尚曙玉 胡晓凤 李 静 秦俊莲

黄河科技学院医学院生理药理教研室，河南郑州 450063

[摘要]目的观察双黄连注射液和双黄连冻干粉针剂对家兔离体红细胞溶血作用的影响。方法健康家兔心脏取血20 ml，制备2%红细胞混悬液，分别与双黄连注射液、双黄连冻干粉针剂、0.9%氯化钠注射液共同温育，进行体外溶血试验，并通过分光光度计检测其吸光度，观察3 h内红细胞的溶血率。结果浓度为0.06、0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml的双黄连注射液的溶血率分别为8.39%、21.34%、40.98%、50.36%、67.68%，与0.9%氯化钠注射液组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。浓度为0.06、0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml双黄连冻干粉针剂的溶血率为2.15%、5.23%、7.31%、9.59%、13.35%，在浓度为0.3 g/ml时与0.9%氯化钠注射液组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。在浓度为0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml时，双黄连注射液与双黄连冻干粉针剂组的溶血率相比，差异有统计学意义（P<0.05）。结论双黄连粉针剂与双黄连注射液相比，对家兔离体红细胞溶血作用小。

[关键词]双黄连注射液；双黄连冻干粉针剂；溶血试验

双黄连注射液和双黄连冻干粉针剂是中药金银花、黄芩、连翘等药物的提取物制剂，具有清热解毒、抑菌、抗炎、抗病毒、增强机体免疫功能等药理作用，对流行性感冒病毒、呼吸道合胞病毒等感染具有良好作用。因此，在临床上常用于外感风热所引发的发热、咳嗽、咽喉肿痛、上呼吸道感染、轻型肺炎、急性腭扁桃体炎等疾病的治疗。近年，不同注射剂型双黄连在临床被广泛应用，随着用药人群的增加，其不良反应报道也日益增多，主要表现在过敏反应、消化系统反应和静脉炎等。本文旨在通过对双黄连注射液和双黄连冻干粉针剂体外溶血性实验的观察，从而为其临床安全应用奠定实验基础[1－6]。

1.1 药品与试剂

双黄连注射液（山西省芮城科龙药业有限公司，10 ml∶15 g，040196120）；双黄连冻干粉针剂（哈药集团中药二厂，600 mg∶10 g，Z10940044）；0.9%氯化钠注射液（山东齐都药业有限公司，H37020766）。

1.2 实验动物

家兔36只，体重（2.0±0.5）kg，雌雄不限，由河南省实验动物中心提供（合格证号42010000001806）。

1.3 实验仪器

721分光光度计，离心机，显微镜等。

1.4 2%红细胞混悬液的制备

健康家兔36只，每只均采用心脏穿刺取血10～20 ml，将血置于三角瓶中，用玻璃棒搅拌10 min，除去纤维蛋白原，使之成为脱纤血液。然后将脱纤血液移入离心管内，并向其中加入约10倍量的0.9%氯化钠注射液，混匀，用离心机以1200 r/min离心15 min，弃上清液，取沉淀的红细胞用0.9% 氯化钠注射液反复洗涤，再次经离心机以1200 r/min离心15 min，离心3次。至上清液无色后，取2 ml红细胞，加入0.9%氯化钠注射液至100 ml，制成2%红细胞混悬液[7－16]。

1.5 溶血试验的方法

取无菌洁净干燥试管7支，置于试管架上并编号。1～5号试管为受试药物管，分别加入浓度为1.5 g/ml双黄连注射液或双黄连冻干粉针剂0.1～0.5 ml；6号试管为阴性对照管，不加药液，加入0.9% 氯化钠注射液，7号试管为阳性对照管，加入蒸馏水（表1）。按表1所示，依次加入0.9%氯化钠注射液或蒸馏水，双黄连注射液或双黄连冻干粉针剂，2%红细胞混悬液。轻轻混匀，置于恒温水浴箱中温育，温度（37±0.5）℃，分别于0、15、30、60、120、180 min，观察各试管是否存在溶血和凝聚现象。

表1 溶血试验加样表（ml）

1.6 观测指标

1.6.1 肉眼观察 试管中的溶液呈澄清红色，表明有溶血发生；若红细胞全部下沉，上清液无色澄清，表明无溶血发生；若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚发生。

1.6.2 分光光度法 测定各试管溶液的吸光度并计算溶血率，根据红细胞破裂释放出的血红素在575 nm波长处有最大吸收，取所有各管的上清液置于比色器中，测定各管吸光度并计算溶血率。溶血率＞5%表明有溶血发生。计算方法：样品吸光度=试样管液吸光度-底色管液吸光度。溶血率=（样品吸光度-阴性对照液吸光度）/（阳性对照液吸光度-阴性对照液吸光度）×100%。

1.7 统计学处理

所有数据均采用SPSS 12.0统计学软件处理，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组内比较采用One－Way ANOVA分析，组间比较采用配对样本t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2.1 肉眼观察结果

双黄连注射液和双黄连冻干粉针剂各试管内溶液在2 h内上清液均为无色澄清，3 h后观察发现双黄连注射液的2～5试管内溶液，上层澄清红色，下层有少许沉淀。而双黄连冻干粉针剂在3 h后各试管内溶液上清液依然为无色澄清。6号阴性对照管内溶液3小时上清液均为无色澄清。7号阳性对照管各时间内上清液均为澄清红色，完全溶血。

2.2 分光光度法测定的溶血率结果

从表2可以看出，双黄连注射液和双黄连冻干粉针剂的溶血率均呈浓度依赖性的升高。双黄连注射液在浓度为0.06、0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml时，均引起离体家兔红细胞溶血，溶血率＞5%，其中浓度为0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml时，其溶血率与阴性对照组的溶血率相比，差异有统计学意义（P<0.05）。

双黄连冻干粉针剂在浓度为 0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml时，均引起离体家兔红细胞溶血，溶血率＞5%，其中浓度为0.3 g/ml时其溶血液与阴性对照组的溶血率相比，差异有统计学意义（P<0.05）。

在浓度为0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml时，双黄连注射液与双黄连冻干粉针剂相比，差异有统计学意义（P<0.05）。

表2 双黄连注射液与双黄连冻干粉针剂溶血率的比较（%）

 

与0.9%氯化钠注射液相比，*P<0.05；与双黄连冻干粉针剂相比，#P< 0.05

双黄连注射液和双黄连冻干粉针剂具有清热解毒、抑菌、抗炎、抗病毒、增强机体免疫功能等药理作用，因此，在临床上广泛用于由流行性感冒、呼吸道合胞病毒等感染所引起的发热、咳嗽、咽喉肿痛等症状的治疗。但有关这两种药物的安全性报道却较少。

通过试管法，肉眼观察有无溶血时发现，浓度为0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml的双黄连注射液在3 h后出现了溶血和（或）凝聚现象，而浓度为0.06、0.12、0.18、0.24 g/ml的双黄连冻干粉针剂在3 h后未发生溶血和凝聚现象。通过分光光度法测定各试管液的吸光度值，计算双黄连注射液和双黄连冻干粉针剂的溶血率，结果显示两者的溶血率均呈浓度依赖性升高。双黄连注射液的溶血率在浓度为0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml时与阴性对照组相比，差异有统计学意义（P<0.05），致家兔离体红细胞破裂溶血；而双黄连冻干粉针剂的溶血率在浓度为0.3 g/ml时与阴性对照组相比，差异有统计学意义 （P<0.05），也致离体家兔红细胞破裂溶血，但双黄连冻干粉针剂的溶血率均未超过20%。双黄连注射液与双黄连冻干粉针剂在浓度为0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml时的溶血率相比，差异有统计学意义（P< 0.05），因此，依据《药物研究技术指导原则》[6]中分光光度法测定溶血试验的参考标准，当溶血率＞5%时，不宜用于静脉注射，由实验结果可看出双黄连注射液可引起红细胞破裂溶血，故在临床中治疗疾病时不建议采用血管内给药，而双黄连冻干粉针剂未见明显红细胞破裂溶血，故在临床中治疗疾病时可采用血管内给药。但本实验只观察了双黄连的这两种注射剂型的溶血性实验，而未对其过敏性、血管刺激性等其他指标进行观测，故其安全性还需要进一步评价。

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The influence ofShuanghuanglian Injection and Shuanghuanglian Lyophilized Power Injection on hemolytic effect in rabbits′red blood cells in vitro

SHANG Shu-yu HU Xiao-feng LI Jing QIN Jun-lian
Department of Physiology and Pharmacology,Medical College of Huanghe Science and Technology College in Henan Province,Zhengzhou 450063,China

[Abstract]ObjectiveTo observe the influence of Shuanghuanglian Injection and Shuanghuanglian Lyophilized Power Injection on hemolytic effect in rabbits′red blood cell(RBC)in vitro.MethodsThe blood samples were collected from healthy rabbits by 20 ml,and the red blood cell suspension of 2%was prepared,and it with Shuanghuanglian Injection, Shuanghuanglian Lyophilized Power Injection and Sodium Chloride Injection of 0.9%were co-incubated,and hemolysis test was carried out in vitro,and the absorbance was detected by spectrophotometer.The hemolysis rate of RBC in 3 h was observed.ResultsThe hemolysis rate of Shuanghuanglian Injection with concentration of 0.06,0.12,0.18,0.24,0.3 g/ml was 8.39%,21.34%,40.98%,50.36%,67.68%respectively,and there was a statistical difference between two groups compared with Sodium Chloride Injection of 0.9%(P＜0.05).The hemolysis rate of Shuanghuanglian Lyophilized Power Injection with concentration of 0.06,0.12,0.18,0.24,0.3 g/ml was 2.15%,5.23%,7.31%,9.59%,13.35%respectively,and there was a statistical difference when the concentration was 0.3 g/ml compared with Sodium Chloride Injection of 0.9%(P＜0.05).When the concentration was 0.12,0.18,0.24,0.3 g/ml,there was a statistical difference of hemolysis rate between Shuanghuan glian Injection and Shuanghuanglian Lyophilized Power Injection(P＜0.05).ConclusionThe influence of Shuanghuanglian Lyophilized Power Injection on hemolytic effect is small compared with Shuanghuanglian Injection．

[Key words]Shuanghuanglian Injection;Shuanghuanglian Lyophilized Powder Injection;Hemolysis test

[中图分类号]R332

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）04（c）-0147-03

（收稿日期：2017-01-05 本文编辑：许俊琴）