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复发性流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指与同一性伴侣连续发生3次及3次以上的自然流产，常见的原因有染色体异常、解剖异常、内分泌异常、感染等，但仍有1/2的患者病因不明，称为原因不明性复发性流产（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）。有研究发现，正常的雌孕激素水平能够促进子宫内膜容受性，有利于胚泡的植入及胎盘的形成发育，可以维持胚胎持续生长发育[1]。也有研究发现，芳香烃受体（AHR）可通过配体依赖的方式调节调节性T细胞的分化和巨噬细胞、树突状细胞等重要免疫细胞的功能[2]，参与许多重要的生理过程[3]，如细胞周期和增殖的调控、细胞分化和凋亡、信号转导、免疫应答、昼夜节律、肿瘤诱发[4]、脂类代谢有关基因的表达、胚胎的形成、胎儿生长、血管的形成和重塑等[5-8]。本研究通过检测RSA患者及正常对照组患者血清中AHR、人绒毛膜促性腺激素（HCG）、雌二醇（E2）、孕酮（P），绒毛及蜕膜组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的水平，分析AHR在RSA中的作用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年9月～2017年3月在我院因胎停育而行清宫术的30例患者作为研究组，纳入标准为男方精液分析正常，女性月经周期正常，无生殖器官解剖结构异常、自然流产史或胎停育史2次以上，抗心磷脂抗体、抗核抗体、药物基因、同型半胱氨酸均无异常，夫妇双方染色体检查正常的患者。选择同期在我院要求行人工流产的30例患者作为对照组，纳入标准为此前有正常生育史，无自然流产史或胎停育史，超声提示可见胚胎原始心管搏动，未合并其他相关疾病。本研究已经过医院医学伦理委员会同意，研究对象签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 标本采集及处理收集两组早孕妇女的血清、绒毛及蜕膜组织。血清置于离心机中，以3000 r/s离心15 min后取上清液，置于-70℃冰箱中备用；将绒毛及蜕膜用生理盐水进行漂洗，剪取200 mg，加入生理盐水1.8 ml，使用玻璃研磨器进行研磨，置于离心机中，以3000 r/s速度离心15 min，提取上清液，置于-70℃冰箱中备用。

1.2.2 Elisa试验方法采用Elisa试验方法对各个标本中的AHR、ER、PR进行检测。取出上述冰冻标本，室温下溶解，严格按照Elisa试剂盒说明书进行试验，得出数值。

1.2.3 化学发光法采用化学发光法检测各外周血标本中HCG、P、E2的浓度。取出每例患者血清标本，室温下溶解，严格按照各个试剂盒说明书进行试验，得出数值。

1.3 统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（

±s）表示，如符合正态分布，采用两样本t检验分别对实验组与对照组血清、绒毛、蜕膜的AHR进行比较，采用Pearson相关分析研究AHR与 HCG、E2、P、ER、PR 是否相关，检验水准 α＜0.05。

2 结果

2.1 两组病例AHR表达情况的比较

研究组与对照组血清、绒毛及蜕膜组织中均有AHR的表达。研究组绒毛及蜕膜组织中的AHR表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；研究组外周血中的AHR表达量与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表1）。

表1 研究组与对照组血清、绒毛、蜕膜组织中AHR相对浓度的比较（pg/ml，

±s）

2.2 两组病例血清中HCG、E2、P表达情况的比较

研究组血清中的HCG、E2、P含量明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2 研究组与对照组血清中HCG、E2、P相对浓度表达的比较（

±s）

2.3 两组病例绒毛、蜕膜中ER、PR的表达分析

研究组绒毛及蜕膜中ER、PR含量明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表3）。

表3 研究组与对照组绒毛、蜕膜含量的比较（ng/ml，

±s）

2.4 研究组各部位AHR与相关部位 HCG、E2、P、ER、PR的相关性分析

血清 AHR 与血清 HCG、E2、P 无相关（P＞0.05）；绒毛与蜕膜组织中AHR与相应部位的ER、PR无相关（P＞0.05）（图 1～图 7）。

图1 血清AHR与HCG的相关性（r=-0.41，P=0.22）

图2 血清AHR与E2的相关性（r=-0.16，P=0.38）

图3 血清AHR与P的相关性（r=-0.008，P=0.96）

图4 绒毛AHR与ER的相关性（r=-0.19，P=0.30）

图5 绒毛AHR与PR的相关性（r=-0.05，P=0.79）

图6 蜕膜AHR与ER的相关性（r=-0.29，P=0.11）

图7 蜕膜AHR与PR的相关性（r=-0.32，P=0.09）

3 讨论

AHR又称二恶英受体，是一种以多环芳香烃类化合物为配体的信使蛋白，在信号转导与基因转录中发挥作用，属于碱性螺旋-环-螺旋转录因子家族中的bHLH-PAS（periodaryl hydrocarbon receptor nuclear translocator-single minded，Pre-Arnt-Sim）亚家族成员，由805个氨基酸构成，N-端区域高度保守，C-端区域保守性低，易活化，需依赖配体激活[9]。其在各种生物体内广泛分布，多种哺乳类动物体内都含有AHR蛋白，不同物种和不同组织细胞中AHR含量不同[10]，人体中主要存在于肺、肝、肾、胎盘、扁桃体、B淋巴细胞等各种组织和细胞中[2]。AHR参与代谢环境中的污染物，其在毒理学研究中的作用被广为重视，通过与毒性配体结合，损害生殖系统功能，进一步对胚胎和胎儿产生不良影响[11]。已有不少研究发现，RSA与机体免疫异常有关。有研究者提出AHR可能参与Th17的表达上调，干扰Treg/Th17平衡，进而在母胎免疫调节中起作用，并影响妊娠结局[12]。也有学者推测AHR与滋养细胞的增值和凋亡密切相关，很可能介导了滋养细胞侵袭能力的调节。有动物实验显示[13]，AHR功能缺失的小鼠生殖功能受到严重损害，部分母鼠受精卵不能着床，着床后不能维持正常妊娠等。本研究结果显示，RSA患者绒毛及蜕膜组织中AHR的含量明显高于对照组，而外周血中无明显差异，提示局部组织的AHR聚集可能影响胚胎发育不良，是导致胚胎停育的主要原因。

血HCG是由合体滋养细胞分泌的一种糖蛋白激素，其作用在于维持早期妊娠黄体的继续生长，刺激黄体产生雌激素，以维持妊娠，直至完全被胎盘取代[14]。妊娠早期，孕酮随着HCG的升高而升高，且呈正相关，若系血中孕酮水平低下或下降提示黄体或胎盘功能不足，不能维持继续妊娠[15]。孕酮对孕卵着床建立适宜的子宫内膜环境、早孕阶段建立充分恰当的免疫环境发挥重要作用，上调人白细胞抗原G（HLAG）表达，维护母胎免疫平衡[16]。孕激素还可使子宫肌纤维松弛，兴奋性降低，同时降低妊娠子宫对宫缩素的敏感性，减少子宫收缩，有利于受精卵在子宫内生长发育[17]。可见，孕激素对于排卵、受精乃至整个妊娠的维持均起着非常重要的作用，然而其功能的发挥主要是靠孕激素受体PR来实现的[18]。E2对ER起正调节作用，P对PR起负调节作用。PR的合成依赖于ER的合成通路，且E2和P必须在一定的比例范围内存在，才能正确诱导受体的合成，使激素受体的组织学效应达到最佳状态[19]。本研究结果显示，血清HCG、E2、P的表达维持着正常妊娠，任意一者发生偏离都会导致流产的发生，ER、PR的正常表达比例也是维持妊娠的重要条件，E2、P通过ER、PR才能发挥相应作用。

本研究中，血清AHR与血清HCG、P、E2无明显相关性，绒毛及蜕膜中AHR与ER、PR也无明显相关性，提示AHR并不通过ER、PR影响正常妊娠，可能其直接影响妊娠结局，也可能是通过其他因素间接影响妊娠结局，就像上述所说通过影响Th17/Treg细胞的平衡，进而影响母胎界面微环境，导致胎停育。

AHR表达广泛，其配体多样，通过与各种配体的结合影响着妊娠的结局，本研究提示AHR局部聚集导致不良妊娠结局的发生，但并非通过雌孕激素、ER、PR实现，关于AHR过高导致RSA的机制，有待进一步研究。

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