邹淑琴

广东省梅州市丰顺县人民医院检验科，广东丰顺 514300

[摘要]目的对比分析高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的检验中聚阴离子多聚物/表面活性剂（PPD）法和PEG修饰酶/硫酸α-环糊精（PEGME）法及沉淀法的准确性和特异性。方法分别将已知浓度为1.0～2.0、2.0～4.0mmol/L的HDL-C、LDL-C在生化分析仪上进行测试，运用两点终点法对参数进行分析，主、辅波长分别为600、700 nm，在3μl标本量中加入240μl R1，288 s后读取吸光度A1，反应5min后再将80μl R2加入其中，600 s后读取吸光度A2。依据参考品的HDL-C、LDL-C浓度值计算其含量。结果PPD法试剂对HDL-C具有相对缓慢的作用，对LDL的非特异性反应较为显著，达到10%～20%；PEGME法试剂对HDL-C具有相对较快的作用，对LDL-C基本不具有非特异性反应，仅为5%以下。HDL-C、LDL-C、Trig的正常值分别为1.1～1.7、1.7～2.9、0.4～1.8mmol/L，PPD法的结果高于沉淀法7%～15%。将参照设定为沉淀法结果，如果血清标本在正常胆红素浓度范围内，则PPD法测定结果就具有假性增高的表现，而如果血清标本胆红素浓度＞20μmol/L，则PPD法测定结果就具有明显降低的表现，达到参照值的60%；胆红素浓度变化极少干扰PEGME法测定结果。将参照设定为沉淀法结果，PPD法测定结果受到三酰甘油的影响显著提升了20%以上，而三酰甘油浓度的提升使其进一步假性增高；PEGME法较少受到三酰甘油的影响。两者均与三酰甘油浓度成负性关系。PPD法的结果显著高于沉淀法（t=4.303，P＜0.05）。结论HDL-C的检验中PEGME法优于PPD法，临床实验室应谨慎应用PPD法，值得临床重视。

[关键词]高密度值蛋白胆固醇；沉淀法；聚阴离子多聚物/表面活性剂法；PEG修饰酶/硫酸α-环糊精法

在临床陆续普及高密度脂蛋白胆固醇 （HDL-C）直接测定法后，沉淀法已经发展成为临床采用的重要比较方法[1]。抗体包裹（IS）法是直接测定法的起源，优于临床很难制备该法的特异性抗体，同时该法具有较多的反应步骤，因此只在一些特定型号的仪器上适用，在临床的应用中受到了极大程度的限制[2]。目前，聚阴离子多聚物/表面活性剂（PPD）法和PEG修饰酶/硫酸α-环糊精（PEGME）法已经在临床得到了广泛应用，国内主要对PPD法进行了研究[3]。近年来，一种消除法出现，其对HDL-C没有非特异性反应，且具有较为特异而迅速的作用，特别是三酰甘油水平不对其造成影响。其类似于低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定的消除法，但是仍然需要相关医学学者对其试剂的确切性进行考证[4]。为了将有效依据提供给临床，本研究对比分析沉淀法、PPD法、PEGME法，现报道如下。

1.1 仪器和试剂

应用序列超离制备HDL-C、LDL-C，d分别为1.070～1.100、1.025～1.050 g/ml。购买BM公司生产的HDL-C/LDL-C校准血清 （HDL-C、LDL-C分别为1.40、2.61 mmol/L），本中心自备沉淀法试剂，购买罗氏生产的PPD法、PEGME法试剂，具体见表1。

1.2 方法

分别将已知浓度为1.0～2.0、2.0～4.0 mmol/L的HDL-C、LDL-C在生化分析仪上进行测试，运用两点终点法对参数进行分析，主、辅波长分别为600、700 nm，在3μl标本量中加入240μl R1，288 s后读取吸光度A1，反应5 min后再将80μl R2加入其中，600 s后读取吸光度A2。依据参考品的HDL-C、LDL-C浓度值将其含量计算出来。

1.3 统计学分析

采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以s表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 PPD法、PEGME法试剂对HDL-C、LDL-C的作用情况

PPD法试剂对HDL-C具有相对缓慢的作用，对LDL-C的非特异性反应较为显著，达到了10%～20%；PEGME法试剂对HDL-C具有相对较快的作用，对LDL-C基本不具有非特异性反应，仅为5%以下。由于人体LDL-C浓度显著高于HDL-C，因此其结果具有较高的准确性。

2.2 沉淀法、PPD法、PEGME法对正常血清标本HDLC的测试结果

HDL-C、LDL-C、Trig的正常值分别为1.1～1.7、1.7～2.9、0.4～1.8 mmol/L，PPD法的结果高于沉淀法7%～15%，提升原因为PPD法对LDL-C具有非特异性反应；PEGME法和沉淀法结果较好地吻合，见表2。

2.3 PPD法、PEGME法在不同胆红素浓度下所测HDL-C值和沉淀法测值的比较

将参照设定为沉淀法结果，若血清标本在正常胆红素浓度范围内，则PPD法测定结果就具有假性增高的表现，而如果血清标本胆红素浓度＞20μmol/L，则PPD法测定结果就具有明显降低的表现，达到参照值的60%；胆红素浓度变化极少干扰PEGME法测定结果，见表3。

2.4 PPD法、PEGME法在不同三酰甘油浓度下所测HDL-C值和沉淀法测值的比较

将参照设定为沉淀法结果，PPD法测定结果受到三酰甘油的影响显著提升了20%以上，而三酰甘油浓度的提升使其进一步假性增高；PEGME法较少受到三酰甘油的影响，两者均与三酰甘油浓度成负性关系，见表4。

2.5 PPD法、PEGME法在符合HDL-C/LDL-C校准血清下所测HDL-C值和沉淀法测值的比较

PPD法的结果显著高于沉淀法，差异有统计学意义（t=4.303，P＜0.05），增高原因为其对LDL-C具有非特异性反应；PEGME法和沉淀法结果具有较好的吻合，见表5。

相关医学学者研究表明[5]，PPD法缺乏足够准确的试剂，高胆红素标本甚至会有42%的偏差出现。研究表明[6]，PPD法具有较差的准确性和特异性，甚至认为PPD法应该在临床检验中慎用[7]，认为该法无法将反应酶系对LDL-C显著的副作用从根本上消除掉，随时可能会发生假性增高或降低，因此，临床普遍认为[8]，在检验过程中应该慎用PPD法试剂。PEGME法具有较好的效果，但是三酰甘油会使其具有较低的结果[9]。本研究结果表明，PPD法试剂对HDL-C具有相对缓慢的作用，对LDL-C的非特异性反应较为显著，达到10%～20%；PEGME法试剂对HDL-C具有相对较快的作用，对LDL-C基本不具有非特异性反应，仅为5%以下。由于人体LDL-C浓度显著高于HDL-C，因此其结果具有较高的准确性；PPD法与沉淀法比较具有较大的偏差，结果具有较多的假性增高，发生这一现象的原因为其具有较差的准确性和特异性，具体表现在对HDL-C具有较弱的反应性，对LDL-C的非特异性反应显著，具有较差的抗胆红素和三酰甘油干扰能力；PEGME法和沉淀法具有较好的吻合，其具有较为优良的抗干扰性能、反应速度及选择性，因此具有较为理想的效果，显著优于PPD法，在常规分析中较为适用，将两种测定方法的本质情况基本反映出来，与上述相关医学研究结果一致。

测试机制是PPD法和PEGME法差异的根源，PPD法对HDL-C进行检测的途径为将聚阴离子对超低密度酯蛋白（VLDL）及LDL-C的吸附作用充分利用起来，同时将表面活性剂溶解有利HDL-C的作用充分利用起来。但是，该方法本真无法将反应酶系接触LDL-C引发的显著副作用从根本上消除掉[10]。而PEGME法则对这一问题进行了较好的解决，一方面LDL-C受到了硫酸α-环糊精等的有效遮蔽，另一方面大分子LDL-C复合物接触酶的现象在修饰酶中PEG修饰剂形成的空间障碍的作用下得到了有效避免[11]。在评价HDL-C自动化测定试剂的过程中应该至少从以下两个方面考察：①对HDL-C具有快速完全的反应；②很少作用于或不作用于LDL-C等组分，结果的准确性和非特异性反应控制的严格性成显著的正相关[12]。评定过程中应该对应用复合标准的现象进行有效的避免，将受到非特异性反应的影响程度减轻到最低限度，从而将标本情况客观反映出来，对结果假性增高或降低现象的发生进行有效的避免[13-18]。从总体上来说，国内关于有效提升HDL-C自动化测定的相关研究尚少，多为低水平的重复或对进口品种的依赖，因此对一些至关重要的基础研究工作进行积极开展极为必要和重要，如脂蛋白各组分解离对表面活性剂的影响、脂蛋白亚组分释放受到缓冲液离子强度变化的影响等，只有这样才能有效提升研究水平，切实有效地保证试剂质量[19]。

综上所述，HDL-C的检验中PEGME法优于PPD法，临床实验室应谨慎应用PPD法，值得临床重视。

[1]中国成人血脂异常防治指南制订联合委员会.中国成人血脂异常防治指南[J].中华心血管病杂志，2007，33（5）：390-419.

[2]张琳，罗乾元.四川东北地区6249名健康体检者血脂水平现状分析[J].中国健康月刊A版，2011，30（11）：16-17.

[3]李志勤.健康体检人群血脂四项水平的调查研究[J].医学理论与实践，2011，24（3）：363-364.

[4]霍素华.血脂检验对糖尿病的临床意义分析[J].中国医学创新，2011，8（27）：171-172.

[5]王荣就.血脂检测及其异常病因诊断[J].国际检验医学杂志，2011，32（3）：429.

[6]甘红，孙有霞.健康体检血脂检测结果分析及应对措施[J].中国社区医师（医学专业），2011，13（11）：206．

[7]杜修立，俞乔.住院医疗费用的影响因素研究：基于医院样本的实证分析[J].中国卫生经济，2011，30（2）：59-61.

[8]蒋伟勇.中老年人健康体检血脂异常分析[J].实用心脑肺血管病杂志，2012，20（4）：637-638.

[9]廖春盛，戴小波，魏涛，等.分级检验在肾脏生化中的应用[J].检验医学与临床，2011，8（6）：720-722.

[10]王俊杰.1589例体检者血糖血脂检测结果分析[J].临床输血与检验，2013，15（1）：71-72.

[11]何治军，王孟仙，宁敏曼.强肝胶囊治疗非酒精性脂肪肝合并高脂血症的疗效观察[J].海南医学院学报，2016，10 （14）：1518-1520.

[12]李凝旭，涂艳，刘晓霞，等.糖尿病合并骨质疏松症患者炎症因子、脂肪因子变化的研究[J].海南医学院学报，2016，6（5）：438-440.

[13]Reimund M，Larsson M，Kovrov O，et al.Evidence for two distinctbinding sites for lipoprotein lipase on glycosylphosphatidylinositol-anchored high density lipoprotein-binding protein 1（GPIHBP1）[J].JBiolChem，2015，290（22）：13919-13934.

[14]Liu SY，Wang T，Xie J，et al.An analysis on the association between lipidmetabolism and low birth bodymass and relative factors among rural and urban adolescents[J].Zhongguo YiXue Ke Xue Yuan Cue Bao，2016，38（2）：210-216.

[15]Apro J，Parini P，Broijersén A，et al.Levels of atherogenic lipoproteins are unexpectedly reduced in interstitial fluid from type 2 diabetes patients[J].JLipid Res，2015，56（8）：1633-1639.

[16]Piper DE，Romanow WG，Gunawardane RN，etal.The highresolution crystal structure ofhuman LCAT1[J].JLipid Res，2015，56（9）：1711-1719.

[17]Luthi AJ，Lyssenko NN，Quach D，et al.Robust passive and active efflux of cellular cholesterol to a designer functional mimic of high density lipoprotein[J].J Lipid Res，2015，56 （5）：972-985.

[18]Amar MJ，Kaler M，Courville AB，et al.Randomized double blind clinical trial on the effect of oralα-cyclodextrin on serum lipids[J].Lipids Health Dis，2016，15（1）：115.

[19]Bal BS.Effects of chandra nadi pranayama on hematologicalparameters[J].Ad Phys Edu，2015，5（2）：128-135.

Com parative analysis of three testmethods of high density protein cholesterol

ZOU Shu-qin
Clinical Laboratory,People′sHospitalof Fengshun County in Meizhou City,Guangdong Province,Fengshun 514300,China

[Abstract]ObjectiveTo compare and analyze the accuracy and specificity of polyanionic polymer/surfactant(PPD) method and PEG-modified enzyme/sulfateα-cyclodextrin method (PEGME)and precipitationmethod in high-density lipoprotein cholesterol(HDL-C)inspection.MethodsThe known concentration 1.0 to 2.0,2.0 to 4.0 mmol/L of HDL-C, LDL-C were tested on biochemical analyzer,the parameters were analyzed by two point end method,the primary and secondary wavelength were 600 nm,700 nm,respectively,240μl R1 were joint to 3μl sample,288 s absorbance A1volume was readed out,the reaction for 5 min before the 80μl R2 added,600 s absorbance A2after reading it.valueswere calculated its content according to the reference product of HDL-C,LDL-C concentration.ResultsPPD reagent had relatively slow effect on HDL-C,nonspecific response to LDL-C was up to 10%to 20%;PEGME reagent had relatively high effect on HDL-C,the LDL-C did not have a nonspecific response,only 5%.The normal values of HDL-C,LDL-C and 1.1 to 1.7mmol/Lwere respectively Trig,1.7 to 2.9,0.4 to 1.8,and the result of PPD method was higher than that of precipitation method 7%to 15%.The reference set for precipitation results,if the serum samples in normal bilirubin concentration range,so the test results of the PPD method with false increase performance,and if the serum bilirubin concentration of＞20 mol/L,then PPD assay results had significantly lower performance,reached the reference value of 60%;the change of bilirubin concentration little interference PEGME determination results.The reference set for precipitation results,PPD determination results were influnced by the triglyceride,and was significantly improved more than 20%,while raising the concentration of triglyceride increased further pseudo PEGMEmethod;less triglyceride effect.The two were negatively correlated with triglyceride concentration.The result of PPD method was significantly higher than that of precipitationmethod (t=4.303，P＜0.05).ConclusionThe PEGMEmethod is better than PPDmethod in HDL-C inspection,the clinical laboratory should prudent application of PPDmethod,so isworthy of the clinical′s attention.

[Key words]High density protein cholesterol;Precipitationmethod;PPDmethod;PEGMEmethod

[中图分类号]R446.11+2

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2016）12（a）-0148-04

（收稿日期：2016-10-10本文编辑：顾雪菲）