李有恒 徐 洪▲曾 训

深圳市蛇口人民医院病理科，广东深圳 518067

[摘要]目的探讨IMP3、Ki-67在胃肠胰神经分泌肿瘤（GEP-NEN）中的表达及与临床病理特征的关系。方法收集我院及周边地区自2010年1月～2016年10月确诊的59例GEP-NEN，运用免疫组织化学方法检测患者标本中的IMP3、Ki-67表达情况，结合临床病理特征，应用统计学的方法对结果进行分析。结果IMP3在GEP-NEN中阳性率为81.36%（48/59），在不同肿瘤直径、有无淋巴结转移、不同肿瘤分期与分级中的表达差异有统计学意义（P＜0.05），在是否有远处转移中的表达差异没无统计学意义（P＞0.05）；Ki-67在GEP-NEN中阳性率为44.68%（26/59），在肿瘤大小、有无淋巴结转移、有无远处转移、病理分级及临床分期中的表达差异均有统计学意义（P＜0.01）；IMP3、Ki-67表达随着肿瘤体积越大、淋巴结转移、病理分级越高、临床分期越晚阳性率越高。结论IMP3与Ki-67在GEPNEN的表达可作为判断患者预后的参考因素之一；IMP3可能在GEP-NEN的发生、发展过程中起重要作用。

[关键词]神经内分泌肿瘤；胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3；细胞增殖核抗原

神经内分泌肿瘤（neuroendocrine neoplasm，NEN）是起源于肽能神经元以及神经内分泌细胞的一组异质性恶性肿瘤，都有转移潜能[1]。NEN可发生在人体多处器官和组织，主要发生在胃肠道和胰腺，胃肠胰神经内分泌肿瘤（gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm，GEP-NEN）占所有NEN的55%～70%，发病率约为5.25/10万，在消化道肿瘤中排第2位[2]。近年来，GEP-NEN发病率明显升高，与30年前相比增加了将近5倍[3]。胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3（insulin-like growth factorⅡmRNA binding protein 3，IMP3）是一种新识别的肿瘤胚胎蛋白，是影响肿瘤增殖及侵袭转移的重要因素之一[4]；恶性肿瘤的发生、发展与肿瘤细胞增殖密切相关；细胞增殖核抗原（cell proliferating nuclear antigen）（Ki-67）是细胞增殖的良好标志。目前，IMP3在GEP-NEN中的表达关系少有研究，国内未见报导，本研究回顾性分析59例GEP-NEN患者的临床病理资料，通过免疫组织化学方法检测IPM3、Ki-67水平，了解其与GEP-NEN临床病理特征的关系。

1.1 一般资料

收集广东广州、深圳及东莞等5家医院自2010年1月～2016年10月确诊的59例胃肠胰神经内分泌肿瘤，男性41例，女性18例，男女比例2.28∶1。年龄19～77岁，平均47.9岁。发生在前肠19例，中肠14例，后肠8例，胰腺18例。肿瘤直径0.4～7 cm，其中直径≥2 cm共34例，＜2 cm共25例。发生淋巴结转移14例。发生远处转移8例，其中4例肝转移，2例肺转移，皮肤及骨转移各1例。按2010年《WHO消化系统肿瘤分类》的分级标准[5]，1级（G1）27例，2级（G2）14例，3级（G3）18例；G1、G2是NEN，属于高分化肿瘤，G3是神经内分泌癌（neuroendocrine carcinoma，NEC），属于低分化肿瘤。参照美国癌症联合委员会（American Joint Committe on Cancer，AJCC）2010年第7版TNM分期标准[6]，Ⅰ期23例，Ⅱ期8例，Ⅲ期20例，Ⅳ期8例。

1.2 研究方法

所有标本均用4%中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，以4 μm厚度切片，分别做HE和免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）染色。鼠抗人IMP3单克隆抗体（工作浓度1∶100）购自武汉博士德公司；鼠抗人Ki-67单克隆抗体购自福州迈新生物有限公司，通过罗氏全自动免疫组化染色仪（BENCHMARK GX）完成免疫组化染色，参照该仪器操作流程：①4 μm厚石蜡切片置于65℃烤片机中烤60 min，贴上标签置于机器切片盘上；②依次放上DAB试剂盒、苏木精、返蓝液和一抗等试剂瓶，运行仪器；③机器自动完成消化、抗体孵育和复染；④用含有温和清洁剂的蒸馏水冲洗、乙醇脱水、二甲苯透明，最后中性树脂胶封固；⑤用已知阳性组作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判读

采用双盲法，所有病例均由两位高年资病理医师阅片。IPM3阳性定位于细胞质，光镜下呈黄褐色（图1），以＞10%的肿瘤细胞胞质着色定为阳性，按着色强度分弱阳性、中阳性及强阳性，相应显示为浅黄色、棕黄色及棕褐色。Ki-67阳性定位于细胞核，光镜下呈黄褐颗粒状（图2），以＞5%的肿瘤细胞核着色定为阳性，以阳性肿瘤细胞数占比≥50%定为高增殖活性。

1.4 统计学方法

所有数据采用SPSS 19.0统计学软件处理，各组计数资料比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

IMP3阳性率为81.36%（48/59），强阳性5例，中阳性27例，弱阳性16例；IMP3在肿瘤大小、淋巴结转移、病理分级及临床分期中的表达差异均有统计学意义（P＜0.05），而在肿瘤是否有转移的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。Ki-67阳性率为44.68%（26/59），高增殖活性12例；Ki-67在肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移、病理分级及临床分期的表达差异均有统计学意义（P＜0.01）（表1）。

GEP-NEN是罕见的异质性肿瘤，可表现为相对惰性、低度恶性到高度恶性[7]，有研究显示，GEP-NEN发病率男性高于女性[3]，本研究与此相符。近年发病率明显升高，与医疗诊断技术的进步有关，但实际发病率也是升高的[8]。

1907 年，Oberndorfer发现胃肠道有一种类似癌的良性肿瘤，并命名为类癌[9]，这是人们对胃肠胰神经内分泌肿瘤的早期认识，后来证实这类肿瘤都是恶性的。随着研究的深入，发现其来源于消化道弥散神经内分泌系统，部分肿瘤能摄取胺前体及脱羟基（amine precursor uptake and decarboxylation，APUD），所以又叫APUD瘤[10]。由于组织形态多样，生物学行为复杂，长期以来，这类肿瘤的命名及分类较为紊乱，直到2000年世界卫生组织（WHO）才统一命名为神经内分泌肿瘤[11]，2010年《WHO消化系统肿瘤分类》第4版对胃肠胰神经内分泌肿瘤制订了分级、分期标准，同年得到中国胃肠胰神经内分泌肿瘤病理学诊断共识的一致推荐[12]。GEP-NEN分级、分期被证实是影响患者生存率的独立危险因素[13]，有报道称GEP-NENⅠ、Ⅱ期患者5年总生存率达100%，Ⅲ期为91%，Ⅳ期为73%[14]。

IMP3是胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白家族成员之一，在胚胎组织及人体多种恶性肿瘤中高表达，在瘤旁组织、良性肿瘤及成人正常组织中不表达或低表达，被认为是肿瘤胚胎蛋白[15]，大量研究表明，IMP3与消化道鳞癌、腺癌、胆管癌、乳腺癌、膀胱癌等多种恶性肿瘤的侵袭和进展关系密切，被认为是影响肿瘤患者预后的一个关键因素[4]。基础研究揭示IMP3通过结合信使RNA，促进目标RNA的翻译，上调胰岛素样生长因子Ⅱ水平，从而引起细胞增殖并抑制细胞凋亡，是促进肿瘤增殖的重要因素[16]。同时IMP3可以通过上调两性霉素诱导基因、白细胞活化黏附因子和基质金属蛋白酶1等的表达，促进肿瘤细胞伪足形成，提高肿瘤细胞的黏附作用，从而增加肿瘤侵袭性[17]。本研究结果显示，IMP3在GEP-NEN中表达阳性率较高，且明显高于瘤旁正常组织，表明IMP3表达的上调可能在GEP-NEN的发生中起重要作用。同时IMP3在不同肿瘤直径、有无淋巴结转移、不同肿瘤分期与分级中的表达差异有统计学意义，并且均成正相关，表明IMP3可能在GEP-NEN的恶性进展中也起到重要作用；本实验IMP3在是否有远处转移中的表达差异无统计学意义，与部分研究不太一致[18]，但发生远处转移组阳性率为100.00%（8/8），高于无远处转移组的78.41%（40/51），考虑可能与实验样本的局限性如病例的选择性偏移等有关，还有待进一步研究。以上结果显示IMP3在GEP-NEN总体阳性率较高，与影响GEP-NEN患者预后的多个主要危险因素呈正相关。

Ki-67是一种与细胞增殖相关的核蛋白，只存在于细胞核内，本身的存在并不依赖于DNA和组蛋白，只表达于细胞周期的G1、S、G2及M期[19]，能较准确的反映细胞的增殖状态[20]，2010年《WHO消化系统肿瘤分类》第4版把Ki-67纳入GEP-NEN的增殖活性分级指标之一。有报导称Ki-67可以评估GEP-NEN转移潜能以及预测患者的生存期[21]。本研究显示Ki-67在肿瘤直径＜2 cm、无淋巴结转移、无远处转移、分期较早、级别较低的肿瘤中表达阳性率较低，相反则阳性率均较高，组间差异有统计学意义，同时KI-67高增殖集中在高级别及分期晚的病例，表明Ki-67能较直观地显示肿瘤恶性程度，印证了Ki-67高表达，则肿瘤浸润和转移的能力越强，临床分期越晚[19]。

综上所述，IMP3、Ki-67在GEP-NEN的表达均随着肿瘤恶性程度的增加而上调，可作为判断患者预后的参考因素之一；IMP3可能在GEP-NEN的发生、发展过程中起重要作用，随着对IMP3作用机制的更深入研究，可能为临床治疗GEP-NEN带来新的手段。

[1]Modlin IM，Champaneria MC，Bornnschein J，et al.Evolution of the diffuse neuroendocrine system-clear cells and cloudy origins[J].Neuroendocrinology，2006，84（2）：69-82.

[2]Dierdorf SF.Carcinoid tumor and carcinoid syndrome[J].Curr Opin Anaesthesiol，2003，16（3）：343-347.

[3]Yao JC，Hassan M，Phan A，et al.One hundred years after“carcinoid”：epidemiology of and prognostic factors for neuroendocrine tumors in 35，825 cases in the United States[J]. J Clin Oncol，2008，26（18）：3063-3072.

[4]张冉，敖启林.IMP3在人类肿瘤细胞中的表达及研究现状[J].济宁医学院学报，2012，35（4）：297-300.

[5]Bosman FT，Carneiro F，Hruban RH，et al.World Health Organization classification of tumours of the digestive system[M]. Lyon：IARC Press，2010：1-155.

[6]Edge SB，Byrd DR，Compton CC，et al.AJCC cancer staging manual[M].7thed.New York：Springer，2010.

[7]孙丽梅，邱雪杉，王恩华.消化系统神经内分泌肿瘤临床病理特征和免疫组织化脓观察[J].中华病理学杂志，2012，41（10）：696-697.

[8]朱雄增.胃肠胰神经内分泌肿瘤新分类的临床意义[J].中华胃肠外科杂志，2013，16（1）：12-14.

[9]Oberndorfer S.Karzinoide tumoren des dunndarms[J].Frankfurt Z Pathol，1907，1：426-432.

[10]万德森.低位直肠类癌的外科治疗[J].中国实用外科杂志，2005，25（3）：143－144.

[11]应红艳，丛雪晶，赵林，等.胃肠胰神经内分泌肿瘤分类和分期进展[J].癌症进展，2011，9（5）：507－513.

[12]中国胃肠胰神经内分泌肿瘤病理专家组.中国胃肠胰神经内分泌肿瘤病理学诊断共识[J].中华病理学杂志，2011，40（4）：257-261.

[13]梁文全，高云鹤，李佶阳，等.104例胃神经内分泌肿瘤的临床病理特征及预后分析[J].中华胃肠外科杂志，2016，19（4）：427-431.

[14]]李增山.胃肠胰神经内分泌肿瘤分类及病理学进展[J].浙江大学学报（医学版），2016，45（1）：12-14.

[15]Li C，Rock KL，Woda BA，et al.IMP3 is a novel biomarker for adenocarcinoma in situ of the uterine cervix：an immunohistochemical study in comparison with pl6INK4a expression[J].Modern Pathol，2007，20（2）：242-247.

[16]刘纪昀，易韦，于燕妮，等.IMP3及其研究进展[J].贵州医药，2013，37（3）：277-278.

[17]Vikesaa J，Hansen TV，Jonson L，et al.RNA-binding IMPs promote cell adhesion and invadopodia formation[J].EMBO J，2006，25（7）：1456-1468.

[18]严东旺，李大卫，周崇治，等.胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白-3在结肠癌中的表达及临床意义[J].中华实验外科杂志，2010，27（8）：1046-1048.

[19]周越，仇金荣，丁晓蓉，等.胃肠胰神经内分泌肿瘤中Ki-67的表达及其预后的相关性研究[J].临床肿瘤学杂志，2013，18（6）：506-509.

[20]Sasaki K，Murakami T，Kawasaki M，et al.The cell cycle associated change of the Ki-67 reactive nuclear antigen expression[J].J Cell Physiol，1987，133（3）：579-584.

[21]Hotta K，Shimoda T，Nakanishi Y，et al.Usefulness of Ki-67 for predicting the metastatic potential of rectal carcinoids[J].Pathol Int，2006，56（10）：591-596.

Expression of IMP3 and Ki-67 in gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm and its relationship with clinicopathological features

LI You-heng XU Hong▲ZENG Xun
Department of Pathology,Shekou People′s Hospital of Shenzhen City in Guangdong Province,Shenzhen 518067,China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of IMP3 and Ki-67 in gastrointestinalopancreatic neuroendocrine neoplasm(GEP-NEN)and its relationship with clinicopathological features.Methods59 patients with GEP-NEN diagnosed from January 2010 to October 2016 in our hospital and other surrounding areas were collected.Immunohistochemistry was used to detect the expression of IMP3 and Ki-67 in patients′specimens.Clinical and pathological features were combined,and the results were statistically analyzed.ResultsThe positive rate of IMP3 in GEP-NEN was 81.36%(48/ 59).The differences of the expression in different tumor size,whether there was lymph node metastasis or not,different tumor stages and classifications were statistically significant(P＜0.05).There was no statistical significance in the expression of tumor in terms of whether there was distant metastasis or not(P＞0.05).The positive rate of Ki-67 in GEPNEN was 44.68% (26/59).The differences of the expression in different tumor size,whether there was lymph node metastasis or not,whether there was distant metastasis or not,different pathological grades and clinical stages were statistically significant(P＜0.01);the positive rate of the expression of IMP3 and Ki-67 was increased with larger tumor size,lymph node metastasis,higher pathological grades,and more advanced clinical stages.ConclusionThe expression of IMP3 and Ki-67 in GEP-NEN may be one of the reference factors for determining patients′prognosis.IMP3 may play an important role in the development and progression of GEP-NEN.

[Key words]Neuroendocrine neoplasm;Insulin-like growth factorⅡmRNA binding protein 3;Cell proliferating nuclear antigen

[中图分类号]R735

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）02（c）-0015-04

（收稿日期：2016-12-06 本文编辑：许俊琴）

[基金项目]广东省深圳市南山区科技局立项课题（2014067）