舒如明 何 洁▲

南昌大学第三附属医院（南昌市第一医院）妇产科，江西南昌 330008

[摘要]目的探讨肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导剂（TWEAK）和成纤维细胞生长因子诱导型14（Fn14）在子宫内膜异位症（EMs）中的表达与功能。方法选取2014年6月～2015年6月我院妇产科收治的50例EMs患者作为研究对象，其中30例为异位囊壁组，20例为在位内膜组，同时收集与研究组匹配的因子宫肌瘤、宫颈病变等疾病接受全子宫切除术的20例患者作为对照组。利用免疫组织化学、Western－Blot及RT－PCR检测TWEAK、Fn14在不同组的基因和蛋白表达，根据所得数据分析TWEAK、Fn14表达水平与CA－125水平、抗子宫内膜抗体（EMAb）、修正子宫内膜异位症分期（r－AFS）的相关性。结果三组患者的TWEAK、Fn14阳性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；异位囊壁组、在位内膜组患者的TWEAK、Fn14阳性表达率均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；EMs患者 TWEAK、Fn14 阳性表达率在 r－AFS、CA－125、EMAb 中差异有统计学意义（P＜0.05）；TWEAK、Fn14表达水平与 r－AFS、CA－125、EMAb 均成正相关（P＜0.05）。结论TWEAK/Fn14 参与子宫内膜异位症的发生和发展，TWEAK/Fn14水平异常可导致子宫内膜细胞的凋亡水平下降。

[关键词]子宫内膜异位症；TWEAK；Fn14；免疫组织化学

具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫内膜以外部位时称为子宫内膜异位症（EMs）[1]。EMs是一种激素依赖性疾病，可表现出盆腔疼痛和（或）不孕症等临床症状[2]。有资料显示肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导剂（TWEAK）及受体成纤维细胞生长因子诱导分子14（Fn14）在多种肿瘤细胞与组织中的表达，具有广泛的生物学活性，在诱导细胞凋亡，促进细胞增殖和血管形成，提高细胞侵袭力，诱导炎症因子表达等方面发挥作用，参与疾病的发生与发展，严重影响患者预后情况[3]。因此，本研究利用免疫组织化学、Western－Blot及RT－PCR检测TWEAK、Fn14在不同组的基因和蛋白表达水平，结合CA－125水平、抗子宫内膜抗体（EMAb）、修正子宫内膜异位症分期（r－AFS）等数据，探讨TWEAK/Fn14在子宫内膜异位症中的表达与功能，具体报道如下。

选取2014年6月～2015年6月本院妇科收治的50例EMs患者作为研究组，同时选取与研究组匹配的因子宫肌瘤、宫颈病变等疾病接受全子宫切除术的20例患者作为对照组。本研究经医院伦理委员会审核，内膜提供者均对本次研究知情并签署同意书。研究组纳入标准：均在我院妇产科医院行腹腔镜或手术治疗，术中所见及术后病理均证实为EMs患者；一般资料及临床资料完整者。研究组排除标准：失防患者；术前3个月内未接受激素治疗的患者；严重意识障碍，无法配合调查者；合并内分泌、免疫性、代谢性等其他疾病。年龄 20～50 岁，平均年龄（35.49±7.24）岁；月经规律，周期 26～35 d，平均周期（29.49±3.24）d；30 例异位囊壁组，20例在位内膜组（10例增生期内膜，10例分泌期内膜）；根据修正子宫内膜异位症分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期13例，Ⅲ期19例，Ⅳ期11例。对照组纳入标准：子宫肌瘤、宫颈病变等疾病接受全子宫切除术的患者；子宫内膜正常；对照组排除标准：EMs患者。年龄20～52 岁，平均年龄（36.59±7.34）岁；月经规律，周期26～35 d，平均周期（28.49±5.24）d。 异位囊壁组、在位内膜组及对照组三组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

所有患者均在术中刮取内膜，用剪刀剪下小块异位囊肿囊壁，部分置入液氮中冻存，部分用10%的甲醛固定，石蜡包埋，待用。用细胞定位（细胞膜、细胞质）、强度及分布评估免疫组化染色结果。TWEAK和Fn14水平和蛋白表达利用免疫组织化学检测[4－5]，兔抗人多克隆TWEAK抗体及羊抗人Fn14多克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司，PV9000免疫组化试剂盒、Ⅱ抗及DAB显色购自北京中杉金桥生物技术开发公司，所有实验操作步骤严格按说明书进行。统计三组患者的阳性率。实验结果由两位病理科医师独立进行观察判断。三组患者均在未经过任何治疗前采集静脉血并分离血清，将血标本立即离心10 min，去上清，检测CA－125水平，试剂由罗氏公司提供，产地上海；检测机器采用SIEMENS生产的APVIA Centaur CP机器，操作严格按照说明书进行。血清CA－125≥35 U/mL为阳性判断标准。

观察TWEAK以及Fn14在三组患者中的表达水平及与 CA－125 水平、EMAb、r－AFS 的临床相关性。r－AFS分期标准：按病变累及部位、大小以及粘连程度打分，对卵巢、腹膜、卵管的病灶和粘连分别加权评分，1～5 分为Ⅰ期，6～15 分Ⅱ期，16～30 分为Ⅲ期，≥31分为Ⅳ期。

采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。采用Spersman进行相关性分析，r＞0成正相关，r＜0成负相关，相关系数绝对值愈接近1，相关性愈密切。

50例EMs患者中TWEAK阳性41例，阳性表达率为 82.00%，Fn14阳性 40例， 阳性表达率为80.00%。三组患者的TWEAK、Fn14阳性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；异位囊壁组、在位内膜组患者的TWEAK、Fn14阳性表达率均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；异位囊壁组患者的TWEAK、Fn14阳性表达率与在位内膜组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表 1）。

EMs患者 TWEAK、Fn14阳性表达率在 r－AFS、CA－125、EMAb 中差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。2.3患者TWEAK、Fn14表达水平与EMs患者临床病理特征的相关性分析

患者的 TWEAK、Fn14 表达水平与 r－AFS、CA－125、EMAb 均成正相关（r=0.017，P＜0.05；r=0.127，P＜0.05；r=0.079，P＜0.05）。

EMs是一种激素依赖性疾病，可表现出盆腔疼痛和（或）不孕症等临床症状[6]。自1927年Sampson提出经血逆流种植学说以来，国外学者提出多种学说来解释EMs的发生，但其发病机制至今尚未阐明。近年来，免疫系统的异常及其在EMs发生发展的作用得到专家学者的重视[7]。TWEAK及其Fn14受体在EMs中的表达及功能，为EMs发病机制的进一步认识提供理论依据[8]。TWEAK为肿瘤坏死因子超家族成员之一，白细胞是TWEAK产生的主要来源，因此在各种炎性疾病或自身免疫性疾病的实验模型的炎症浸润组织中均可观察到TWEAK的高表达[9]。TWEAK通过与受体成纤维细胞生长因子诱导分子14结合而发挥作用[10]。Fn14是成纤维细胞生长因子诱导基因家族成员之一，为Ⅰ型跨膜蛋白。有研究表明TWEAK的异常可能参与了EMs的发病机制，但其在EMs的具体作用尚不清楚，需进一步研究[11]。

本研究利用免疫组织化学、Western－Blot及RTPCR检测TWEAK、Fn14在不同组别患者中的基因和蛋白表达水平，结果提示，50例EMs患者中TWEAK阳性41例，Fn14阳性40例，异位囊壁组患者的TWEAK、Fn14阳性表达率与与在位内膜组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），可能是因例数太少等外在因素影响所致。另外本研究结果提示，异位囊壁组和在位内膜组TWEAK、Fn14阳性表达率均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 其原因是 TWEAK与Fn14相互作用后，可诱导细胞内一些信号转导级联途径的活化，包括 NF－κB 通路（TAK1→Ikkβ→NF－κB→基因表达）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）途径（MKKS→ERK1/2、JNKS、p38→AP－1→基因表达，引起特定基因表达，从而参与细胞增生、退化、代谢及死亡[12－13]。 此外本研究结果还提示，TWEAK、Fn14 表达水平与 CA－125 水平、EMAb、r－AFS 成正相关，该结论提示EMs患者异位子宫内膜TWEAK表达降低，可导致子宫内膜细胞的凋亡水平下降，原因是TWEAK/Fn14通路协调炎症及祖细胞应答，说明其在急性组织修复中所起的生理性作用。而在慢性炎症性疾病模型中，TWEAK/Fn14表现为持续性活化，促进组织损伤，并可能阻碍内源性修复机制。TWEAK及其受体Fn14在多种肿瘤细胞与组织中表达，具有广泛的生物学活性，在诱导细胞凋亡，促进细胞增殖和血管形成，提高细胞侵袭力，诱导炎症因子表达等方面发挥作用[14]。EMs虽是良性病变，却具有侵袭、转移、复发等恶性生物学行为[15－17]。本研究认为子宫内膜异位症治疗方式有药物治疗和手术治疗，目前现有药物治疗往往效果不理想，而腹腔镜手术治疗是首选的手术方法，若该研究取得预期效果，可为将来EMs治疗提供一种新思路，在减轻患者痛苦、降低治疗费用、改善生活质量、降低不孕症发生率等方面，都将会产生良好的社会及经济效益。

综上所述，TWEAK/Fn14参与子宫内膜异位症的发生和发展，TWEAK/Fn14水平异常可导致子宫内膜细胞的凋亡水平下降。

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The role of TWEAK and Fn14 in the pathogenesis of endometriosis

SHU Ru-ming HE Jie▲
Department of Obstetrics and Gynecology,the Third Affiliated Hospital of Nanchang University (First Hospital of Nanchang City),Jiangxi Province,Nanchang 330008,China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression and function of tumor necrosis factor like apoptosis inducer(TWEAK)and fibroblast growth factor inducible 14(Fn14)in endometriosis(EMs).Methods50 EMs patients in department of obstetrics and gynecology of our hospital from June 2014 to June 2015 were selected as the subjects.Among them,30 cases were ectopic cyst wall group,20 cases were eutopic endometrium group.At the same time,20 patients who

received：hysterectomy in the study group matched with the diseases of uterine fibroids and cervical lesions were collected as the control group.Gene and protein expression in different groups by immunohistochemistry,Western－Blot and RT－PCR detection of TWEAK,Fn14,according to the data analysis of TWEAK,Fn14 expression level and CA－125 level,anti endometrial antibody(EMAb),modified endometriosis stage(r－AFS)correlation analysis.ResultsThe positive rates of TWEAK and Fn14 were significantly different between the three groups,the differences were statistically significant(P＜0.05).The positive rates of TWEAK and Fn14 in ectopic cyst wall group and eutopic endometrium group were significantly higher than those in the control group,the differences were statistically significant(P ＜0.05).The positive rates of TWEAK and Fn14 in patients with EMs were significantly different in r－AFS,CA－125 and EMAb,and the differences were statistically significant(P＜0.05).According to the correlation analysis,the expression levels of TWEAK and Fn14 were positively correlated with r－AFS,CA－125 and EMAb(P＜0.05).ConclusionTWEAK/Fn14 is involved in the occurrence and development of endometriosis.Abnormal levels of TWEAK/Fn14 can lead to decreased apoptosis of endometrial cells.

[Key words]Endometriosis;TWEAK;Fn14;Immunohistochemistry

[中图分类号]R730.5

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）10（b）-0065-04

[基金项目]江西省科技计划项目（20151BBG70196）

[作者简介]舒如明（1983－），男，江西南昌人，硕士，主治医师，研究方向：妇产科子宫内膜异位症

▲通讯作者：何洁（1984－），硕士，主治医师，研究方向：妇产科子宫内膜异位症

（收稿日期：2017-08-14 本文编辑：孟庆卿）