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巨细胞病毒感染是由人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）引起的人类感染性疾病。HCMV一旦侵入体内，将长期或终身存在体内，在绝大多数免疫正常个体，常成无症状感染，但在免疫抑制个体，新生儿及婴幼儿可出现明显病症，表现为肝炎、肺炎、脑膜脑炎、智力低下和先天性耳聋等。HCMV可从宿主尿液、血液及呼吸道分泌物等多个部位排出，国内外已广泛进行血尿痰等不同标本的检测[1-2]，尿液标本因其阳性率较高[3]、无创伤，易为患儿及家属所接受。目前国内外已有晨尿标本检测HCMV-DNA水平的相关报道[4]，但新生儿及婴幼儿因其排尿控制较困难，有时需采集其他时段随机尿标本。本研究通过对不同时段尿应用实时荧光定量PCR技术检测HCMV-DNA水平，比较晨尿与随机时段尿的HCMV阳性检出率，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年9月～2017年2月我院儿科收治的30例HCMV感染患儿，其中，男16例，女14例;年龄34 h～1 岁，平均（6.5±2.7）个月。所有患儿分别于清晨采集晨尿作为晨尿组，于其他时段采集尿液作为随机时段组。所有患儿均符合《巨细胞病毒感染诊断方案》中诊断标准，经我院医学伦理委员会批准，患儿家属对本研究知情，且签署知情同意书。其中下呼吸道感染25例，高胆红素血症2例，肠炎3例，部分病例病程较长。

1.2 方法

标本采集：晨尿组患儿于清晨6时采集患儿晨尿，随机时段尿组患儿当天任意时间内采集患儿尿标本。仪器试剂：采用ABI7300型荧光定量PCR仪（美国）检测HCMV，核酸扩增荧光定量检测试剂盒（中山大学达安基因股份有限公司）。检测方法：将采集到的尿液标本轻轻颠倒摇匀，用加样枪吸出100 μl，取离心管，装入DNA浓缩液100 μl，将吸出的尿液标本一并加入，振荡摇匀，在离心机上按12000 r速率离心10 min，将上清液去除，将DNA提取液20 μl加入到剩余的沉淀物中打匀，然后进行瞬时离心数秒，在100℃条件下保温10 min，再行12000 r速率离心5 min，然后取出2 μl上清液做PCR扩增。

1.3 判断标准

阳性：HCMV-DNA呈典型S型增长曲线，试验定量结果＞500 copies/ml；阴性：不符合阳性判断标准即为阴性。

1.4 统计学方法

采用统计学软件SPSS 19.0分析数据，计量资料以均数±标准差（

±s）表示，采用 t检验；计数资料以率表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

通过对不同时段患儿尿采用实时荧光定量PCR技术检测，结果显示，晨尿组，阳性检出率为90.00%，随机时段组，阳性检出率为66.67%，两组比较，晨尿组阳性检出率明显高于随机时段组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 两组患儿阳性检出结果的比较

3 讨论

HCMV感染是由HCMV引起的人类感染性疾病。我国是HCMV感染的高发区，平均感染率高达80%～90%[5]。HCMV一旦侵入体内，将长期或终身存在体内，在绝大多数免疫正常个体，常成无症状感染，但在免疫抑制个体，新生儿及婴幼儿可出现明显病症，表现为肝炎、肺炎、脑膜脑炎、智力低下和先天性耳聋等。HCMV可从宿主尿液、血液及呼吸道分泌物等多个部位排出，国内外已广泛进行血尿痰等不同标本的检测，尿液标本因其阳性率较高、无创伤，易为患儿及家属所接受。

HCMV属双链DNA病毒，仅在人和人间传播，具有高度的种属特异性，其生物学特征表现为潜伏-活化，婴幼儿活动性HCMV感染会造成终末器官病变，以肝炎肺炎等为主要表现形式，在对患儿治疗时，及早对小儿HCMV感染准确、快速、便捷的诊断，能为临床治疗提供可靠的依据[6]。现阶段，HCMV感染诊断中，主要依靠实验室检查，包含血清特异性抗体检测、病毒培养、抗原血症检测、DNA的PCR检测、组织病理学检测及CMV-RNA检测等。而现阶段比较推崇的检测方法为CMV-DNA定量检测，通过对荧光信号积累，对PCR进程实时监测，从而实现定量分析的目的。而在对不同标本检测时，标本的采集时间对检测结果也会带来较大的影响。

尿液检查是当前临床检查中重要的检查项目之一，应用范围非常广泛，有利于医生对疾病进行判断，掌握患者的病情，并且作为检测的标本，尿液取材更加方便，PCR定量检测结果更加准确，在HCMV感染动态观察中，以尿液作为检验标本应用效果更好[8]。为了使尿检有效性得到提高，全自动尿沉渣分析仪在尿检中的应用越来越多，有效提高了尿检速度的同时，尿检效率也得到提高。而影响尿检结果准确性的因素有很多，包含尿液采集时间、检验时间及容器污染等因素，都会导致检验结果出现差异[9-10]。本研究结果显示，晨尿组阳性检出率达到90.00%，而随机时段组阳性检出率仅为66.67%，提示尿液标本采集时间段的不同，对检测结果的影响非常大。之所以选择晨尿，即清晨起床后空腹状态下首次排除的尿液，究其原因，主要是由于人在经过一夜的睡眠后，清晨首次晨尿在人体内会经过浓缩后发生酸化，在酸性环境中，尿液内上皮细胞、血细胞及管型等有形成分更为稳定；并且清晨尚未进食，尿液成分不会受到饮食的影响，保证了化学成分测定的准确性[11-12]；反之，采集随机时段尿液标本时，患儿随时排尿使得体内尿液不会聚集发生酸化，并且经过运动、饮食等因素的影响，尿液中各种检测指标也变得分散、稀释，反映在检验结果中，就会出现结果准确性下降的情况，如餐后尿，因此时机体的代谢比较旺盛，肾血流量增大，白细胞边缘池进入循环池，病理成分也有所增加[13-14]。所以尿液中的细胞含量相对较高，由于随机尿不受时间的限制，所以在急诊与门诊患儿尿液筛查中更为适合，标本也比较新鲜，容易获取，但所采集的尿液标本只能对一段时间内患者机体的情况进行反映，容易受多种因素的影响，导致病理临界物质浓度降低，出现漏诊情况[15]。也有研究认为，晨尿在膀胱内存留的时间过程，尿液中的葡萄糖及硝酸盐等成分容易被分解，对在酸性环境中容易改变的物质不易被检测出来，所以认为采集清晨第2次晨尿作为尿液标准来检测更加准确[9]。因此在多种尿检项目中都要求采集患者晨尿作为标本来检验。

综上所述，对HCMV感染患儿用荧光定量PCR法检测，不同时段尿液标本对检测结果会带来极大的影响，随机时段尿液标本由于有形成分含量低，因此检测结果准确性不高；而晨尿因其保留了被检测成分物质的含量及形态，所以阳性检出率更高，检测结果更准确，在小儿HCMV检测中应用效果较好，在临床中有推广应用的价值。

[参考文献]

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