誉秀华 周桂桃 杨秀堂

广东省佛山市南海区罗村医院检验科，广东佛山 528226

[摘要]目的探讨Th17相关细胞因子和抗CCP抗体在类风湿性关节炎（RA）中的相关性和临床意义。方法回顾分析2015年1月～2016年5月在我院治疗的60例RA患者，根据DAS28积分分为活动组（DAS28>3.2）32例和稳定组（DAS28≤3.2）28例，另选择60例健康者作为对照组，用ELISA法测定血清Th17相关细胞因子（IL-17、IL-6、TGF-β1），用胶体金免疫层析法检测抗CCP抗体阳性率，比较三组测定结果。结果抗CCP抗体阳性率：活动组>稳定组>对照组（P<0.05）。IL-17、IL-6水平：活动组>稳定组>对照组（P<0.05）。TGF-β1水平：活动组<稳定组<对照组（P<0.05）。结论抗CCP抗体阳性率、IL-17、IL-6水平越高，RA的DAS28积分越高，而TGF-β1水平越高，RA的DAS28积分越低，因此，Th17相关细胞因子和抗CCP抗体可以提高RA诊断及活动性判断的灵敏度和特异度，为治疗新策略提供依据。

[关键词]Th17相关细胞因子；抗CCP抗体；类风湿性关节炎；临床意义

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以炎性滑膜炎为主的系统性疾病，目前发病机制尚未阐明，近年发病率不断攀升[1]。其特征为手、足小关节的多关节、对称性、侵袭性关节炎症，甚至导致关节畸形、功能丧失。临床表现多为体重减轻、低热、疲惫无力、关节晨僵甚至多脏器系统功能损害。由于发病机制尚未探明，临床多借助血沉、C反应蛋白免疫球蛋白、类风湿因子、影像学检查等诊断，但特异度和灵敏度不高[2]。现临床上多采用非甾体抗炎药、抗风湿药、糖皮质激素等药物治疗，治疗周期长，且效果一般[3]。近年不断有文献报道，Th17相关细胞因子和抗CCP抗体水平与RA关系密切[4]，因此本研究选择RA患者和健康者各60例，探究Th17相关细胞因子和抗CCP抗体水平在RA中的重要意义。

1.1 一般资料

回顾分析2015年1月～2016年5月在我院治疗的60例RA患者，纳入标准：符合1987年美国风湿病学会制订的RA诊断标准[4]，未进行任何治疗≥2个月，包括使用抗风湿药、非甾体抗炎药和糖皮质激素，患者自愿参加并签署知情同意书。排除标准：合并其他脏器（心、肾、肝、肺）器质性疾病和（或）结缔组织病。另选择60例同期体检完全健康的成年人作为对照组。RA患者根据DAS28积分分为活动组（DAS28> 3.2）32例和稳定组（DAS28≤3.2）28例。其中活动组年龄（51.2±8.4）岁，男性10例，女性22例；稳定组年龄（50.5±9.2）岁，男性14例，女性18例；对照组年龄（51.4±8.8）岁，男性29例，女性31例。三组患者年龄、性别比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

所有患者均在清晨空腹状态下采静脉血10 ml，经4000 r/min离心10 min，取上层血清置于-80℃冷藏保存待用，全过程用时≤30 min。Th17相关细胞因子 （IL-17、IL-6、TGF-β1）通过酶联免疫吸附法（ELISA）使用相关试剂盒（上海研生实业有限公司，96T/48T）测定。①设标准孔8孔，每孔加入相应浓度25 μl标准品，余孔加入25 μl血清样品于相应孔中；②每孔加入25 μl酶联物，轻轻混匀30 s，室温温育30 min；③洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔加入35 μl洗涤液），并去除水滴，反复洗涤3次；④每孔加入50 μl酶复合物，轻轻混匀30 s，室温温育30 min；⑤洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔加入35 μl洗涤液），并去除水滴，反复洗涤3次；⑥每孔加入50 μl显色液，轻轻混匀10 s，室温温育15 min；⑦每孔加入 50 μl终止液，轻轻混匀 30 s，30 min内在450 nm处读取OD值；⑧以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据血清样品的OD值在标准曲线上查出其浓度。抗CCP抗体通过胶体金免疫层析法使用相关试剂盒（上海荣盛生物药业有限公司，沪食药监械准字2014第2400660号）检测，滴入3～4滴血清，待10 min读结果。记录抗CCP抗体阳性率。

1.3 观察指标

观察比较三组患者抗CCP抗体阳性率和IL-17、IL-6、TGF-β1水平。采用胶体金免疫层析法检测抗CCP抗体，DAS28评分主要是RA疾病活动分数计算器，用来评价类风湿性关节炎活动程度。28个关节分布：双肩（2）、双肘（2）、双腕（2）、双手掌指关节（10）、双手近端指间关节（10）、双膝关节（2）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2.1 三组患者抗CCP抗体阳性率的比较

三组抗CCP抗体阳性率：活动组（81.25%）>稳定组（60.71%）>对照组（0.00%），差异有统计学意义（P< 0.05）。

2.2 三组患者Th17相关细胞因子的比较

测定后IL-17、IL-6水平：活动组>稳定组>对照组（P<0.05），而TGF-β1水平：活动组<稳定组<对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）（表1）。

表1 三组患者Th17相关细胞因子的比较（pg/ml，±s）

RA是一种以关节病变为主的慢性全身自身免疫性疾病。据统计，在我国该病发病率为0.24%～0.5%，且近年有上升趋势，女性多于男性，2～3∶1，以20～50岁发病多见[5]。主要病理改变为小关节滑膜损伤所致的关节肿痛，继而软骨破坏、关节间隙变窄、功能障碍，也可累及其他脏器[6]。临床表现为受累关节晨僵、疼痛、压痛、肿胀、活动受限、甚至畸形，小关节先受累，呈对称性，其他脏器受累则产生相应临床表现[7]。由于本病发病机制未阐明，目前无根治方法，且该病易反复发作，预后不良，致残率高，对患者身心健康损害极大[8]。据近年文献报道，Th17相关细胞因子和抗CCP抗体水平与RA发病及活动性存在密切关联，因此笔者选取我院60例RA患者，与健康者对照，探究Th17相关细胞因子和抗CCP抗体水平对于RA发病机制、诊断、治疗的重要意义。

CD4+淋巴细胞可分化Th17细胞亚群，Th17细胞可分泌IL-17、IL-6、IL-22、IL-21等相关细胞因子[9]。其中IL-17在急性感染性炎症反应中，可诱导炎症因子和趋化因子表达，使免疫细胞到达炎症部位，保护免受外界病原体损害，还可以诱导部分组织修复因子的表达，加快组织修复[10]。但据文献显示，在人体内由多种原因导致的慢性疾病（如RA）中，IL-17呈现高表达状态，可诱导更多炎症因子表达加剧炎症反应，在患者身上表现为小关节的红、肿、痛及功能障碍，甚至损害全身其他脏器，对疾病发展起恶化作用[11]。而IL-6可刺激免疫细胞的增殖、分化并提高免疫功能，同时诱导单核细胞活化、增强NK细胞活性，保护机体不受病原体侵害[12]。但在RA中，IL-6可刺激淋巴B细胞产生大量自身抗体，刺激RF等其它细胞因子产生，加重炎症反应和损伤[13]。TGF-β1对细胞增殖、分化、免疫功能都有重要调节作用，可抑制免疫活性细胞增殖、抑制多种细胞因子诱导的抗原表达、抑制淋巴分化及细胞因子产生，与免疫功能呈拮抗关系，从而减轻炎症反应[14]。在本研究中，RA患者的IL-17、IL-6水平显著高于健康者，且随着炎症活动性增强，其水平越高；而RA患者TGF-β1水平显著低于健康者，且炎症活动性增强，其水平越低。通过这3个细胞因子指标可以早期诊断RA或判断RA炎症反应活动情况，阐述了RA与Th17细胞家族相关的发病机制，提供了降低IL-17、IL-6水平，提高TGF-β1水平的新的治疗方向。

抗CCP抗体是诊断RA的高特异度、高灵敏度（68%～75%）指标，先于RA临床表现出现，主要为IgG类抗体，据文献报道，在RA早期敏感度就可达50%左右，而抗CCP抗体阳性患者的骨破坏程度较阴性更严重[15]。在本研究中，随着RA活动性增加，抗CCP抗体阳性率增高。反之该指标可以较准确诊断RA并反应炎症活动情况。在后期治疗中，可进一步研究降低抗CCP抗体以减轻炎症反应、缓解病情的新型治疗。

综上所述，IL-17、IL-6、TGF-β1和抗CCP抗体水平在RA发病机制中有重要临床意义，可以提高RA诊断及活动性判断的灵敏度和特异度，为治疗新策略提供依据。

[1]刘孟敏，李远，李施新，等.基于关联规则和复杂系统熵聚类探讨60份全国名老中医医案中论治类风湿性关节炎规律[J].广州中医药大学学报，2016，33（3）：436-440.

[2]郭永强，涂大有，叶秋菊，等.类风湿性关节炎的MRI表现及其临床价值[J].放射学实践，2013，28（4）：448-450.

[3]马占宾.浅析类风湿性关节炎的药物治疗[J].医学综述，2014，20（12）：2221-2223.

[4]张炯，邹和建.类风湿关节炎患者FcγRⅢA多态性研究[J].中华风湿病学杂志，2005，9（2）：77-80.

[5]沈婷，万彬彬.延续性护理对类风湿关节炎患者疼痛及生活质量的影响[J].实用临床医药杂志，2014，18（18）：26-29.

[6]张群，王竞秋.类风湿性关节炎发病机制与临床治疗的研究进展[J].内蒙古中医药，2013，32（21）：148-149.

[7]邵俊华.中西医结合治疗类风湿性关节炎33例[J].浙江中西医结合杂志，2014，24（1）：46-47，48.

[8]黄献京.中西医结合治疗类风湿性关节炎继发骨质疏松的疗效观察[J].中国骨质疏松杂志，2014，20（5）：530-534. [9]汤荣华，黄建军.类风湿性关节炎患者血清GM-CSF、IL-6、IL-17和TNF-α的水平测定及临床意义[J].检验医学，2013，28（3）：173-177.

[10]何媛.类风湿性关节炎患者 Th17／Treg及其相关细胞因子的研究[J].实用临床医学，2016，17（9）：17-19.

[11]霍娟，杨晋，胡文霞，等.类风湿性关节炎患者外周血芳香烃受体表达与Th17细胞相关性研究[J].国际免疫学杂志，2016，39（5）：437-441.

[12]杨金娜，刘晓光，李覃，等.Th17/Treg平衡在类风湿关节炎中作用的研究进展[J].中国药理学通报，2013，29（8）：1045-1048.

[13]朱温帅，王英振，夏长所，等.血清白细胞介素-17水平对类风湿性关节炎患者骨关节损害作用及机制[J].中华实验外科杂志，2014，31（4）：894-896.

[14]李涛.类风湿性关节炎患者IL-6、IL-17、OPG、RANKL水平检测及临床意义[J].数理医药学杂志，2014，27（3）：277-279.

[15]胥国强，杨佳佳，蒲泽宴，等.RF、抗CCP抗体和AKA对类风湿性关节炎诊断的评价[J].国际检验医学杂志，2013，34（11）：1390-1392，1394.

Study on the clinical application of Th17 cell-associated cytokines and anti-CCP antibody test in rheumatoid arthritis

YU Xiu-hua ZHOU Gui-tao YANG Xiu-tang
Department of Clinical Laboratory,Nanhai Luocun Hospital in Guangdong Province,Foshan 528226,China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the correlation and clinical significance of Th17-related cytokines and anti-CCP antibodies in rheumatoid arthritis.Methods60 patients with rheumatoid arthritis(RA)who were treated in our hospital from January 2015 to May 2016 were retrospectively analyzed.According to DAS28 scores,the patients were divided in to active group of 32 patients(DAS28>3.2)and stable group of 28 patients(DAS28≤3.2).Another 60 healthy subjects were selected as the control group.Serum Th17-related cytokines(IL-17,IL-6,TGF-β1)were determined by ELISA,and the positive rate of anti-CCP antibody was detected by colloidal gold immunochromatography.The testing results were compared between the three groups.ResultsThe positive rate of anti-CCP:active group＞stable group＞control group(P＜0.05). IL-17 and IL-6 levels:active group＞stable group＞control group(P<0.05).TGF-β1 level:active group＜stable group＜con trol group (P＜0.05).ConclusionThe higher of the positive rate of anti-CCP antibody,the level of IL-17 and IL-6,the higher DAS28 score of RA,and the higher of level of TGF-β1,the lower of the DAS28 score of RA.Therefore,Th17-related cytokines and anti-CCP antibodies can improve the sensitivity and specificity of RA diagnosis and activity judgment,providing the basis for new treatment strategies.

[Key words]Th17-related cytokines;Anti-CCP antibody;Rheumatoid arthritis;Clinical significance

[中图分类号]R593.22

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）04（c）-0153-03

（收稿日期：2016-12-28 本文编辑：马 越）

[基金项目]广东省佛山市卫生和计生局医学科研课题（2015275）