Article Info

肥胖症是一种常见的代谢症群，它与糖尿病、高血压、血脂异常、癌症等慢性病密切相关[1]。20世纪80年代以来，随着人们生活水平的逐渐提高以及生活方式的改变，肥胖症的发病率也逐渐上升[2]，肥胖症可能会对健康和寿命产生明显影响[3]。因此如何有效地预防及治疗肥胖症已成为现今较为热门的研究问题。奥利司他（Orlistat）为目前少数被批准用于治疗肥胖症的药物，据研究，其对肥胖症有显著疗效[4-5]，但是有较多报道提及奥利司他的副作用，提示奥利司他可能影响胃肠道健康和肝脏功能，而且当停药时，则产生体重反弹。目前对奥利司他的安全性存在争议[5-9]。因此，对于治疗肥胖症并且副作用小的药物的探索十分迫切[10]。山楂、杜仲和陈皮是日常生活中常见的中草药，杜仲和山楂有影响胆固醇的代谢，抑制脂肪肝形成的功效[11-12]，陈皮对动物肠道菌群的分布有一定的调节作用，能干扰脂肪和胆固醇的吸收，抑制胰脂酶活动，促使甘油三酯从粪便中排出[13]。但是其对肥胖症的预防及治疗报道较少，本研究通过建立高脂饮食诱导的肥胖大鼠模型，以3种中药物混合治疗肥胖大鼠，取得了较显著的疗效，现报道如下。

1　材料与方法

1.1　试剂与动物

三酰甘油（TG）试剂盒（南京建成生物工程研究所，货号：A110-1）；总胆固醇（TC）试剂盒（南京建成生物工程研究所，货号：A111-1）；低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）试剂盒（江莱生物科技有限公司，货号：JL12049）；高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒（南京建成生物工程研究所，货号：A112-1）；脂肪酸合成酶（FAS）试剂盒（南京建成生物工程研究所，货号：H231）；高酰基辅酶A氧化酶（ACO）试剂盒（南京建成生物工程研究所，货号：M020）；MRS琼脂培养基（青岛海博生物科技有限公司）；BBL琼脂培养基（青岛海博生物科技有限公司）；伊红美蓝琼脂培养基（青岛海博生物科技有限公司）；肠球菌培养基（青岛海博生物科技有限公司）；奥利司他（国药准字H20030586，上海罗氏有限公司）。

Wistar雄性大鼠，SPF 级，体重（151.12±25.64）g，购于常州卡文斯实验动物有限公司，许可证号：SCXK（苏）2011-0003。

1.2　分组与给药

60只Wistar雄性大鼠经过5 d的适应性饲养后，随机抽取50只大鼠进行高脂肥胖造模，给予高脂饲料（主要成分包含：自制猪油11.0%，蛋黄8.0%，胆固醇1.5%及基础饲料80.5%），连续4周。将造模成功的大鼠随机分为5组，分别为：高脂组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组，每组各10只。

另外选取给予基础饲料饲养的10只大鼠作为对照组。中药低、中、高剂量组在给予高脂饲料的同时，按照大鼠体重比，每天分别灌胃1.0 ml/100 g、2.0 m l/100 g、4.0 ml/100 g的中草药混合汤剂，阳性对照组大鼠灌胃奥利司他悬浮液60 mg/（kg·d）。混合汤剂的主要成分为：杜仲 20 g、山楂 20 g、陈皮 15 g、苦荞 5 g、泽泻5 g，加入清水煎煮并浓缩至1000 ml。

在后续的治疗过程中，模型组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组均仍给予高脂饲料，空白组给予基础饲料，模型组和对照组以相同方法灌胃2.0 ml生理盐水。所有大鼠连续治疗8周。

1.3　观察指标及检测方法

1.3.1　Lee′s指数的测定

分别于治疗前后测量大鼠的体重以及鼻尖至肛门的长度，计算Lee′s指数。Lee′s指数反映大鼠的肥胖程度，

。

1.3.2　血液指标及肝脏指标的测定

给药结束后，所有大鼠禁食不禁水过夜，10%水合氯醛腹腔注射（100 μl/10 g）麻醉，采集大鼠血液，室温放置30 min后，3000 r/min离心10 min，收集血清于-80℃保存；取肝脏组织样本保存在生理盐水中，于-80℃保存；用Elisa试剂盒检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C含量及肝脏中FAS、ACO的含量。

1.3.3　肠道菌群的培养和计数

取1 g新鲜粪便于无菌离心管中，按照1:9（质量:体积）加入无菌PBS缓冲液稀释，涡旋混匀仪混匀，获得10-1稀释液。再将10-1稀释液进行梯度稀释，直至获得10-4、10-5及10-6稀释液。分别取100 μl的10-4、10-5及10-6三种梯度稀释液涂布于伊红美蓝琼脂培养基（大肠埃希菌）、MRS琼脂培养基（乳酸菌）、肠球菌琼脂培养基（肠球菌）、BBL琼脂培养基（双歧杆菌）上，每个稀释度做3个平行实验，整个过程30 min中内完成。37℃孵育48 h，之后进行菌落计数，结果表示为CFU/ml（菌落计数前，首先挑取特征菌落，进行生态生化试验，鉴定该菌属）。

1.4　统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（

±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　各组大鼠治疗前后体重及Lee′s指数的比较

治疗前后，模型组大鼠的体重和Lee′s指数均显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后，高剂量组大鼠的体重和Lee′s指数显著低于模型组，中剂量组大鼠的体重低于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05），低剂量组大鼠的体重、Lee′s指数及中剂量组的Lee′s指数与模型组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。低剂量组大鼠的体重高于阳性对照组（P<0.05），但中、高剂量组大鼠的体重和Lee′s指数与阳性对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）（表1）。

表1　各组大鼠治疗前后体重及Lee′s指数的比较（

±s）

与对照组比较，*P<0.05；与模型组同期比较，#P<0.05；与阳性对照组同期比较，ΔP<0.05

2.2　各组大鼠血清血脂各指标水平的比较

治疗结束后，模型组大鼠的TG、TC、LDL-C均显著高于对照组，HDL-C低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后，高剂量组大鼠的 TG、TC、LDL-C水平显著低于模型组，HDL-C水平显著高于模型组，中剂量组的TG显著低于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05），低剂量组大鼠的 TG、TC、LDL-C、HDL-C水平及中剂量组大鼠的TC、LDL-C、HDL-C与模型组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。低剂量组大鼠的TG高于阳性对照组，HDL-C水平显著低于阳性对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），但中、高剂量组大鼠的TG、TC、LDL-C、HDL-C与阳性对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）（表2）。

表2　各组大鼠血清血脂各指标水平的比较（mm ol/L，

±s）

与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05；与阳性对照组比较，ΔP<0.05

2.3　各组大鼠肝脏FAS及ACO含量的比较

模型组大鼠的FAS含量显著高于对照组，ACO含量显著低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。高剂量组大鼠的FAS含量显著低于模型组，ACO含量均显著高于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。中剂量组大鼠的ACO含量显著高于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。低剂量组大鼠的ACO及低、中剂量组大鼠的FAS含量与模型组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）（表3）。

表3　各组大鼠肝脏FAS及ACO含量的比较（mm ol/L，

±s）

与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05

2.4　各组大鼠各类肠道菌群数量的比较

模型组大鼠肠道内的双歧杆菌、乳酸菌、肠球菌数量少于对照组，大肠埃希菌数量多于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。高剂量组大鼠肠道内的双歧杆菌、乳酸菌、肠球菌数量多于模型组，大肠埃希菌数量少于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05）。中剂量组大鼠肠道内的双歧杆菌、肠球菌数量多于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05）。中剂量组大鼠肠道内的乳酸菌、大肠埃希菌数量及低剂量组大鼠肠道内的双歧杆菌、乳酸菌、肠球菌、大肠埃希菌数量与模型组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）（表4）。

表4　各组大鼠各类肠道菌群数量的比较（CFU/m l，

±s）

与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05

3　讨论

目前最常用来研究的肥胖模型是营养性肥胖大鼠，因为与人类饮食引起的肥胖症有很多相似的特征，所以目前被广泛应用于肥胖症治疗的试验研究中[14]，一般将模型组与空白组体重比较，差异有统计学意义视为造模成功[15]。本研究采用雄性Wistar大鼠，饲以高脂营养性饲料8周后，模型组大鼠的体重显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），成功得到营养性肥胖大鼠模型。实验开始前和结束时分别测定大鼠的TG、TC、LDL-C水平，本研究结果提示，治疗后，模型组大鼠的 Lee′s指数、TG、TC、LDL-C 含量均显著高于对照组，HDL-C低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），提示出现血脂代谢紊乱。Mansuri等[15]研究了油麻藤种子提取物对营养性肥胖的大鼠的作用，结果表明油麻藤种子提取物能显著降低大鼠的血脂水平。在本实验中，高剂量组大鼠的Lee′s指数、TG、TC、LDL-C、FAS、ACO 含量与阳性对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05），说明杜仲、山楂和陈皮在一定程度上抑制了血脂代谢紊乱。

动物脂肪代谢与脂肪酸的合成、分解等过程息息相关，其中FAS是肝脏脂肪酸合成的关键因子[16-18]。ACO是在过氧化物酶体中对中、长链脂肪酸进行氧化的限速酶[19]。Barb等[20]研究发现，通过12周的高脂喂养大鼠后，大鼠肝脏内的成分含量显著升高。本实验结果提示，治疗后，模型组大鼠的FAS含量显著高于对照组，ACO低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），表明在3种混合中药的调控下，FAS显著降低，ACO含量显著升高，减缓了脂肪的累积。

肠道菌群的种类和数量水平微妙地影响着肥胖和心脑血管健康[21]，Turnbaugh等[22]将肥胖小鼠的菌群转移给无菌小鼠后，无菌小鼠脂肪量显著增加，并认为肠道内的菌群的差异可能是导致肥胖的因素之一。摄入适当益生菌能促进宿主的健康，令肠道内形成有益优势菌群，如乳酸菌能控制血清胆固醇水平，调节脂质的平衡[23]。本研究结果提示，模型组大鼠肠道内的双歧杆菌、乳酸菌、肠球菌数量少于对照组，大肠埃希菌数量多于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。高剂量组大鼠肠道内的双歧杆菌、乳酸菌、肠球菌数量多于模型组，大肠埃希菌数量少于模型组，差异均有统计学意义（P<0.05）。说明杜仲、山楂、陈皮混合药剂具有调节肠道菌群的功能，从而一定程度抑制血脂的紊乱。

综上所述，杜仲、山楂、陈皮混合使用与治疗营养性肥胖的大鼠有较显著疗效，降低大鼠血清中的血脂水平，调节肝脏中酶活性，并调节肠道中的菌群分布，有效降低机体的脂肪含量，达到降脂减肥的作用。

[参考文献]

[1]Kopelman PG.Obesity as a medical problem[J].Nature，2000，404（6778）：635-643.

[2]Lobstein T，Jackson-Leach R，Moodie ML，et al.Child and adolescent obesity：part of a bigger picture[J].Lancet，2015，385（9986）：2510-2520.

[3]Organization WH.WHO Obesity and overweight[M].Springer New York，2015.

[4]刘井如，季宇彬，陈明苍.奥利司他对营养性肥胖大鼠的减肥作用[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（7）：186-188.

[5]Halpern B，Halpern A.Safety assessment of FDA-approved（orlistat and lorcaserin） anti-obesity medications[J].Expert Opin Drug Saf，2015，14（2）：305-315.

[6]訾梅，李祥霞.奥利司他的不良反应及安全应用[J].药物不良反应杂志，2007，9（3）：182-185.

[7]陈曦，梁冰，王一歌，等.奥利司他对肥胖伴非酒精性脂肪性肝病的作用及危险因素的影响[J].临床肝胆病杂志，2006，22（2）：123-124.

[8]马凌悦，周颖，崔一民.奥利司他的不良反应与药物间相互作用研究[J].中国药房，2012，23（22）：2090-2092.

[9]Cahill A，Lean ME.Review article：malnutrition and maltreatment——a comment on Orlistat for the treatment of obesity[J].Aliment Pharmacol Ther，2015，13（8）：997-1002.

[10]Yanovski SZ，Yanovski JA.Long-term drug treatment for obesity：a systematic and clinical review[J].JAMA，2014，311（1）：74-86.

[11]Hao S，Xiao Y，Lin Y，et al.Chlorogenic acid-enriched extract from Eucommia ulmoides leaves inhibits hepatic lipid accumulation through regulation of cholesterol metabolism in HepG2 cells[J].Pharm Biol，2015，54（2）：1-9.

[12]KausarS，ZaheerZ，SaqibM，etal.Roleofcrataegus（hawthorn）extract on obesity in hyperlipidemic albino rats[J].Pak J Med Sci，2012，6（1）：100-103.

[13]陈琛，江振友，宋克玉，等.中草药对小鼠肠道菌群影响的实验研究[J].中国微生态学杂志，2011，23（1）：15-17.

[14]Samout N，Ettaya A，Bouzenna H，et al.Beneficial effects of Plantago albicans on high-fat diet-induced obesity in rats[J].Biomed Pharmacother，2016，84（2）：1768-1775.

[15]Mansuri J，Paranjape A.Evaluation of anti-obesity effect of aqueous extract of mucuna pruriens seeds on rats[J].Int J Pharm Pharm Sci，2017，9（3）：111-115.

[16]陈光亮，李莉，严尚学，等.盐酸西布曲明对营养性肥胖大鼠的减肥作用[J].中国临床药理学与治疗学，2003，8（1）：55-58.

[17]Peng I C，Chen Z，Sun W，et al.Glucagon regulates ACC activity in adipocytes through the CAMKKβ/AMPK pathway[J].Am J Physiol Endocrinol Metab，2012，302（12）：1560-1568.

[18]QiuW，Kohen-AvramogluR，MhapsekarS，etal.Glucosamineinduced endoplasmic reticulum stress promotes ApoB100 degradation：evidence for Grp78-mediated targeting to proteasomaldegradation[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2005，25（3）：571-577.

[19]Karbowska J，Kochan Z.Effect of DHEA on endocrine functions of adipose tissue，the involvement of PPAR gamma[J].Biomed Pharmacother，2005，70（2）：249-257.

[20]Barb D，Portillo-Sanchez P，Cusi K.Pharmacological management of nonalcoholic fatty liver disease[J].Metabolism，2016，65（8）：1183-1195.

[21]Henaomejia J，Elinav E，Jin C，et al.Inflammasome-mediated dysbiosis regulates progression of NAFLD and obesity[J].Nature，2012，482（7384）：179-185.

[22]Turnbaugh PJ，Ley RE，Mahowald MA，et al.An obesityassociated gut microbiome with increased capacity for energy harvest[J].Nature，2006，444（7122）：1027-1031.

[23]黄小琼，刘盛来，郑佳林，等.合生元益生菌冲剂对小鼠肠道菌群调节作用的研究[J].中国比较医学杂志，2011，21（10）：127-130.