血红蛋白A2和胎儿血红蛋白联合检测在儿童β-地中海贫血筛查中的应用价值
常剑锋　罗宇婷　陈　莉
广东省肇庆市第二人民医院检验科，广东肇庆　526060
[摘要]目的探讨血红蛋白A2（HbA2）和胎儿血红蛋白（HbF）联合检测在儿童β-地中海贫血（β-地贫）筛查中的应用价值。方法选择2015年1月～2017年10月我院收治的48例β-地贫患儿为实验组，选同期于我院体检的50例健康儿童作为参照组。观察比较两组血浆中HbA2和HbF含量，以基因检测结果为金标准，利用受试者工作特征（ROC）曲线分析比较HbA2、HbF及两者联合曲线下面积（AUC）、最适界值点（cutoff值）、敏感度及特异度，并采用Logistic回归分析HbA2和HbF对β-地贫患儿的诊断价值。结果实验组血清的HbA2和HbF含量分别为（5.12±0.65）%和（1.27±0.86）%，明显高于参照组的（2.63±0.76）%和（0.49±0.38）%，差异均有统计学意义（P<0.05）。HbA2、HbF及两者联合的AUC分别为0.923、0.896和0.954，其中HbA2和HbF的cutoff值分别为3.5%和0.6%，两者联合诊断的灵敏度和特异度分别为97.92%和86.00%。二分类Logistic回归分析结果表明，HbA2和HbF指标对诊断β-地贫患儿均有统计学意义（P<0.05），且HbA2的诊断价值显著＞HbF。结论HbA2和HbF指标检测在儿童β-地贫筛查中均具有一定的应用价值，且HbA2的诊断价值明显优于HbF，两者联合诊断可大大提高诊断符合率。
[关键词]β-地中海贫血；HbA2；HbF；患儿；诊断
[中图分类号]R556.61
[文献标识码]A
[文章编号]1674-4721（2018）6（c）-0115-03
Application values of combined use of hemoglobin A2 and fetal hemoglobin in the screening of β-thalassemia in children
CHANG Jian-feng　LUO Yu-ting　CHEN Li
Department of Clinical Laboratory,the Second People′s Hospital of Zhaoqing City,Guangdong Province,Zhaoqing 526060,China
[Abstract]ObjectiveTo investigate the value of combined detection of hemoglobin A2　(HbA2)and fetal hemoglobin(HbF)in the screening of β -thalassemia in children.MethodsA total of 48 children with β -thalassemia admitted in our hospital from January 2015 to October 2017 were selected as the experimental group and 50 healthy children undergoing physical examination in our hospital as the reference group.The levels of HbA2 and HbF in the two groups were observed and compared.The gene test results were taken as the gold standard and used the ROC curve to compare HbA2,HbF and the area under the curve(AUC),cutoff value,sensitivity and specificity,and used the Logistic regression to analysis HbA2 and HbF in children with β-thalassemia diagnostic value.Results.The levels of HbA2 and HbF in the experimental group were　(5.12±0.65)%and　(1.27±0.86)%,which were significantly higher than those in the reference group　(2.63±0.76)%and　(0.49±0.38)%,respectively　(P<0.05).The AUC of HbA2,HbF and their combination were 0.923,0.896 and 0.954,respectively and the cutoff values of them were 3.5%and 0.6%respectively.The diagnostic sensitivity and specificity of HbA2 and HbF joint diagnosis were 97.92%and 86.00%respectively.Logistic regression analysis showed that both HbA2 and HbF were statistically significant in diagnosing β-thalassemia children　(P<0.05),and the diagnostic value of HbA2 was significantly higher than that of HbF.ConclusionDetection of HbA2 and HbF in children with β-thalassemia screening has a certain value,and the diagnostic value of HbA2 was significantly better than HbF,a combination of the two can greatly improve the diagnostic accuracy.
[Key words]β-thalassemia;HbA2;HbF;Children;Diagnosis
β-地中海贫血（β-地贫）主要是由于β-珠蛋白基因异常导致β链的合成受到部分甚至完全抑制的具有遗传性的一种血红蛋白病，患儿一般出生时无明显症状，多于婴儿期发病[1-2]。有研究表明，β-地贫通常跟结构异常的血红蛋白变异体一起出现，两者会相互影响引起患儿出现轻重不一、更加多样化的临床表现[3]。目前对于该疾病临床上还没有切实有效的治疗方法，故对人群中β-地贫携带者的筛查为控制本病的重要措施[4-5]。基因诊断是当前作为可靠的诊断方式，但由于成本较高不适合人群的普遍筛查，而常规的检测MCH、MCV和RDW虽然成本低且操作简便，但其灵敏度及特异度不高，容易出现误诊和漏诊情况[6-7]。本研究探讨HbA2和HbF联合检测在儿童β-地贫筛查中的应用价值，现将结果报道如下。
1　资料与方法
1.1　一般资料
选择2015年1月～2017年10月我院收治的48例β-地贫患儿为实验组，选同期于我院体检的50例健康儿童作为参照组。所有研究对象及家属知情同意并签署知情同意书，且本研究已经我院医学伦理委员会批准。实验组纳入标准：①基因诊断确诊为β-地贫患儿；②无其他感染性或血液性疾病的患儿；③无并发严重内科慢性疾病的患儿。参照组纳入标准：①基因诊断无珠蛋白基因异常的儿童；②体检结果为健康的儿童。实验组男30例，女18例；年龄3～14岁，平均（7.69±3.64）岁。 参照组男 28例，女 22例；年龄 2～15岁，平均（7.85±3.97）岁。 两组的年龄和性别等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。
1.2　方法
所有研究对象于清晨空腹状态下取2 ml EDTAK2抗凝静脉血，混合摇匀后，放置室温环境可行检测操作。利用capillarys 2 sebia fles piercing全自动毛细管血红蛋白电泳仪和配套试剂，对HbA2和HbF进行检测。其中HbA2含量＞3.5%，HbF含量＞2.6%为阳性结果。所有操作均严格按照操作说明书进行，以确保检测结果的准确性和真实性。
1.3　统计学方法
选择SPSS 22.0软件对本研究的数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验；利用ROC曲线及Logistic回归分析HbA2、HbF及两者联合诊断β-地贫患儿的价值，取Youden指数最大值作为cutoff值，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2　结果
2.1　两组HbA2和HbF含量的比较
实验组血清的HbA2和HbF含量分别为（5.12±0.65）%和（1.27±0.86）%，明显高于参照组的（2.63±0.76）%和（0.49±0.38）%，差异均有统计学意义（P＜0.05）（表1）。
表1　两组HbA2和HbF含量的比较（%，±s）

2.2　绘制ROC曲线分析
HbA2、HbF及两者联合AUC分别为0.923、0.896和0.954，其中HbA2的 cutoff值为 3.5%，HbF的 cutoff值为0.6%，两者联合诊断的灵敏度和特异度分别为 97.92%（47/48）和 86.00%（43/50）（表2、图 1）。
表2　HbA2和HbF及联合检测在诊断儿童β-地贫中的价值比较

 
图1　HbA2和HbF及联合诊断儿童β-地贫的ROC曲线
2.3　二分类Logistic回归分析
将HbA2和HbF诊断儿童β-地贫的作用大小利用二分类Logistic回归分析进行方程拟合，方程中两项指标对诊断均有统计学意义（P＜0.05），且HbA2的诊断价值显著＞HbF（表3）。
表3　HbA2和HbF的Logistic回归分析

3　讨论
β-地贫为我国南方较为常见的一种单基因遗传病，且携带者数量较多，目前仍无有效的根治方法，故对儿童开展大规模的筛查，并完善筛查方案选择高效的联合筛查方案对该疾病的早预防和早发现极其重要[8-9]。基因诊断是诊断地贫的金标准，但由于检测成本高，尚不能完全覆盖α或β-型珠蛋白基因，故并不适合用于大规模的筛查[10-11]。地贫患者通常会发生多样化的血红蛋白变体，相关研究表明，通过对红细胞一些参数如MCH和MCV等进行筛查地贫患者有一定的可行性，但准确性不高容易发生漏诊和误诊的情况[12-13]。有研究表明，β-地贫患儿体内HbA2和HbF含量普遍比正常人有所升高，这两项指标变化可作为β-地贫的重要特征[14]。本研究探讨HbA2和HbF联合检测在儿童β-地贫筛查中的应用价值，为临床诊断提供依据。
本研究结果显示，实验组血清的HbA2和HbF含量分别为（5.12±0.65）%和（1.27±0.86）%，明显高于参照组的（2.63±0.76）%和（0.49±0.38）%，差异均有统计学意义（P<0.05），提示β-地贫患儿血清中HbA2和HbF含量明显高于健康儿童。β-地贫患儿体内因为β型珠蛋白基因异常导致β珠蛋白链合成受到抑制，而δ和γ型珠蛋白基因由于机体代偿性增加转录过程，合成相应的珠蛋白以及α珠蛋白均有所增加，因此导致生成HbA2和HbF含量有所增加[15-16]。此外，本研究将HbA2和HbF诊断儿童β-地贫的作用利用二分类Logistic回归进行分析，结果显示两项指标的回归系数B值均＞0，提示两项指标和β-地贫患儿均有密切关系；两项指标的相关危险因素比值OR值均＞1，其中在其他条件不变的情况下，β-地贫患儿的HbA2含量发生异常的危险是正常人儿童的10.293倍，明显高于HbF的4.225倍，提示HbA2和HbF指标对诊断β-地贫患儿均有一定的诊断价值，且HbA2的诊断价值显著高于HbF，与石文等[17]的研究结果一致。
本研究以基因检测结果为金标准，绘制ROC曲线分析HbA2和HbF及联合诊断儿童β-地贫的应用价值，结果显示HbA2、HbF及两者联合的AUC均>0.9，表明三者均具有较高的诊断价值，与相关文献报道基本一致[18-20]。其中HbF的AUC为0.896，具有一定的诊断价值，但其灵敏度较低（81.25%），诊断准确率较低，容易造成漏诊情况；HbA2的AUC为0.923，灵敏度和特异度分别为97.92%和86.00%，具有较高的诊断价值；HbA2和HbF联合诊断的AUC最大达到0.954，且其灵敏度和特异度分别为97.95%和85.71%，明显提高了诊断符合率。此外，本研究结果中HbA2和 HbF的 cutoff值分别为 3.5%和 0.6%，即HbA2含量为3.5%，HbF含量为0.6%时具有较高的灵敏度和特异度，诊断儿童β-地贫的准确性最好。
综上所述，HbA2和HbF指标检测在儿童β-地贫筛查中均具有一定的诊断价值，且HbA2的诊断价值明显优于HbF，两者联合诊断可以大大提高诊断符合率，可有效降低筛查过程中出现的误诊及漏诊情况，在临床上值得进一步推广应用。
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（收稿日期：2018-03-06
本文编辑：崔建中）