陈伟君 叶昌远 程晓玲

广东省河源市中医院检验科，广东河源 517000

[摘要]目的探讨免疫抑制法和免疫荧光定量法在肌酸激酶同工酶活性测定中应用价值。方法选取我院2014年1月～2015年12月收治的70例患者，根据疾病类型分为甲组及乙组，各35例。甲组为急性心肌梗死患者且发病时间在4～8 h，乙组为非心源性疾病且肌酸激酶同工酶（CK-MB）活性升高的患者，分别使用速率法及免疫抑制法测定两组患者的肌酸激酶（CK）活性及CK-MB活性，用免疫荧光定量法测试CK-MB质量浓度。结果甲组CK活性[（585.0±102.0）U/L]、CK-MB活性[（85.0±22.0）U/L]与CK-MB质量浓度[（18.5±2.2）ng/ml]均升高；乙组CK活性正常，CK-MB活性升高，但CK-MB质量浓度不升高，结果不一致。结论CK-MB的活性测定方法一般均为免疫抑制法，但由于方法学的局限性，可引起测定结果假性升高，出现异常升高时，及时和临床取得联系，可结合患者的病情，进一步用免疫荧光定量测定CK-MB的质量浓度，为患者提供更准确的检测结果。

[关键词]免疫抑制法；免疫荧光定量法；肌酸激酶同工酶

临床上，一般用天冬氨酸氨基转移酶（AST），乳酸脱氢酶（LDH），α-羟丁酸脱氢酶（α-HBDH），肌酸激酶（CK）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）的活性作为心肌酶谱，主要用于确定心肌缺血坏死或细胞膜的通透性，是衡量心肌受损的指标。CK主要存在于骨骼肌、心肌和脑组织中，CK-MB大量存在于心肌组织中，其他组织和器官中含量很少，所以CK-MB是目前诊断急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）的一个极其可靠的生化指标，特异性可达95%乃至更高[1]。正常情况下，CK-MB/CK应＜5%，CK-MB升高，≥正常高值的6%，被认为是提示心肌损伤的指标[2]。临床一般用免疫抑制法测定CK-MB的活性，在心肌酶谱中，有时会出现CK-MB升高，而CK不升高的检测结果，但用免疫荧光定量法测定CK-MB质量浓度时却不会升高。为了探明用免疫抑制法测定CK-MB活性是否假性增高，特分别采用免疫抑制法和免疫荧光定量法测定我院收治的患者血清中的CK-MB活性与CK-MB质量浓度，进行回顾性分析，现报道如下。

1.1 一般资料

选取我院 2014年 1月～2015年 12月收治的70例患者，按照患者疾病类型分组：甲组为AMI患者35例，符合WHO制定的AMI诊断标准[3]，发病4～8 h入院，年龄45～72岁。乙组为非心源性疾病患者35例，年龄2～72岁，其中脑外伤5例，儿科患者（年龄为 2～6岁，所选患儿排除心源性疾病）10例，恶性肿瘤20例。本研究经我院医学伦理委员会批准，患者或家属知情同意。

1.2 方法

护士采集肘静脉血后立即送我院检验科，排除溶血、脂血、黄疸的影响。采用速率法测定CK活性，免疫抑制法测定CK-MB活性，两者均使用西门子全自动生化分析仪（型号ADVIA 1800），试剂、定标液及质控品均是北京恩剂和生物技术股份有限公司提供。CK-MB质量浓度测定采用免疫荧光定量法，仪器为南京基蛋生物技术股份有限公司的免疫荧光定量分析仪（型号FIA 8000），试剂及校准品为其配套试剂。对甲、乙两组患者进行CK活性、CK-MB活性及CK-MB质量浓度测定。CK活性及CK-MB活性分别用速率法及免疫抑制法在全自动生化分析仪测定，CK-MB质量浓度测定是根据抗原抗体特异性结合这一特性，采用免疫荧光定量法测定。CK活性正常参考区间为5～200 U/L，CK-MB活性正常参考区间为0～25 U/L，质量浓度正常参考区间为2.5～5.0 ng/ml。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（±s）表示，以P＜0.05为差异有统计学意义。

甲组35例AMI患者CK活性、CK-MB活性、CKMB质量浓度均升高，其中CK为（585.0±102.0）U/L，CK-MB活性为（85.0±22.0）U/L，CK-MB质量浓度为（18.5±2.2）ng/ml，符合AMI的发病特征，达到预期水平；乙组35例患者CK活性在正常范围，CK-MB活性升高，但CK-MB质量浓度在正常范围。在非心源性疾病患者中，尤其是脑外伤、儿科疾病及恶性肿瘤患者均出现CK-MB活性升高，但CK活性及CK-MB质量浓度无升高现象（表1）。

作为急性心肌梗死疾病的标志物之一的CKMB，无论测定其活性还是质量浓度，在诊断AMI中的作用毋庸置疑，所以一直延用至今。本研究反映出采用免疫抑制法测定CK-MB活性的局限性，在某些疾病上，它可能会出现假性增高，而用荧光定量法测定的CK-MB则未出现此现象。其原因分析如下。

CK是由两种不同亚基（M和B）组成的二聚体，正常人体组织中通常含3种同工酶：CK-BB、CK-MB和CK-MM。其中CK-MB主要存在于心肌中，占15%～40%[4]，在其他组织中几乎不存在，这在人体中是绝无仅有的。CK-BB则主要存在于平滑肌、神经与脑组织中，其他主要组织器官中含量很低[5]。临床上大多用免疫抑制法测定CK-MB活性，其原理为抗M亚单位的抗血清，可以和CK-MM及CK-MB中的M亚单位形成抗原抗体复合物，从而完全抑制M亚单位的酶活性，因为正常血清中几乎无CK-BB，故将此值乘以2可以认为大致代表CK-MB的活性。由于方法学的局限并受诸多因素干扰易导致假阳性值，甚至出现CK-MB活性假性增高情况。从结果可知，脑外伤、儿科疾病及恶性肿瘤患者的CK-MB活性都有不同程度的假性升高，究其原因：①脑损伤时，脑组织中的CK-BB大量释放入血，此时采用免疫抑制法测定CK-MB时，是测定的B亚基结果乘以2得到的，因而出现CK-MB假性升。②由于CK-MT与CK-M亚基抗原性不同，使抗M亚基的抗体不能抑制其活性，因而测定是总CK活性，后结果乘以2，因而出现CK-MB假性增高。汤冬玲等[6]报道，恶性肿瘤患者存在巨CK2，其是线粒体CK（CK-MT）相互聚合成的大分子寡聚体复合物，存在于膜上，线粒体崩解释放入血。另有研究表明，当肿瘤患者出现CK-BB/总CK＞15%时，是潜在的致命危险信号[7]。③由于生理因素的原因，血清中的CK-BB含量与年龄存在一定的关系，儿童血清中的CK-BB的含量高于成人，成守金等[8]在37℃测定500名正常儿童，参考值取单侧上限为（X+1.96S）=47.6 U/L。建议临床对儿童血清CK-MB活性的测定，不要直接引用成人标准，以免造成误诊。临床上引起CK-MB活性假性升高的原因多由于患者血清中存在较多的CK-BB、巨CK、巨CK2的干扰所致[9-11]，另有研究表明，溶血标本亦可使CK-MB活性假性升高，而且溶血程度越重CK-MB活性假性升高程度越大[12-13]，这与红细胞中含有腺苷酸激酶有关，此酶可以直接参与CK-MB酶促反应，从而引起CK-MB活性假性升高。

CK-MB质量浓度测定采用免疫荧光定量法，其原理是在检测卡上包被有荧光标记的抗体以及捕获抗体，当试样加入到检测卡时，荧光标记的抗体和样本中的待测物结合，形成抗原抗体复合物，当免疫复合物层析至检测区时，与抗CK-MB抗体发生反应。血液中的CK-MB越多，测试带的复合物越多，条带上的光密度值越高，所以其他同工酶对它无影响，故无假性升高现象出现，因此，用免疫荧光定量法测定血清CK-MB含量，在灵敏度、特异性及抗干扰等方面均优于免疫抑制法测定血清CK-MB活性，更适用于临床[14-15]。

综上所述，免疫抑制法测定CK-MB的活性简单迅速、成本低，适合于基层医院开展，缺点是特异性差，如患者血清中还存在着CK-BB或者异常CK时，将出现假性增高，故可作为过筛实验，而免疫荧光定量测定CK-MB时，特异性高，但其成本相对较高，基层医院运用较少。

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Application value of immunosuppression and immune fluorescence quantitative method in the determination of creatine kinase isoenzyme

CHEN Wei-jun YE Chang-yuan CHENG Xiao-ling
Department of Laboratory,Heyuan Triditional Chinese Hospital in Guangdong Province,Heyuan 517000,China

[Abstract]ObjectiveTo explore the application value of immunesuppression and immune fluorescence quantitative method in the determination of creatine kinase isozyme activity.Methods70 patients in our hospital from January 2014 to December 2015 were selected and divided into two groups according to the disease type,with 35 cases in each group. The A group was acute myocardial infarction (AMI)and the duration was in 4-8 h;the B group was non-cardiac disease and high CK-MB activity.The CK activity and CK-MB activity of patients in two groups were respectively determinated using the velocity method and immunesuppression method,and the quality of CK-MB was determined using immune fluorescence quantitative method.ResultsThe CK activity[(585.0±102.0)U/L],CK-MB activity[(85.0±22.0)U/L]and quality of CK-MB[(18.5±2.2)ng/ml]of patients in group A were all raised;the CK activity of patients in group B was normal, the CK-MB activity was raised with a inconsistent results that the quality of CK-MB was not raised.ConclusionThe method to determinate the CK-MB activity in general is immunesuppression method.But because of the limitation of the methodology,the activity of CK-MB may falsely raise.On this occasion,doctors should combine the clinic and patients′conditions,using the immune fluorescence quantitative method to make further determination of the quality of CK-MB, in order to provide more accurate test results for the patients.

[Key words]Immunesuppression method;Immune fluorescence quantitative method;Creatine kinase isoenzyme

[中图分类号]R446.1

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）02（c）-0118-03

（收稿日期：2017-01-04 本文编辑：任 念）