气相色谱法测定复方樟脑醑中樟脑、薄荷脑、苯酚的含量
杨跃龙1龚力民2李 菁3▲黄绍国2▲
1.湖南省怀化市食品药品检验所,湖南怀化 418000;2.湖南中医药大学药学院,湖南长沙 410208;3.湖南医药学院,湖南怀化 418000
[摘要]目的建立气相色谱法测定复方樟脑醑中樟脑、薄荷脑、苯酚的含量的方法。方法采用KB-WAX型毛细管柱(30.00 m×0.32 mm×0.25 μm);载气为氮气,流速:3.0 ml/min;氢火焰离子化检测器(FID)程序升温,初始温度为130℃,保持10 min,以5℃/min的速率升温至230℃,保持5 min;进样口温度:200℃;检测器温度:250℃,外标法测定。结果樟脑、薄荷脑、苯酚能很好分离。樟脑、薄荷脑、苯酚的线性范围分别为0.2029~1.6232 mg/ml(r=0.9993,n=9),0.1964~1.5712 mg/ml(r=0.9995,n=9),0.2074~1.6592 mg/ml (r=0.9999,n=9),平均回收率分别为99.43%(RSD=0.85%)、101.85%(RSD=0.84%)、101.45%(RSD=0.53%)。结论该方法操作简便,灵敏度高,重现性好,可用于复方樟脑醑中樟脑、薄荷脑、苯酚的含量测定。
[关键词]气相色谱法;复方樟脑醑;樟脑;薄荷脑;苯酚
复方樟脑醑是临床长期使用的一种疗效优良的医院制剂,其主要成分为樟脑、薄荷脑、苯酚,具有局部止痒的功效。用于治疗急、慢性皮炎。原质量标准较简单,没有对其中的有效成分樟脑、薄荷脑与苯酚进行定量检测,无法控制药品质量,从而无法保证药品疗效。为有效控制本品质量,根据本制剂的特点及其有效成分易挥发的特性,本实验参考相关文献[1-8]用气相色谱法同时测定复方樟脑醑中樟脑、薄荷脑与苯酚的含量,现报道如下。
1 仪器与试药
安捷伦7820A气相色谱仪(安捷伦公司、自动进样器、FID检测器);电子分析天平(梅特勒-托利多国际股份有限公司,型号:AB135-S)。
樟脑(中国食品药品检定研究院,供含量测定用,批号:110747-201409;纯度:98.7%),薄荷脑(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号:110728-200509),苯酚(中国食品药品检定研究院,供含量测定用,批号:100509-201203;纯度:100.0%),乙醇(天津化学试剂研究所,色谱纯),水为超纯水(科室自制)。复方樟脑醑(湖南省怀化市第一人民医院,批号:140624、140625、140626)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:KB-WAX型石英毛细管柱(30.00 m×0.32 mm×0.25 μm);载气:氮气;流速:3.0 ml/min;柱温:程序升温,初始温度为130℃,保持10 min,以5℃/min的速率升温至230℃,保持5 min;进样口温度:200℃;检测器:氢火焰离子化检测器(FID);检测器温度:250℃;进样量:1 μl;分流比:10∶1[9-12]
2.2 对照品溶液的制备
精密称取樟脑对照品、薄荷脑对照品、苯酚对照品约20 mg,置20 ml量瓶中,加乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密量取本品5 ml,置100 ml量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
2.4 阴性样品溶液的制备
原方去掉樟脑、薄荷脑、苯酚后,按处方比例,照本品制备工艺制备阴性样品。精密量取阴性样品5 ml,置100 ml量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,作为阴性样品溶液。
2.5 系统适用性
按“2.1”项下色谱条件下测定,樟脑、薄荷脑、苯酚保留时间分别为5.2、7.0、17.5 min,分离度均大于3.0,表明该色谱条件下系统适用性良好。
2.6 精密度试验
取同一批复方樟脑醑样品(批号:140624)按样品含量测定方法配制1份,连续进样6次,进样量为1 μl,记录峰面积,结果樟脑、薄荷脑、苯酚的RSD分别为0.41%、0.39%、0.36%。试验结果表明,该方法进样精密度良好。
2.7 方法专属性考察
取阴性样品溶液,精密吸取续滤液1 μl,注入色谱仪,按“2.1”色谱条件下,记录色谱图,见图1。试验结果表明,阴性样品溶液在樟脑、薄荷脑、苯酚相应位置无吸收峰出现,表明该方法专属性良好。
图1 各溶液全相色谱图
a.樟脑对照品溶液;b.薄荷脑对照品溶液;c.苯酚对照品溶液;d.樟脑、薄荷脑、苯酚对照品溶液;e.供试品溶液 f.阴性样品溶液
2.8 线性关系考察
精密称取樟脑对照品51.40 mg、薄荷脑对照品49.10 mg、苯酚对照品51.85 mg置25 ml量瓶中,用乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品储备液。分别精密量取对照品储备液 1.0、2.0、5.0、6.0、8.0 ml置10 ml量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀。分别精密量取上述对照品溶液1 μl注入气相色谱仪,记录色谱图,以峰面积(A)为横坐标X,浓度(C)为纵坐标Y,绘制标准曲线[13-16]。得樟脑回归方程:Y=0.000 021 7X-0.034 008 88,r=0.9991;薄荷脑回归方程:Y=0.000 022 3 X-0.035 830 19,r=0.9992;苯酚回归方程:Y=0.000 021 9 X-0.033 0571 1,r=0.9995;试验结果表明,樟脑浓度在0.2029~1.6232 mg/ml(r=0.9993,n=9),薄荷脑浓度在0.1964~1.5712 mg/ml(r=0.9995,n=9),苯酚浓度在0.2074~1.6592 mg/ml(r=0.9999,n=9)内峰面积与浓度线性关系良好。
2.9 重复性试验
取同一批复方樟脑醑样品(批号:140624)按样品含量测定方法配制6份,按照上述色谱条件测定,分别进样1 μl,注入色谱仪,记录色谱图。按回归方程计算樟脑、薄荷脑、苯酚的含量,结果RSD分别为0.18%、0.32%、0.34%。试验结果表明,该方法重复性良好。
2.10 稳定性试验
取同一批复方樟脑醑样品(批号:140624)按样品含量测定方法配制6份,分别在0、2、4、8、12、24 h进样1 μl,记录峰面积,结果樟脑、薄荷脑、苯酚的RSD分别为0.36%、0.43%、0.42%。试验结果表明,本品溶液在放置24 h后测定,樟脑、薄荷脑、苯酚的峰面积基本无变化,表明溶液在24 h内稳定。
2.11 中间精密度试验
另一实验员第2天使用另一台仪器,精密量取同一批号样品6份,按照“2.3”项下的制备方法制备供试品溶液,在“2.1”项下色谱条件下进行测定,结果樟脑、薄荷脑、苯酚的RSD分别为0.60%、0.42%、0.50%。试验结果表明,该方法中间精密度良好。
2.12 准确度试验
分别精密量取 9份已知含量的样品 (批号:140624)约0.5 ml置20 ml量瓶中,平均分成3组,分别各加入混合对照品溶液(樟脑9.6805 mg/ml、薄荷脑9.7870 mg/ml、苯酚9.1980 mg/ml)0.8、1.0、1.2 ml,用乙醇稀释至刻度,摇匀。按上述气相色谱条件,分别量取1 μl注入气相色谱仪,记录色谱图,计算回收率,结果见表1~3。试验结果表明,该方法回收率良好。
表1 樟脑回收率试验
表2 薄荷脑回收率试验
表3 苯酚回收率试验
2.13 样品含量测定结果
取3批不同批号的样品,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件分别进样测定,见表4。
表4 样品含量测定结果
3 讨论
樟脑、薄荷脑、苯酚,具有局部止痒剂的功效,用于治疗急、慢性皮炎,是复方樟脑醑中的有效成分,故本法选择同时测定复方樟脑醑中樟脑、薄荷脑与苯酚的含量。由于本品为含乙醇的液体制剂,结合被测物质的性质,试验中比较乙醇、乙酸乙酯两种稀释溶剂,结果乙酸乙酯溶液略显混浊,而乙醇则能将样品溶液完全溶解,故最后选择毒性较小的无水乙醇作为稀释溶剂。
试验过程中曾分别尝试使用极性柱、中等极性柱和非极性柱进行样品峰分离,结果发现在极性柱(KBWAX)中樟脑、薄荷脑、苯酚保留时间分别为5.2、7.0、17.5 min,分离效果好,能达到试验目的,故选用极性柱(KB-WAX)进行试验。在试验中曾参考相关文献[7-17]采用恒温125℃、135℃、145℃、160℃和多种程序升温方法,结果以初始温度为130℃,保持10 min,以5℃/min的速率升温至230℃,保持5 min,三组分取得很好的分离效果,满足系统适应性试验要求,故采用此程序升温进行含量测定。利用样品与对照品保留时间一致,还可以同时对樟脑、薄荷脑、苯酚进行气相色谱鉴别。
本试验采用气相色谱法同时对其挥发性成分樟脑、薄荷脑、苯酚进行含量测定,更能客观地反映该复方制剂的质量,而且该结果证明了本法简便快速,重复性良好,回收率高,建议可为复方樟脑醑的质量控制提供检测的新方法。
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Content determination of camphor,menthol and phenol in compound spiritus camphorae by gas chromatography
YANG Yue-long1GONG Li-min2LI Jing3▲HUANG Shao-guo2▲
1.Huaihua Institute for Food and Drug Control in Hunan Province,Huaihua 418000,China;2.School of Pharmacy,Hunan University of Traditional Chinese Medicine,Changsha 410208,China;3.Hunan Medical College,Huaihua 418000,China
[Abstract]ObjectiveTo establish a method for the content determination of camphor,menthol and phenol in compound spiritus camphorae by gas chromatography.MethodsThe capillary column in KB-WAX type(30.00 m×0.32 mm×0.25 μm) was used.Nitrogen was selected as the carrier gas with a flow rate of 3.0 ml/min.The programmed-temperature conditions by flame ionization detector(FID)were to start at the initial temperature of 130℃and keep for 10 min;to rise the temperature to 230℃at 5℃/min and keep for 5 min.The inlet temperature was 200℃and the temperature of detector was 250℃. It was determined by the external standard method.ResultsCamphor,menthol,phenol could be easily separated.The linearity ranges of camphor,menthol,and phenol were 0.2029-1.6232 mg/ml(r=0.9993,n=9),0.1964-1.5712 mg/ml(r=0.9995,n=9),and 0.2 074-1.6 592 mg/ml respectively.The average recoveries were 99.43%(RSD=0.85%),101.85%(RSD=0.84%)and 101.45% (RSD=0.53%)respectively.ConclusionThe method is simple and easy to perform,high in sensitivity,and good in reproducibility,which can be used for the content determination of camphor,menthol and phenol in compound spiritus camphorae.
[Key words]Gas chromatography;Compound spiritus camphorae;Camphor;Menthol;Phenol
[中图分类号]R927.2
[文献标识码]A
[文章编号]1674-4721(2017)02(c)-0096-04
(收稿日期:2016-12-29 本文编辑:顾雪菲)
[基金项目]湖南省药学重点学科(2015)
[作者简介]杨跃龙,男,主管药师,主要从事食品药品质量检验工作
通讯作者:李菁,女,教授,主要从事药学教学和科研工作;黄绍国,男,讲师,主要从事中药质量研究工作