陈志平1王岚枫2胡 蓉1

1.赣南医学院第一附属医院检验科，江西赣州341000；2.赣南医学院第一附属医院肾内科，江西赣州341000

[摘要]目的分析THP-1巨噬细胞中过表达GPR119对脂质代谢相关基因表达的影响。方法构建过表达GPR119载体，转染THP-1细胞，用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬细胞。NC组：空载体转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；GPR119（H）组：过表达GPR119转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。检测过表达GPR119转染THP-1巨噬细胞后脂质代谢相关基因表达。结果过表达GPR119组SR-B1、APOE、LCAT基因表达显著高于NC组表达（P=0.000）。结论过表达GPR119能引起脂质代谢相关基因表达变化。

[关键词]GPR119；脂质代谢；基因表达；THP-1巨噬细胞

GPR119是一个新的可能参与调节体内脂质代谢的膜受体[1-2]。GPR119属于G蛋白偶联受体A家族，有7个跨膜区，在胞浆内与三个亚单位（α、β、γ）所组成的G蛋白偶联，主要表达在胰岛和胃肠道细胞[3-4]。人源性GPR119的基因定位于Xq26.1，该基因的开放阅读框架仅有一个外显子，不含内含子，编码335个氨基酸。GPR119在治疗2型糖尿病及肥胖的作用有比较深入的研究，并提示GPR119可能参与脂质代谢[5-8]。本文旨在探讨GPR119是否参与脂质代谢，研究过表达GPR119后脂质代谢相关基因的表达。

1.1 细胞培养

THP-1细胞从American Type Culture Collection (ATCC，Manassas，VA，USA)获得，用RPMI-1640培养基培养，RPMI-1640培养基包含10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素，培养环境为37°C，5%CO2。细胞被种植于6孔板或12孔板或60 mm平皿，并且生长到铺满平皿达80%～90%时待用。NC组：空载体转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；GPR119（H）组：过表达GPR119转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。

1.2 主要仪器与试剂

CO2培养箱（美国Thermo公司）；超净工作台（美国Thermo公司）；7500 Fast荧光定量仪（美国ABI公司）；胎牛血清（四季青公司）；Lipofectamine 2000（美国Invitrogen公司）；PrimeScript RRT Enzyme MixI和SYBRRPremix Ex TaqTMII等基因检测试剂（购自Takara公司）。

1.3 转染

Lipofectamine 2000过表达GPR119，转染THP-1细胞（按美国Invitrogen公司说明书操作），用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬细胞。

1.4 基因检测

THP-1巨噬细胞PBS清洗3遍，提取总RNA，并将mRNA反转录成cDNA。反应条件为：37℃下15 min，85℃下5 s（表1）。

按试剂说明书操作ABI 7500 Fast Real-Time RCR System，反应条件为：95℃下预变性30 s，95℃下5 s，60℃下34 s，40次循环后分离（表2）。

所有标本均于同一反应体系中进行，每份重复检测3次。

1.5 检测指标

检测过表达GPR119转染THP-1巨噬细胞后脂质代谢相关基因清道夫B1（SR-B1）、载脂蛋白E（APOE）及卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）表达。

1.6 统计学分析

采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行处理，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

采用实时定量PCR测定过表达GPR119后THP-1巨噬细胞中SR-B1、APOE及LCAT表达，结果表明，与NC组比较，GPR119（H）组SR-B1、APOE及LCAT表达显著升高（P＜0.01）（表3）。

本研究表明，过表达GPR119后THP-1巨噬细胞中SR-B1、APOE、LCAT表达显著上调（P=0.000）。SRB1是一个多配体受体，能在高密度脂蛋白（HDL）与细胞间介导双向脂质转运，可以在动脉粥样硬化斑块的巨噬细胞中表达，对肝脏胆固醇的逆向转运和抗动脉粥样硬化都是必须的。SR-B1敲除鼠可导致快速的冠状动脉闭塞、心肌梗死、心功能降低和死亡，提示SR-B1对于脂质调节和抗动脉粥样硬化起重要作用[9]。APOE是血浆中脂蛋白的重要组成成分，在脂质代谢中起着重要作用，APOE通过不同机制对动脉粥样硬化起一定抑制作用[10]。LCAT是一种血浆中起催化作用的酶，其作用是将HDL的卵磷脂的C2位不饱和脂肪酸转移给游离胆固醇，生产溶血卵磷脂和胆固醇酯，在脂质代谢中发挥重要作用[11-12]。

GPR119在治疗2型糖尿病及肥胖的作用已有比较深入的研究。GPR119与激动剂结合后，通过cAMP信号转导途径，促进葡萄糖依赖性胰岛素和肠肽激素的分泌，是治疗2型糖尿病和肥胖症的药物靶点[13-14]。最新研究表明，GPR119在APOE敲除鼠中降低血清脂质和炎症因子，可能成为动脉粥样硬化的治疗靶点[15-17]。

本研究提示，GPR119在巨噬细胞脂质代谢平衡中发挥重要作用，间接参与对肝脏胆固醇的逆向转运，可能为动脉粥样硬化的防治提供新的治疗靶点。

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Effect of GPR119 on lipid metabolism related gene expression

CHEN Zhi-ping1WANG Lan-feng2HU Rong1
1.Department of Laboratory,the First Affiliated Hospital of Gannan Medical College,Ganzhou341000,China;2.Department of Renal Medicine,the First Affiliated Hospital of Gannan Medical College,Ganzhou341000,China

[Abstract]Objective To investigate the effects of overexpression of GPR119 on expression of genes related to lipid metabolism in THP-1 macrophages.Methods Expression vector GPR119,and transfected into THP-1 cells with phorbol ester(160 nmol/L,48 h)to differentiate into macrophages were constructed.NC group:the empty vector transfected into THP-1 Dil-oxLDL(50 g/ml)48 h;GPR119(H)group:over expression of GPR119 transfected with THP-1 Dil-oxLDL (50 g/ml)48 h.detection of lipid metabolism related genes expression in GPR119 transfected macrophages after THP-1. Results The expression of GPR119 in group SR-B1,APOE,LCAT gene expression were significantly higher than those of control group(P=0.000).Conclusion Over expression of GPR119 can cause changes in the expression of genes related to lipid metabolism.

[Key words]GPR119;Lipid metabolism;Gene expression;THP-1 macrophage

[中图分类号]R446.1

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）01（c）-0138-03

（收稿日期：2016-12-22本文编辑：顾雪菲）