风湿关节炎片、根痛平胶囊中乳香及非法添加松香的快速检验
曲艳丽　刻治民　杨建龙
长春市食品药品检验中心，长春　130012
［摘要］目的建立风湿关节炎片、根痛平胶囊中乳香药材及非法添加松香的快速鉴别方法。　方法采用薄层色谱法，乙醇超声提取样品，以乳香药材及11-羰基-β-乙酰乳香酸、松香酸为对照，点于硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-正庚烷-无水甲酸（8∶2∶1∶0.3）为展开剂，置紫外线灯（254 nm）下检视。　结果使用建立的快速鉴别方法检验3个厂家6批次风湿关节炎片，3批未检出乳香药材及11-羰基-β-乙酰乳香酸；检验2个厂家9批次根痛平胶囊，7批检出非法添加松香。　结论该法专属性强，操作简便，适用于以上两种中成药中同时进行乳香及非法添加松香的快速筛查。
［关键词］快速检验；风湿关节炎片；根痛平胶囊；乳香；11-羰基-β-乙酰乳香酸；松香；松香酸
风湿关节炎片具有祛风燥湿、活血止痛之功效，用于风湿痹痛、腰腿疼痛、风湿性关节炎等症［1］。根痛平胶囊具有活血、通络、止痛之功效，用于风寒阻络所致颈、腰椎病，症见颈肩疼痛、活动受限、上肢麻木［2］。两者处方中均有乳香这味中药。乳香为橄榄科植物乳香树 Boswellia carterii Birdw及同属植物 Boswellia bhaurdajiana Birdw树皮渗出的树脂［3］207，具有抗感染、抗肿瘤、抗哮喘、抗氧化等药理活性［4］，其有效成分为11-羰基-β-乙酰乳香酸。分为索马里乳香和埃塞俄比亚乳香，多为进口，较为贵重。近年来，中药材市场中乳香质量参差不齐，屡见假劣乳香［5］。因此，很多厂家在生产以乳香为原料的中成药中偷工减料，少投料，不投料，或以次充好，使用掺有松香的乳香，而松香对人体有害。采用本文薄层色谱方法同时鉴别风湿关节炎片和根痛平胶囊中乳香及是否非法添加松香，实验操作比高效液相色谱法简便，不需要使用价格昂贵的二极管阵列检测器，结果比显微鉴别法可靠，适用于基层单位快速筛查。
1　仪器与试药
1.1　仪器
GR-202电子天平（日本A/D公司），SLD-Ⅰ型薄层色谱摄影仪（天津思利达色谱技术开发公司），Agi1ent1260高效液相色谱仪（二极管阵列检测器）（美国Agi1ent公司），Agi1ent 6430液质联用仪（美国Agi-1ent公司），硅胶GF254预制板 （青岛海洋化工厂分厂，青岛海浪化工厂，烟台市化学工业研究所）。
1.2　试药
乳香对照药材（批号：120970-201305），11-羰基-β-乙酰乳香酸（AKBA）对照品（批号：111760-201502），以上均来源于中国食品药品检定研究院。松香酸对照试剂（批号：00001003-BTG），来源于Chromadex公司。风湿关节炎片、根痛平胶囊为市售。乙醇、乙酸乙酯、甲苯、无水甲酸、正庚烷均为分析纯。
2　方法
2.1　对照品溶液的制备
取11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品、松香酸对照试剂适量，分别加乙醇制成每1毫升含1 mg的溶液，即得。
2.2　供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液的制备
取风湿关节炎片10片，根痛平胶囊5粒，分别加乙醇20 m1，超声处理20 min，滤过，蒸干，残渣加无水乙醇2 m1使之溶解，作为供试品溶液。另取乳香对照药材0.2 g，加乙醇10 m1，同法制成对照药材溶液。再取原料药材，按处方分别制得缺乳香的风湿关节炎片、根痛平胶囊阴性样品，分别取以上阴性样品各1 g，按上述方法分别制得阴性对照溶液。
2.3　薄层色谱方法
取供试品溶液5 μ1，对照药材溶液2 μ1，对照品及对照试剂溶液2 μ1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-正庚烷-无水甲酸（8∶2∶1∶0.3）［6］为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外线灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与乳香对照药材相应的位置上应显相同的主斑点，在与11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品色谱相应的位置上应显相同的斑点，在与松香酸对照试剂色谱相应的位置上应不显相同的斑点。
2.4　薄层色谱实验结果
使用以上方法检验3个厂家6批次风湿关节炎片，3批未检出乳香药材及11-羰基-β-乙酰乳香酸（图1中样品1、2、3），占50%；检验2个厂家9批次根痛平胶囊，7批检出松香酸 （图2中样品4、8～13），占78%。阴性样品色谱无干扰（图1、图2）。

 
图1　风湿关节炎片薄层色谱图
1为阴性对照，2、3、7～10为风湿关节炎片样品1～6，4为乳香对照药材，5为AKBA对照品，6为松香酸对照品

 
图2　根痛平胶囊薄层色谱图
1为阴性对照，2～4、8～13为根痛平胶囊样品1～9，5为乳香对照药材，6为AKBA对照品，7为松香酸对照品
3　方法学考察
3.1　薄层色谱提取方法及溶剂的选择
参考有关文献，样品提取分别选择了乙醚［3］691、乙醇作溶剂［3］518，加热回流提取［7］及超声提取［8］，结果表明，乙醇提取出的样品有效成分较多，超声提取方便快捷、提取效果较好。
3.2　展开剂的选择
共考察了五种展开剂，展开剂1：环己烷-乙酸乙酯-甲酸（12∶5∶0.5）［9］；展开剂2：正己烷-丙酮-冰醋酸（7∶3∶0.1）［10］；展开剂3：石油醚（60～90℃）-环己烷-乙酸乙酯-甲酸（2∶6∶3∶0.5）［11］；展开剂4：环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（10∶2∶0.2）［12］；展开剂5：甲苯-乙酸乙酯-正庚烷-无水甲酸（8∶2∶1∶0.3），使用前四种展开剂，风湿关节炎片、根痛平胶囊的薄层色谱图中，阴性样品在与乳香对照药材或松香酸对照试剂色谱相应位置处有背景干扰，斑点不能很好分离，使用第五种展开剂，斑点分离清晰。
3.3　薄层色谱法检出限
精密称取11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品0.011 60 g（纯度为99.3%），用乙醇定容至10 m1容量瓶中，分别点样1、2、3、4 μ1，斑点直径约3 mm，结果表明4 μ1的点样量接近检出限，检出限为0.461 μg。精密称取松香酸对照试剂0.002 32 g，用乙醇定容至5 m1容量瓶中，分别点样2、3、4、5 μ1，斑点直径约3 mm，结果表明3 μ1的点样量接近检出限，检出限为1.69 μg。
3.4　稳定性考察
按照2.1、2.2项下制备的对照品及对照药材、供试品溶液，分别放置0、2、4 d后，按照2.3项下实验，薄层色谱斑点清晰，检视结果没有明显差异，说明此方法稳定性较好。
3.5　耐用性考察
使用本方法分别在不同温度：10、20、30℃，不同湿度：32%、58%、72%下进行实验，薄层色谱斑点清晰，分离较好。结果表明，本方法适用于南北方不同的温湿度条件下。
分别使用青岛海洋化工厂分厂、青岛海浪化工厂、烟台市化学工业研究所生产的硅胶GF254预制板进行实验，结果表明，不同厂家生产的硅胶GF254预制板的薄层色谱斑点清晰，实验结果相同，本方法适用性较强。
4　结果分析
3批风湿关节炎片未检出乳香药材及11-羰基-β-乙酰乳香酸，可能生产厂家未投料或少投料；7批根痛平胶囊检出松香酸，说明生产厂家投料的乳香质量不好，掺有较多的松香。
5　高效液相色谱法及液质联用方法验证
5.1　高效液相色谱法验证［13］
5.1.1　色谱条件　仪器：Agi1ent1260高效液相色谱仪（二极管阵列检测器）；色谱柱：Dikma C18柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%甲酸（89∶11）；检测波长：241 nm；柱温：25℃；流速：1.0 m1/min。
5.1.2　对照品溶液的制备 精密称取松香酸对照试剂约10 mg，加乙醇制成每1毫升含10 μg的溶液。另精密吸取11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品约10 mg，加乙醇制成每1毫升含4 μg的溶液。
5.1.3　供试品溶液的制备 风湿关节炎片除去包衣，取0.2 g；根痛平胶囊取内容物0.2 g，加乙醇20 m1，超声处理20 min，放至室温，滤过，取续滤液，即得。
5.1.4　测定法 取供试品溶液、松香酸对照试剂溶液和11-羰基-β-乙酰乳香酸参照溶液各10 μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图。
5.1.5　检验结果 共检验3个厂家6批次风湿关节炎片，其中3批未检出11-羰基-β-乙酰乳香酸色谱峰，也未检出松香酸色谱峰；检验2个厂家9批次根痛平胶囊，均检出11-羰基-β-乙酰乳香酸色谱峰，但7批检出松香酸色谱峰。上述检验结果与薄层色谱的检验结果一致。
5.2　液质联用方法验证（验证松香酸）
5.2.1　实验条件　仪器：Agi1ent 6430液质联用仪（美国Agi1ent公司）；流动相：乙腈-0.1%甲酸（80∶20）；色谱柱：ZORBAX SB-C18柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）；柱温：30℃；流速：0.2 m1/min；进样量：0.5 μ1；毛细管出口电压：120 V；氮气流速：6 L/min；干燥气温度：350℃；离子化模式：ESI+；母离子：303 m/z。
5.2.2　检验结果 共检验7批根痛平胶囊（高效液相色谱法检验结果含有松香酸的7批样品），结果表明，这7批样品的质谱图中，主要碎片离子质荷比与松香酸对照试剂相同，说明均含有非法添加的松香。上述检验结果与薄层色谱的检验结果一致。
6　讨论
曾经尝试使用硅胶G板，喷以10%硫酸乙醇溶液［12］或茴香醛试液［6］，薄层色谱检视效果不好，与上述显色剂专属性不强有关。
松香酸对照试剂的荧光效果随着时间的推移变弱，建议在展开结束后20 min观察，薄层检视效果较好。
薄层色谱法的检出限低于高效液相色谱法，但薄层色谱法检验快速、方便，适用于药厂、基层药品检验机构等对风湿关节炎片、根痛平胶囊样品的初步筛查。
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［13］YBZ09832 006-2012Z-5.国家药品标准［S］.
Fast insPection of Frankincense and Illegally Adulterated ColoPhony in Fengshi Guanjieyan Tablets and GentongPing CaPsules
QU Yan-liLIU Zhi-min　YANG Jian-long
Changchun City Food and Drug Contro1 Center，Changchun　130012，China
［Abstract］Objective To create the rapid differentia1 method to detect Frankincense and I11ega11y Adu1terated Co1ophony in Fengshi Guanjieyan Tab1ets and Gentongping Capsu1e.Methods By thin-1ayer chromatography，samp1e was extracted by ethano1 u1trasonic process.Frankincense，acety1-11-keto-beta-boswe11ic，and abietic acid as contro1，si1ica ge1 GF254 was put in thin 1ayer p1ate and to1uene-ethy1 acetate-n-heptane-anhydrous formic acid（8∶2∶1∶0.3）was se1ected as deve1oping so1vent，and fina11y detected under u1travio1et 1amp in 254 nm.Results By this rapid differentia1 method，among 6 batches of Fengshi Guanjieyan Tab1ets from 3 factories，Frankincense and acety1-11-keto-beta-boswe11ic were not detected in 3 batches；Among 9 batches of Gentongping Capsu1es from 2 manufacturers，7 batches were detected with I11ega11y Adu1terated Co1ophony.Conclusion The detection method is with high specificity and easy to be performed，which is adaptab1e for rapid detection of Frankincense and I11ega11y Adu1terated Co1ophony in the above mentioned Chinese patent medicines simu1taneous1y.
［Key words］Rapid detection；Fengshi Guanjieyan Tab1ets；Gentongping Capsu1e；Frankincense；Acety1-11-keto-betaboswe11ic；Co1ophony；Abietic acid
［中图分类号］R927.1
［文献标识码］A
［文章编号］1674-4721（2016）05（b）-0004-03
［作者简介］曲艳丽（1976-），女，本科，副主任药师，主要从事中成药及中药材的检验及研究工作
（收稿日期：2016-01-19本文编辑：方菊花）