡显微系统（上海）贸易有限公司]；SZX7体视显微镜（广州明美电子有限公司）；ME204E/02电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；HH-S4型电热恒温水浴锅（北京科伟永兴仪器有限公司）；DF-101Z集热式恒温加热磁力搅拌器（河南省予华仪器有限公司）；EYEL4油浴锅（上海爱朗仪器有限公司）；KQ5200B型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；150 mm数显游标卡尺（上海九量五金工具有限公司）；乳钵。

1.2 药材与试剂

龙血竭（广西中医药大学制药厂，批号：20151001）；聚维酮K30（PVP-K30）（博爱新开源制药股份有限公司，批号：P160122013-1）；羟丙甲纤维素（HPMC）（山东光大科技发展有限公司，批号：20140602）。

2 实验方法

2.1 单因素实验

2.1.1 溶解性考察分别称取龙血竭药物8份，每份4.0 g，依次加入100 ml乙醇，浓度100%（无水乙醇）、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%进行溶解性考察。

2.1.2 成膜材料的初步筛选本实验主要选取A：PVPK30成膜材料，以成膜性和显微形态为评价指标；B：HPMC辅助成膜材料，以成膜性和显微形态评价指标；A+B：PVP-K30+HPMC两种成膜材料，以成膜性、显微形态、膜感官柔软性为评价指标。

①成膜性：取配制好的各成膜材料浓度适量，喷在去毛大鼠皮肤表面，自然挥干成膜后[16]，分别用不成膜、稍微成膜、成膜和膜厚薄进行描述成膜情况。②成膜性能的显微形态[15，17]：将配制好药液与辅料不同浓度制成的龙血竭喷雾膜剂，喷涂在25.0 mm×76.2 mm载玻片上，置常温下挥干，在生物显微镜40倍镜下观察，调整显微镜的光圈和焦距，采用拍照软件Leica ec3 Camera对表面形态结果进行拍摄，以膜的均匀性、膜的边缘平整度、辅料与药物的融合程度来评价膜的性能。③膜感官柔软性[18]：取配制好的各成膜材料适量，涂抹于手背部、腕部皮肤，成膜后，以柔软、较柔软、硬来标明膜的柔软程度。柔软是指成膜后皮肤几乎无紧绷感、手触膜感软；较软柔是指成膜后皮肤有稍微紧绷感、手触膜感柔软；硬是指成膜后皮肤有紧绷感、手触膜感硬。

2.1.3 成膜材料溶液的配制 A：4.0%龙血竭＋PVPK30溶液，取PVP-K30适量，分别配制100 ml质量浓度为3.0%、4.0%、5.0%、6.0%、7.0%、8.0%的溶液，备用。B：4.0%龙血竭+HPMC溶液，取HPMC适量，先溶胀，溶解分别配制质量浓度为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%溶液，备用（100 ml）。 A+B：4.0%龙血竭+PVP-K30溶液+HPMC溶液，先取PVP-K30适量配制6份6.0%的溶液，再取HPMC适量，溶解分别配制100 ml质量浓度为 0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%的HPMC溶液和6.0%PVP-K30溶液混合均匀。

2.2 正交设计实验

2.2.1 评价指标 ①成膜性：取上述配制好的各成膜材料溶液，喷在去毛大鼠皮肤表面，待成膜后，分别用极薄、薄、适中、厚、极厚来评价成膜情况[16]。以测得的能成膜且成膜适中为最大值100分，若未成膜计0分。成膜情况以极薄、薄、厚、极厚来划分，每增加一个等级递减20分。②均匀性：取供试品，置载玻片上，在50倍显微镜下观察，用明美成像拍照软件Mshot MD50拍出五个视野内平均垂直的粒径计算平均值，其平均值最小者为100分，最大者为0分，每增加5μm扣减10分[17]。③成膜时间：取配制好的成膜材料浓度适量，喷适量在去毛大鼠皮肤表面，开始计时，观察药液流动性，药液不再流动即视为成膜[18-19]，以测得的最短成膜时间评价为100分，其余的每增加1 min就扣减10分。

上述3个评价指标按总体进行评分后，根据总体归一化法进行处理，计算综合得分。总分=（成膜性归一值+均匀性归一值+成膜时间归一值）。归一值（OD值）=（ymax-yi）/（ymax-ymin），ymax指样本最大值，ymin指样本最小值，yi指每一次的测量值。

2.3 验证实验

按正交实验的优选工艺制备3批龙血竭喷膜剂样品进行验证实验，增加外观性状、喷雾效果、喷射实验3项进行考察。①外观性状[20]：将喷膜剂喷于正常健康人的皮肤上，观察其外观。②喷雾效果[16，21]：掀压制备好的喷膜剂，以喷出细雾、雾状、线雾、线状分级评价，以细雾效果最优。③喷射实验[22-23]：取3批次供试品，每批次4瓶，除去瓶盖，分别按压试喷3次后，擦净，精密称定，记录数据。再喷射5次后，擦净，精密称定并记录数据。每批次供试品按上述方法重复操作3次，计算每瓶按压1次平均喷射重量（50 ml/瓶）。

3 实验结果

3.1 单因素实验结果

3.1 .1溶解度单因素考察结果

显微镜下观察结果提示，4.0%的龙血竭药量，在100%、95%、90%、85%、80%、75%乙醇浓度的情况下能完全溶解，无不溶解颗粒状，有弧形纹理分布，能较好融合。在70%、65%浓度的乙醇下不能完全溶解，有不溶颗粒状物质聚合，较粗糙。综合考虑，虽然80%以上乙醇溶解度好，但其刺激性强。75%乙醇溶解度较好，且制备成成品后具备一定消毒功能，所以选择75%浓度乙醇进行成膜性考察，于40倍显微镜下观察的药液显微结构结果见图1～8。

图1 4.0%龙血竭-100%乙醇显微图（40×）

图2 4.0%龙血竭-95%乙醇显微图（40×）

图3 4.0%龙血竭-90%乙醇显微图（40×）

图4 4.0%龙血竭-85%乙醇显微图（40×）

图5 4.0%龙血竭-80%乙醇显微图（40×）

图6 4.0%龙血竭-75%乙醇显微图（40×）

图7 4.0%龙血竭-70%乙醇显微图（40×）

图8 4.0%龙血竭-65%乙醇显微图（40×）

3.1.2 成膜材料单因素实验结果

PVP-K30和HPMC不同浓度制成的成膜材料，其成膜性、显微形态考察结果见表1。

表1 成膜材料单因素考察结果

“-”表示：成膜材料为单一成分A或B时，成膜情况不佳，显微形态不好，故未进一步做感官柔软性考察

3.2 正交实验结果

根据溶解度及单因素考察结果，进行正交实验，实验因素及水平见表2，实验结果及方差分析分别见表3、表4。

表2 正交实验因素及水平

表3 正交实验结果

表4 正交实验方差分析

F0.05（2，2）=19，*P＜0.05

表3 极差值表明，因素 C（0.7540）>D（0.6920）>A（0.4290）>B（0.1470）。该结果提示，四个因素中，PVPK30的用量对成膜性、均匀性、成膜时间的影响最大，为决定性因素。其次，HPMC的用量对其影响也较大，而药物浓度、乙醇浓度的用量相对于PVP-K30和HPMC而言，其影响较为微弱。因此，在龙血竭喷雾膜剂的制备过程中，影响喷雾膜剂综合质量的因素大小次序为C→D→A→B。

研究结果提示，PVP-K30对实验结果具有显著性影响，而HPMC浓度、药物浓度和乙醇浓度对实验结果均无显著性影响，结合表3中的K值可以判断出，本研究中龙血竭喷雾膜剂的最优处方为A3B2C1D1，即成膜材料PVP-K30为4.0%，HPMC为0.1%，药物浓度为4.0%，乙醇浓度为75%，以此配方所制成得喷雾膜剂成膜性、均匀性好，有较好的成膜时间。

3.3 验证实验结果

3.3.1 验证实验结果

经过3批次的验证，提示龙血竭喷雾膜剂具成膜性好、成膜均匀且成膜时间合适、喷雾效果良好等特点。

表5 验证实验结果

均匀性测量结果，以显微观察到粒径计算平均值，均匀性、成膜时间用均数±标准差（

±s）表示（n=3）

3.3.2 验证实验喷射检查结果

经过3批次喷射实验的验证，提示龙血竭喷雾剂的每次喷射量稳定。

表6 验证实验喷射检查结果（mg，

±s）

4 讨论

本研究结果提示，当原料药4.0%龙血竭含量时，以75%乙醇溶剂、4%PVP-K30为主要成膜材料，以0.1%HPMC为辅助成膜材料，成膜快速，遇水易脱落，所制得喷雾膜剂的成膜时间、成膜性能、膜感官柔软性各项指标均较好。

龙血竭在甲醇、乙醇中溶解性好，不溶于水[2]，故采用乙醇为溶剂。本研究通过了解4.0%龙血竭在不同浓度乙醇下的溶解情况，提示，75%乙醇溶液下龙血竭有较好的溶解性，对皮肤刺激较小，有一定的消毒功能，从而选用75%浓度的乙醇。

本实验喷雾膜剂制备工艺研究中，重点在筛选成膜材料，喷雾膜剂通常以溶液的形式保存，喷出接触空气后能较短时间内成膜，单种材料往往使用量较大，也较难成膜，结合各种药用辅料的优缺点[24]，经过筛选，确定PVP-K30作为主要成膜材料，HPMC作为辅助成膜材料，混合使用，成膜效果好，膜感官柔软性好，喷射效果稳定。

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