王东艳1　李满兰2　黄　河3

1.广东省东莞市第三人民医院产科，广东东莞　523000；2.广东省东莞市第三人民医院手术室，广东东莞523000；3.广东省东莞市第三人民医院耳鼻喉头颈外科，广东东莞　523000

［摘要］目的探讨淋巴细胞主动免疫治疗对不明原因复发性流产封闭抗体的影响。方法选取2014年5月～2015年11月我院112例不明原因复发性流产患者为研究对象，采用单双号法将其分为研究组和对照组，各56例。对照组给予常规治疗，研究组给予淋巴细胞主动免疫治疗，比较两组治疗效果。结果治疗3次、4次后，研究组封闭抗体检测阳性率高于对照组（P＜0.05）；两组CD4+、CD4+/CD8+、CD16+CD56+降低，CD8+升高，且研究组更为明显（P＜0.05）；妊娠成功率为64.29%，高于对照组的42.86%（P＜0.05）。结论淋巴细胞主动免疫治疗不明原因复发性流产的临床效果显著，能有效改善封闭抗体阳性率，值得推广。

［关键词］主动免疫；复发性流产；封闭抗体；T细胞亚群

复发性流产是临床上较常见的一种妇科疾病，病因较复杂，除免疫、感染、内分泌、解剖、遗传等因素外，不明原因的复发性流产也较多见。据相关数据统计，不明原因复发性流产在复发性流产中所占比例达45%～50%，且近年来发生率呈上升趋势［1-3］。为探讨淋巴细胞主动免疫治疗对不明原因复发性流产封闭抗体的影响，本研究对我院收治的112例不明原因复发性流产患者采用两种治疗方案进行研究，现报道如下。

1.1　一般资料

选取2014年5月～2015年11月我院收治的112例不明原因复发性流产患者为研究对象，所有入选患者均经B超检查，由我院妇科专家确诊，符合中华医学会妇产科分会制定的复发性流产诊断标准［4］。根据患者入院的先后顺序编号，单号为研究组，双号为对照组，各56例。研究组中，年龄24～35岁，平均（29.81±3.47）岁；流产时孕龄4～11周，平均（8.12± 2.16）周；流产次数2～4次，平均（3.37±0.43）次。对照组中，年龄23～34岁，平均（30.06±3.29）岁；流产时孕龄4～12周，平均（8.26±2.07）周；流产次数2～5次，平均（3.49±0.36）次。两组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经我院伦理委员会批准，所有入选患者均签署知情协议。

1.2　纳入和排除标准

纳入标准：①符合不明原因复发性流产的诊断标准；②年龄20～35岁；③内分泌功能正常；④夫妇染色体检查均正常；⑤抗核、抗心磷脂、抗双链DNA、抗子宫内膜等抗自身抗体检测为阴性。排除标准：①经B超检查子宫出现先天性畸形、宫腔粘连等情况；②合并支原体、衣原体、巨细胞病毒、艾滋病病毒、弓形体等生殖道感染；③丈夫或第三方提供淋巴细胞者精液检查异常；④夫妇肝功能检查异常者；⑤不愿签署协议书者［5］。

1.3　方法

1.3.1　对照组给予常规治疗 黄体酮 （规格：50mg，批准文号：国药准字H20041902，浙江仙琚制药股份有限公司），餐后口服100 mg/次，1次/d，连续口服2周，经确诊为妊娠后，肌内注射人绒毛膜促性腺激素2000 U，每2天注射1次，1周后改为2次/周，2周后改为1次/周，连续治疗12周。

1.3.2　研究组给予淋巴细胞主动免疫治疗　①主动免疫前，行封闭抗体检测于孕前空腹状态下分别抽取双方的外周静脉血各2 ml，抗凝后分离血清，采用ELISA法测定封闭抗体，所用试剂产于美国莱姆德公司，由北京索奥生物科技有效公司提供，根据试剂使用说明书进行规范操作，并准确及时记录测定结果。若检查结果为阴性，则在免疫治疗4次后再抽外周血，采用同样的方法检测机体内封闭抗体。②在主动免疫治疗中，对患者和供者采用序列特异性引物PCR 行HLA-Ⅱ位点基因分型，若2位点以上相合，则需第三方供者，并检验双方血型。然后抽取供者外周血20 ml，抗凝后在无菌条件下分离并提取淋巴细胞，生理盐水洗涤，调整淋巴细胞浓度，并于患者前臂三角肌处行肌内或皮内注射，3周1次，4次为1个疗程，治疗期应避孕，1个疗程后复查封闭抗体。若封闭抗体呈阳性者，则可建议在3个月内受孕；若抗体仍呈阴性者，则继续淋巴细胞免疫治疗，待封闭抗体转阳后再受孕，连续治疗12周。

两组治疗后均行为期6个月的随访，准确记录随访中不良反应，并予及时有效处理。

1.4　观察指标及评定

比较两组治疗前后封闭抗体、T细胞亚群的变化，受孕后的妊娠成功率及不良反应发生率。

T细胞亚群的测定于治疗前后抽取患者2 ml的外周静脉血，采用产于Beckman Coulter公司的流式细胞仪测定CD4+、CD8+水平，然后计算CD4+/CD8+和CD16+CD56+，并准确记录。

妊娠成功率为治疗后妊娠成功例数在各组中所占比例，不良反应发生率为不良反应例数在各组中所占比例。

1.5　统计学方法

采用SPSS 18.0软件对数据进行分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用t检验，计数资料用百分率（%）表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1　两组治疗前后封闭抗体检测阳性率的比较

治疗前，经ELISA法测定其封闭抗体均为阴性；治疗1、2次后两组封闭抗体检测阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗3、4次后，两组阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1　两组治疗前后封闭抗体检测阳性率的比较［n（%）］

2.2　两组治疗前后T细胞亚群变化情况的比较

治疗前，两组T细胞亚群中CD4+、CD8+及CD4+/ CD8+和CD16+CD56+比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后，两组T细胞亚群均有变化，CD4+降低，且研究组CD4+水平远低于对照组（P＜0.05），CD8+升高，且研究组CD8+水平远高于对照组 （P＜0.05），CD4+/CD8+和CD16+CD56+均降低，且研究组CD4+/CD8+和CD16+CD56+水平均低于对照组（P＜0.05）（表2）。

表2　两组治疗前后T细胞亚群变化情况的比较（±s）

 

与治疗前比较，*P＜0.05

2.3　两组治疗后妊娠成功率的比较

研究组妊娠成功率为64.29%，高于对照组的42.86%，差异有统计学意义（P＜0.05）（表3）。

表3　两组治疗后妊娠成功率的比较

2.4　不良反应

在治疗过程中，两组均未出现荨麻疹、皮肤变态反应及肝炎、艾滋病、巨细胞病毒等不良反应情况。

复发性流产是临床上较难治的一种妇科疾病，病因种类较多且复杂，尚未明确。临床上认为复发性流产主要与免疫因素中的封闭抗体相关。多数学者研究证实，封闭抗体可抑制机体产生淋巴细胞反应，封闭母体淋巴细胞对滋养层细胞产生毒性反应，促进母体T细胞识别胎儿抗原抑制物，最大限度地保障妊娠成功率［6-9］。

在孕妇血清中，外周静脉血T淋巴细胞表面存在CD4+、CD8+和CD16+CD56+等抗原。临床上采用外源淋巴细胞主动免疫治疗，可刺激母体产生封闭抗体和淋巴细胞毒抗体等免疫反应，抑制母体免疫应答反应破坏胚胎的正常发育，保证孕妇顺利度过妊娠期。有学者指出，外源淋巴细胞作为一种刺激抗原，可刺激母体产生抗外源淋巴细胞，提高母体抗体的组织相容性，既支持复发性流产患者免疫因素的发病机制，又表明临床上采用主动免疫治疗复发性流产的有效性［10-12］。

相关学者研究指出，淋巴细胞主动免疫治疗可改善患者的细胞免疫功能，提高妊娠成功率，且患者治疗期及妊娠后新生儿的不良反应少［13-16］。本研究结果显示，采用淋巴细胞主动免疫治疗的研究组封闭抗体检测阳性率和免疫功能均优于对照组，妊娠成功率远高于对照组，未出现治疗期不良反应，与上述研究结果趋于一致。

综上所述，淋巴细胞主动免疫治疗不明原因复发性流产的临床效果显著，可改善患者细胞免疫功能，提高妊娠成功率，且安全有效，值得推广。

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Effect of lym phocyte active immunotherapy on blocking antibody in unexp lained recurrent spontaneous abortion

WANG Dong-yan1LIMan-lan2HUANG He3
1.Department of Obstetrics，the Third People＇s Hospital of Dongguan City in Guangdong Province，Dongguan　523000，China；2.Operating Room，the Third People＇s Hospital of Dongguan City in Guangdong Province，Dongguan　523000，China；3.Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery，the Third People＇s Hospital of Dongguan City in Guangdong Province，Dongguan　523000，China

［Abstract］Objective To discuss the effect of lymphocyte active immunotherapy on blocking antibody in unexplained recurrent spontaneous abortion.Methods 112 patients with unexplained recurrent spontaneous abortion treated in our hospital from May 2014 to November 2015 were selected as the research subjects and divided into study group and control group with using single method，with 56 cases in each group.Patients in the control group were given routine treatment，and patients in the study group were given lymphocyte active immunotherapy，treatment effects were compared in two groups.Results After the treatment of 3 times，4 times，positive rate of blocking antibody in the study group was higher than that in the control group（P＜0.05），and CD4+，CD4+/CD8+，CD16+CD56+decreased，while CD8+increased in two groups，which weremore obvious in the study group than that in the control group　（P＜0.05）.The success rate of pregnancy was 64.29%in the study group，higher than 42.68%in the control group（P＜0.05）.Conclusion Clinical treatment effect of lymphocyte active immunotherapy is significant in the treatment of blocking antibody in unexplained recurrent spontaneous abortion，which can effectively improve positive rate of blocking antibody.It isworthy of promotion. 
［Key words］Active immunization；Recurrent spontaneous abortion；Blocking antibody；T cell subsets

［中图分类号］R714.21

［文献标识码］A

［文章编号］1674-4721（2016）09（c）-0085-03

（收稿日期：2016-07-26本文编辑：方菊花）

［作者简介］王东艳（1980-），女，黑龙江牡丹江人，本科，主治医师，研究方向：妇产科学