刘俊宁1王庆莲2张 燕1牛素生1

1.福建中医药大学骨伤学院，福建福州 350122；2.福建中医药大学附属第三人民医院脾胃科，福建福州 350122

[摘要]目的研究林如高老先生的经验方活血散对急性软组织损伤的消炎止痛效果及其对损伤软组织的修复和治疗作用。方法采用56只小鼠为实验动物，雌雄各半，随机分组时各组小鼠均为雌雄各半。取16只小鼠，随机分为模型对照组（8只）和活血散治疗组（8只），通过二甲苯耳廓肿胀法观察活血散的消炎作用；取16只小鼠，随机分为模型对照组（8只）和活血散治疗组（8只），通过醋酸扭体法观察活血散的止痛效果。24只小鼠造急性软组织损伤模型，随机分为活血散治疗组（12只）和模型对照组（12只）两组，分别在治疗后2、4 d每组随机抽取6只小鼠（雌雄各半），于麻醉后切取损伤处皮下及肌肉组织进行组织学观察。结果活血散治疗组小鼠的耳廓肿胀程度明显轻于模型对照组（P＜0.05）；活血散治疗组小鼠扭体次数明显少于模型对照组小鼠（P＜0.05）；活血散治疗组骨骼肌细胞修复进程明显早于模型对照组。结论活血散具有较好的消炎止痛效果，可加快急性软组织损伤的修复进程。

[关键词]急性软组织损伤；林如高；活血散；修复作用

活血散为南少林名中医林如高老先生的经验方，方剂共由16味中药组成，即乳香、没药、沉香、三七各30 g，栀子、赤芍、羌活、桂枝、白芷、血竭、无名异、续断、骨碎补、紫荆皮各60 g，五加皮90 g，楠香150 g。具有活血祛瘀疏风散结、消肿定痛之功用。用于治疗伤筋、骨折初、中期局部肿痛者。用时将上述诸药共研磨成粉，酒水各半或用茶水与蜂蜜调成糊状敷于患处，每次敷药5～6 h，1次/d[1]。本药为福州盘屿中医骨科医院院内制剂，为证实其临床疗效，本研究从抗炎、止痛、消肿以及对软组织修复的促进作用等方面进行研究，验证和阐述其作用机制。

1.1 动物

SPF级7周龄健康小鼠56只，雌雄各半，体重30～35 g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供[动物合格证号：SCXK（沪）2012-0002]，于福建中医药大学清洁级实验动物中心饲养。

1.2 药品

实验药品购自福州盘屿中医骨科医院，商标注册号：第3263158，生产批号：151102，50g/包，活血散为散剂。

1.3 活血散消炎作用的研究

实验中采用二甲苯耳廓肿胀法验证其消炎作用，将16只小鼠随机分为两组，即模型对照组和活血散治疗组，每组雌雄各4只。将小鼠耳后颈背部剪毛脱毛约1 cm×1 cm，活血散治疗组于脱毛处贴活血散敷贴，模型对照组则于脱毛处黏贴纱布块，用医用胶布捆敷固定。敷药24 h后，用移液枪在小鼠左耳内面和耳背对称部缓慢滴加二甲苯位并涂匀，左耳内面和背面各15 μl，共30 μl。涂二甲苯1 h后处死受试小鼠，用直径6.0 mm的打孔器在在左耳涂药部位打下组织圆片，右耳同一部位打下相同大小的圆片，组织天平称重后计算其肿胀程度，肿胀程度=（左耳重-右耳重）/右耳重[2]。

1.4 活血散止痛作用的研究

采用醋酸扭体法，小鼠随机分为模型对照组、活血散治疗组两组，每组8只，雌雄各半。治疗组于小鼠下肢足三里处贴活血散治疗垫，模型对照组于同一处贴相同尺寸空白纱布垫，胶布固定24 h。治疗24 h后，每只小鼠腹腔注射1%冰醋酸溶液0.2 ml/10 g，观察15 min内小鼠因疼痛引起的扭体次数，从注射醋酸开始计时，每只共观察20 min[3]。

1.5 活血散对软组织修复作用的实验研究

1.5.1 软组织损伤小鼠模型制备 SPF级小鼠24只，采用1%戊巴比妥（10 ml/kg体重）腹腔注射麻醉，左臀大腿部剪毛脱毛约1.0 cm×1.0 cm，取侧卧位固定于打击台上，暴露左臀大腿部脱毛区，标记打击位置，用50 g砝码作为打击锤，打击高度5 cm，自由落体打击标记处，连续5次，造成小鼠局部出现急性软组织损伤[4-5]。

1.5.2 造模小鼠分组处理及指标检测 造模小鼠随机分组：①活血散治疗组：造模1 d后，于损伤处贴敷活血散，共12只，胶布固定；②模型对照组：造模 1 d后，于损伤处贴敷同尺寸空白纱布，共12只，胶布固定。分别于治疗后2、4 d，分批取材，每次每组雌雄各半处死取材6只小鼠。用1%戊巴比妥（10 ml/kg体重）腹腔注射麻醉后，以损伤处为中心切取约0.5 cm× 0.5 cm皮下组织及骨骼肌组织，10%福尔马林固定。常规石蜡包埋，HE染色，观察骨骼肌细胞和胶原纤维的增生情况以及软组织的修复程度。

1.6 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 活血散消炎作用的研究结果

活血散治疗组小鼠耳廓肿胀程度明显轻于模型对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 活血散对小鼠耳廓肿胀的影响（±s）

 

与模型对照组比较，*P＜0.05

2.2 活血散止痛作用的研究结果

注射醋酸后，小鼠因疼痛开始扭体，15 min内活血散治疗组小鼠扭体次数明显少于模型对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）（表2）。

表2 活血散对小鼠醋酸扭体反应的影响（次，±s）

 

与模型对照组比较，*P＜0.05

2.3 活血散对软组织修复作用的研究结果

治疗后2 d，模型对照组损伤部位组织肿胀，骨骼肌纤维出现明显增生；活血散治疗组损伤部位骨骼肌纤维增粗肿胀，结缔组织增生活跃。治疗后4 d，模型对照组损伤部位骨骼肌纤维肿胀情况明显减轻，纤维增生活跃；活血散治疗组损伤部位骨骼肌肿胀消失，纤维增生趋于稳定。活血散治疗组骨骼肌纤维修复程度明显快于模型组照组（图1）。

 

图1 肌肉组织光镜观察（HE染色，×100）

A、C为活血散治疗组；B、D为模型对照组；A、B为治疗2 d时肌肉软组织情况；C、D为治疗4 d时肌肉软组织情况

急性软组织损伤症属中医痹症范畴，伤筋骨折初中期，由于外力的打击，导致筋络损伤，瘀血留滞于内，导致气血运行阻滞，局部出现青紫肿胀。“恶血留内，经络受阻”，治疗宜采取活血祛瘀，舒筋活络的方法促进气血通畅，则瘀肿消退[6-8]。现代医学研究表明，急性软组织损伤后出现局部毛细血管破裂，出血渗出增多，局部压力增大，最终导致局部组织细胞肿胀坏死，出现无菌性炎症反应，从而出现组织细胞损伤不断加重的恶性循环[9-12]。药物外用可直接通过局部渗透作用达到患处，并可减少口服药物后因代谢而造成的药物损失，以及对胃肠道的影响[13-14]。

采用中药外敷法治疗具有使用方便、对日常生活影响少的优点[15]。林如高老先生的活血散据“血不活则瘀不能去”“瘀不去则新不生”的原则，引用外治之法，方用乳香，没药、血竭活血祛瘀，无名异、赤芍、三七止血散瘀；羌活、桂枝、白芷、五加皮祛风胜湿、散寒止痛，沉香、楠香行气通络、舒筋消肿；栀子清热解毒、凉血利湿；紫荆皮、续断、骨碎补可补肝肾、强筋骨。从而达到行气消肿，活血祛瘀，散结定痛的效果[1]。

实验结果表明，外敷活血散小鼠的耳廓肿胀程度明显轻于模型组小鼠；采用醋酸扭体法，小鼠15 min内扭体次数亦明显少于模型组。说明活血散具备有效的、较好的消炎消肿镇痛效果。组织学观察结果显示活血散治疗组软组织修复进程明显优于模型组。说明其具有减轻损伤局部炎症反应，减轻组织损伤，促进软组织修复，缩短病程的作用。

本研究从理论上验证了活血散对急性软组织损伤的治疗作用，初步阐述了其作用机制，为活血散的临床运用提供了理论依据。活血散的具体作用机制仍需进一步研究进行阐释，组方中各味中药的作用及其具体机制亦需深入进行研究阐释。

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Experimental study of the effects of Huoxue Powder on acute soft tissues injury and its anti-inflammatory and analgesic effects

LIU Jun-ning1WANG Qing-lian2ZHANG Yan1NIU Su-sheng1
1.Orthopaedics＆Traumatology Faculty,Fujian University of TCM,Fujian Province,Fuzhou 350122,China;2.Department of Spleen and Stomach,the Third People′s Hospital of Fujian University of TCM,Fujian Province,Fuzhou 350122,China

[Abstract]ObjectiveTo study the effect of Huoxue Powder of old Mr.LIN Ru-gao on acute soft tissues injury and its effect on repair and treatment of damaged soft tissues.MethodsExperimental animals were 56 mice,half of male and female.Each group of mice were half of male and female.16 mice were randomly divided into model control group(8 mice)and Huoxue Powder treatment group(8 mice).The anti-inflammatory effect of Huoxue Powder was observed by xylene auricle swelling method;16 mice were randomly divided into model control group (8 mice)and Huoxue Powder treatment group(8 mice,half of male and female).The analgesic effect of Huoxue Powder was observed by acetic acid writhing method.24 mice were randomly divided into two groups∶the group (12 mice)and the model control group(12 mice).Six mice(half of male and female)were randomly selected at 2 and 4 days after treatment,and the subcutaneous and muscle tissues were taken at the time of anesthesia to observe the histological.ResultsThe degree of ear swelling in mice of Huoxue Powder treatment group was significantly lighter than that in model control group (P＜0.05).The number of writhing in mice of Huoxue Powder treatment group was significantly less than that in model control group(P＜0.05).The repair process of skeletal muscle cells in the treatment group was significantly earlier than that in the model control group.ConclusionHuoxue Powder has a good anti-inflammatory analgesic effect,which can accelerate the repair of acute soft tissue injury process.

[Key words]Acute soft tissue injury;LIN Ru-gao;Huoxue Powder;Repair effect

[中图分类号]R274.3

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）05（c）-0009-03

（收稿日期：2017-04-10 本文编辑：任 念）

[基金项目]福建省自然科学基金面上项目（2016J01772）；福建中医药大学校管课题资助项目（X2015004-平台）