刘　剑1　闫建坤2

1.内蒙古自治区红十字会包头朝聚眼科医院药械科，内蒙古包头　014060；2.包头市卫生学校基础科，内蒙古包头　014030

［摘要］目的建立0.01%硫酸阿托品滴眼液的质量标准。方法采用高效液相色谱法测定处方中硫酸阿托品的含量。结果硫酸阿托品检测浓度线性范围为10～60μg/ml（r=0.9999），平均回收率为100.4%（RSD=0.3%，n=9）。结论采用高效液相色谱法，操作简单、准确可靠、重复性好，可作为0.01%硫酸阿托品滴眼液的质量控制方法。

［关键词］硫酸阿托品；滴眼液；质量标准；高效液相色谱法

我院在包头市昆都仑区、青山区、东河区开展了青少年眼健康筛查工作，为期80余天，筛查人数共计137 680人。其中小学组近视发病率达24.76%，初中组近视发病率达50.7%，高中组近视发病率达55.87%。出现近视的因素很多，除部分因父母有高度近视的遗传外，其中大部分是因为青少年参加各种辅导班的学习，加上日常生活中的电脑、手机，青少年用眼负荷过早增大，近视眼成为发病率最高的眼病之一，成为社会关注的焦点。治疗近视眼除验光配镜、物理治疗外，还可以选用药物治疗，硫酸阿托品对眼的作用与毛果芸香碱相反，阻断睫状肌M受体，使睫状肌松弛，解除眼调节肌的调节痉挛，对治疗近视有较好的作用，特别对低度近视疗效显著［1-5］，也可以用于预防青少年近视。由于1%硫酸阿托品扩瞳作用强，扩瞳后恢复较慢，一般患者不愿长时间使用。我院制剂室配制的0.01%硫酸阿托品滴眼液［6-9］阿托品含量低，对睫状肌麻痹作用弱，视近物不模糊，且对瞳孔无散大。本实验采用高效液相色谱法对我院配制的硫酸阿托品滴眼液进行含量测定［11-13］。

1.1　仪器

高效液相色谱仪（日本岛津），色谱柱：Wonda Sil-C18（250mm×4.6mm，5μm）；渗透压测定仪（天津市天大天发科技有限公司，型号：STY-1A）。

1.2　试药

0.01　%硫酸阿托品滴眼液由内蒙古自治区红十字会包头朝聚眼科医院制剂室按“1.3”处方和制备方法生产的 （批号：20160306、20160307、20160308）；硫酸阿托品对照品购自中国药品生物制品检定所：规格：200mg/支，批号：100040-201312，硫酸阿托品（河南普瑞制药有限公司，批号：20150107）；色谱纯乙腈，水为我院制剂室生产的注射用水，其余试剂均为分析纯。

1.3　处方与制备

1.3.1　处方 硫酸阿托品0.10 g、氯化钠9.46 g、羟苯乙酯0.30 g，注射用水加至1000ml。

1.3.2　制备　取适量注射用水，加热至80℃，加入称量好的羟苯乙酯溶解，随加随搅拌，再将氯化钠加入，搅拌溶解后，放冷，再加入硫酸阿托品溶解，加注射用水至1000 ml，将搅拌器转速调至4000转/min，搅拌20 min混匀，调节pH值4.0～6.0，做中间产品检验，中检合格后，用0.45μm的微孔滤膜进行两次过滤，100℃流通蒸汽灭菌30 min，无菌分装于6 ml眼药瓶中，贴签、包装，即得。

2.1　性状

取本品在灯检台下检测，均为无色澄明溶液。

2.2　鉴别

精密量取50ml硫酸阿托品滴眼液，置水浴上蒸干，残渣显托烷生物碱类的鉴别反应（中国药典2015版四部通则0301），批号为20160306、20160307、2016 0308的硫酸阿托品滴眼液均显深紫色。

2.3　检查

参照滴眼剂项下有关的各项规定（中国药典2015版四部制剂通则0105），对硫酸阿托品滴眼液（批号20160306、20160307、20160308）进行了pH值、可见异物、渗透压、装量、无菌等项目的检查。

2.3.1　 pH值 取硫酸阿托品滴眼液测定pH值（中国药典2015版四部通则0631），结果三批样品pH值为4.9、5.3、5.1，均在4.5～5.5范围内，考虑到人体的耐受性和生产的可控性，将本品的pH值定为：4.0～6.0。

2.3.2　可见异物　取硫酸阿托品滴眼液检查可见异物（中国药典2015年版四部通则0904），结果均符合规定。

2.3.3　装量 取硫酸阿托品滴眼液检查装量（中国药典2015年版四部通则0942），批号为20160306、20160307、20160308的装量分别为6.1、6.0、6.1ml，均符合规定。

2.3.4　渗透压　取硫酸阿托品滴眼液检查渗透压摩尔浓度（中国药典2015年版四部通则0632），在供试品溶液测量前要进行校准仪器零点和校准量程，首先取适量我院制剂室生产的新沸放冷纯化水，调节仪器零点，然后选择两种标准溶液（供试品溶液的渗透压摩尔浓度应介于两者之间）校正仪器，取干净的一次性测定管及干净的取样头，用移液器吸取100μl纯化水和标准液校正，再测定供试品溶液的渗透压摩尔浓度，批号为20160306、20160307、20160308的滴眼液渗透压摩尔浓度为292、292、294mOsmol/kg，均符合规定。

2.3.5　无菌　取硫酸阿托品滴眼液按薄膜过滤法无菌检查（中国药典2015年版四部通则1101），均符合规定。

2.4　含量测定

2.4.1　色谱条件 色谱柱：Wonda Sil-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（含0.1%三乙胺，用磷酸调pH=5.8）（20∶80）；流速：1 ml/min；常温操作；进样量：20μl；检测波长：210 nm。

2.4.2　对照品溶液制备　精密称取硫酸阿托品对照品12.5mg，置于250ml容量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4.3　供试品溶液制备 精密量取样品25ml，置于50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4.4　线性关系考察　精密称取硫酸阿托品对照品25.0 mg，置于25 m l容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。分别精密量取硫酸阿托品对照品贮备液1、2、3、4、5、6ml，置于100m l容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，各取20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（A）对其浓度（C）进行线性回归，得回归方程A=14334+33928C（r=0.9999）。结果，硫酸阿托品检测浓度在10～60μl/ml范围内线性关系良好。

2.4.5　精密度试验　精密吸取20μl对照品溶液注入液相色谱仪测定，重复进样6次，结果表明本实验采用高效液相色谱法精密度良好RSD=0.83%。

2.4.6　重现性试验　取同一批样品，按“2.4.4”项下色谱条件连续进样6次，分别记录峰面积，结果RSD= 0.85%。

2.4.7　稳定性试验［14-15］样品溶液放置8 h，精密吸取20μl供试品溶液注入液相色谱仪进行测定。结果表明，本法在8 h内测定方法稳定。

2.4.8　回收率试验　精密称取对照品约16、20、24 mg，按1.3.1处方比例加入配好的羟苯乙酯氯化钠溶液，配制成低、中、高（80%、100%、120%）系列浓度模拟样品溶液。各取20μl 3份进样，测定含量，计算回收率，结果详见表1。

表1　回收率试验结果（n=9）

2.4.9　样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图（图l）。按外标法计算样品浓度，并将结果与1.0266相乘。3批样品标示量分别为100.3%、100.4%、100.5%，以硫酸阿托品（C17H23NO3）2·H2SO4·H2O应为标示量的90.0%～110.0%。

 

图1　高效液相色谱

我院制剂室配制的低浓度硫酸阿托品滴眼液含量低，经多次实验，实验数据表明采用高效液相色谱法精密度高，线性关系好，回收率满意，不需要分离可以直接测定，同时，方法简便、灵敏、准确、可行，由于硫酸阿托品对照品需要干燥至恒重，而滴眼液含量是以水合物来标示，故结果计算时需乘系数1.0266。

［1］黄建华.微量阿托品滴眼液治疗157例近视眼的临床观察［J］.广西医学，2002，24（6）：938-939.

［2］童蟾素.阿托品长期间断性滴眼对青少年近视治疗观察［J］.实用眼科杂志，1988，6（6）：37-39.

［3］贾艳合，陈会云，陈静，等.1933名中学生近视发生率及影响因素现况调查［J］.现代预防医学，2007，34（20）：3825-3827.

［4］Shih YF，Chen CH，Chou AC，et al.Effects of different concentrations of atropine on controllingmyopia inmyopic children［J］.JOcul Pharmacol Ther，1999，15（1）：85-90.

［5］Morgan I，Megaw P.Using natural STOP growth signals to prevent excessive axial elongation and the development of myopia［J］.Ann Acad Med Singapore，2004，33（1）：16-20.

［6］Fan DS，Lam DS，Chan CK，et al.Topical atropine in retardingmyopic progression and axial length growth in children with moderate to severemyopia：a pilot study［J］.Jpn JOphthalmol，2007，51（1）：27-33.

［7］王书杰，赵家祥，王丽萍，等.浅谈医疗机构制剂的发展方向［J］.解放军药学学报，2007，19（5）：682-683.

［8］常万云，李中华.临床药师查房对降低中药制剂不良反应价值［J］.当代医学，2016，22（7）：153-154.

［9］卫生部药政局.中国医院制剂规范［M］.2版.北京：中国医药科技出版社，1995：182.

［10］Tyira T，Pohloudek-Fabini R.Analysis and stability of atropine sulfate and sco-polamine hydromide［J］.Pharmazie，2006，38（8）：520-521.

［11］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2015：1335.

［12］李锦棠.HPLC法测定硫酸阿托品滴眼液的含量［J］.中国药师，2006，9（6）：528-529.

［13］白若琬，朱建东，潘继飞，等.HPLC测定硫酸阿托品滴眼液的含量和有关物质［J］.食品与药品，2009，18（9）：175-176.

［14］孙兆荣，武夏明，高培平，等.硫酸阿托品滴眼剂稳定性的考察［J］.中国医院药学杂志，2008，21（10）：429-430.

［15］王明仲，吕志勇，汪运礼，等.反相高效液相色谱法考察硫酸阿托品在输液中的稳定性［J］.中国医院药学杂志，2008，13（2）：592-593.

Quality standard of 0.01%atropine sulfate eye drops

LIU Jian1YAN Jian-kun2
1.Drug and Equipment Section，Baotou Chaoju Ophthalmic Hospital of Inner Mongolia Red Cross，Baotou　014060，China；2.Basic section，Medical Insititute of Technology in Baotou City，Baotou　014030，China

［Abstract］Objective To establish the quality standard for 0.01%atropine sulfate eye drops.Methods Atropine sulfate content in the formulation was quantitatively determined by HPLC tometry.Results The linear range of atropine sulfate was l0 to 60μg/ml（r=0.9999）.The average recovery rate was l00.4%（RSD=0.3%，n=9）.Conclusion By HPLC tometry，this is a easy，precise and repeatable method.It can be used as a quality control for the 0.01%atropine sulfate eye drops.

［Key words］Atropine sulfate；Eye drops；Quality standard；HPLC

［中图分类号］R927.1

［文献标识码］A

［文章编号］1674-4721（2016）09（c）-0126-03

（收稿日期：2015-07-01本文编辑：王红双）