氧氟沙星胶囊溶出度测定方法的改进
秦 松 李 娜
河南省焦作市食品药品检验所，河南焦作 454000
［摘要］目的探讨氧氟沙星胶囊溶出度测定方法的改进。 方法采用HPLC法测定氧氟沙星胶囊溶出度，同时将改进方法的测定结果与药典方法进行比较。 结果 浓度在0.022～0.22 mg/m1与峰面积呈良好的线性关系 （r= 0.9999），回收率为99.51%，RSD为0.48%（n=6）。 结论改进后的方法更准确、更精密、更科学且专属性强，结果较药典方法测得的结果更满意。
［关键词］氧氟沙星胶囊；高效液相色谱法；紫外-可见分光光度法；溶出度
氧氟沙星（of1oxacin）属于第三代喹诺酮类的合成抗菌药物，具有抗菌谱广、抗菌效力强、口服吸收好、生物利用度高、半衰期长、毒副作用轻等优点，因此其临床效果较好，被广泛用于泌尿系统、呼吸系统等细菌感染症的治疗［1_3］。其生产厂家较多，价格质量差异较大，而药物的溶出度情况直接影响药物在体内的吸收和利用，是衡量固体制剂质量优劣的一个重要检查项目［4_5］。氧氟沙星胶囊及其溶出度检查，在《中国药典》2005年版二部中首次收载并对其溶出度作出具体规定，目前其执行的是《中国药典》2015年版二部收载的检查法和有关规定，不过经十余年标准换版，其溶出度的检查和测定方法、限度要求均没有变化［6_7］。经过近几年对氧氟沙星胶囊溶出度检验结果的比对，发现用现行的检测方法（紫外分光光度法）测得的溶出度结果高于其含量值非常普遍，甚至会出现超出很多的不合理现象。经过多次试验研究发现，这与检测方法有关，现行检测方法不可避免地受到胶囊壳及辅料等的影响，增大了误差。为避免以上的干扰和检测误差，本文改用反相高效液相色谱法检测，试验结果证明此方法科学、准确、合理。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agi1ent 1260型高效液相色谱仪（Agi1ent）；CPA225D型电子分析天平（Sartorius）；UV_2550型紫外_可见分光光度计 （岛津）；RCZ_8M型溶出试验仪（天津天大天发）。
1.2 试药
氧氟沙星胶囊（为0.1 g规格的市售药品，6个批次分别为：山西某制药有限公司，批号为150502；浙江某制药有限公司，批号为15110402；上海某药业有限公司，批号为150302；上海某制药有限公司，批号为541001；河南某药业股份有限公司，批号为150410060；四川某药业股份有限公司，批号为B150701114）；磷酸、醋酸铵、高氯酸钠、盐酸为分析纯；乙腈为一级色谱纯；水为超纯水。氧氟沙星对照品批号：130454_201206；含量：99.5%；来源：中国食品药品检定研究院。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Innovation Extreme C18柱（5 μm，25 cm× 4.6 mm）；流动相：乙腈_醋酸铵高氯酸钠溶液（取醋酸铵4.0 g和高氯酸钠7.0 g，加水1300 m1使之溶解，用磷酸调节pH值至2.2）（15∶85）；检测波长：294 nm；流速：1.0 m1/min；柱温：35℃；进样量：10 μ1。
2.2 溶液制备
供试品溶液：取1粒氧氟沙星胶囊，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释到900 m1，摇匀，取0.45 μm滤膜滤过后的续滤液即得。对照品溶液：在200 m1量瓶中精密称入氧氟沙星对照品22.11 mg，用盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，摇匀即得（0.1100 mg/m1）。阴性对照溶液：按氧氟沙星胶囊的制备工艺处方比例取空胶囊壳及辅料，照供试品溶液的方法制备即得。
2.3 系统适用性试验
按照2.1的色谱条件，取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液分别进样，记录图谱。在14.31 min的保留时间时，对照品溶液和供试品溶液均有峰形良好的氧氟沙星色谱峰，而空白溶液无干扰吸收峰出现（图1），表明本测定方法不受空胶囊壳和辅料干扰。
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图1 系统适用性试验图谱
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察 按照2.1色谱条件，精密吸取2.2中制备的对照品溶液2、5、10、15、20 μ1，分别进样，记录图谱，计算峰面积。横坐标X为分别折算的10 μ1进样量时对照品溶液浓度（mg/m1），纵坐标Y为对照品色谱峰面积，线性回归后得方程为Y= 49091.666X+76.335（r=0.9999），表明以10 μ1为进样量时，浓度范围在0.022～0.22 mg/m1与峰面积具有良好的线性关系。
2.4.2 精密度试验 取2.2中制备的对照品溶液，按2.1的色谱条件连续进样6次，采集记录色谱图，测得的氧氟沙星峰面积结果的RSD为0.35%（n=6），说明该方法具有良好的精密度。
2.4.3 稳定性试验 取2.2中制备的供试品溶液，分别在制备结束后0、4、8、12、16 h时进样，记录色谱图，测得氧氟沙星峰面积RSD为0.56%（n=5），说明供试品溶液在16 h内具有良好的稳定性。
2.4.4 回收率考察 在100 m1量瓶中精密称入氧氟沙星对照品22.11 mg，用盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，摇匀后作为对照品贮备液（0.2200 mg/m1）。精密量取贮备液1、2、3 m1各2份分别置6个10 m1量瓶中，每个量瓶中再精密加入5 m1 2.2中制备的已测得质量浓度的供试品溶液（0.1079 mg/m1），然后用盐酸溶液（9→1000）对每个量瓶稀释至刻度并摇匀。对上述6个量瓶中的溶液按2.1的色谱条件分别试验，计算含量和回收率（表1）。
表1 加样回收率试验结果（n=6）
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2.5 溶出度测定
取6批样品，按《中国药典》2015年版二部P1139氧氟沙星胶囊溶出度检查的方法操作和测定溶出度，再按本文的改进方法（_HPLC法）进行测定。表2数据显示，改进的方法更科学、更合理，应该用本文方法替代目前现行的检测方法。
表2 两种方法溶出度测定结果的比较
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3 讨论
经查验，关于氧氟沙星的高效液相色谱法测定的相关研究报道及氧氟沙星的现行标准中，流动相的设计方案较多［8_13］，笔者曾对其中的乙腈_醋酸铵高氯酸钠溶液、乙腈_枸橼酸溶液_三乙胺、乙腈_枸橼酸溶液_醋酸铵溶液_磷酸溶液、甲醇_磷酸二氢钠溶液等色谱系统进行试验，由于氧氟沙星是两性化合物，脱羧后偏碱性，用C18色谱柱分离时，因填充物中未硅烷化的硅羟基对碱性基团有吸附作用，故在流动相中加入醋酸铵后可以消除吸附，使峰形锐窄［14］。所以在流动相组成和比例的选择上，选用和现行氧氟沙星含量测定一致的流动相，不但使检测色谱峰的拖尾因子、分离度都达到满意的结果，而且使溶出度与含量的检测方法保持一致，使其在日常检测工作中的操作更方便。
在溶出介质的选择上，虽然本文中选择了现行氧氟沙星胶囊溶出度检查的溶出介质［盐酸溶液（9→1000）］，但此介质的pH值接近1，不符合人体胃液环境，胶囊一放入则马上破壳溶解；而氧氟沙星在0.1 mo1/L的盐酸溶液中是溶解的，所以在此介质中检查溶出情况不太科学，也不利于客观评价胶囊的质量。在此，建议将溶出介质更换为pH4.0醋酸缓冲液，并做进一步的深入试验和研究分析。对于此溶出介质的研究和更换，诺氟沙星胶囊（氧氟沙星胶囊的同类药品）的国家药品标准中就有先例，其溶出介质已经自《中国药典》2010年版二部中用pH4.0醋酸缓冲液更换了《中国药典》2005年版二部中的盐酸溶液（9→1000），对此也有相应的研究报道［15_17］。
溶出度检查作为制剂质量控制手段也越来越被重视，而厂家的工艺、辅料、胶囊壳颜色、可能存在的杂质等的不同都会影响紫外吸收，相关研究也表明，在采用UV法测定胶囊剂的溶出度时，应对空心胶囊产生的干扰予以重视［18］，所以其检查方法有必要进行更新和提高，建议采用本文中HPLC法代替现行标准的紫外分光光度法测定氧氟沙星胶囊溶出度，从而提高其测定结果的准确性，加强其内在质量的控制，保证其行业产品的质量。
［参考文献］
［1］曾光，符业阳，梁智江，等.几种氧氟沙星片及胶囊体外溶出度的检测分析［J］.广州医药，1997，28（2）：57-58.
［2］莫海玲.氧氟沙星胶囊剂与片剂溶出度考察［J］.广西中医学院学报，2002，5（1）：40-42.
［3］李莉君.紫外分光法测定氧氟沙星制剂体外溶出度［J］.医药论坛杂志，2003，24（12）：37-39.
［4］杨廉平，姚强，张新平.从质量标准的角度探析中国药品安全问题［J］.中国社会医学杂志，2010，27（3）：129-131.
［5］秦松，张蓓.改进西咪替丁胶囊溶出度的测定方法［J］.中国当代医药，2016，23（3）：83-85.
［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［M］.北京：化学工业出版社，2005：606.
［7］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2015：1139.
［8］柯德志，张智荣.氧氟沙星注射液含量测定方法的验证［J］.现代医药卫生，2004，20（11）：1028-1029.
［9］熊斌，林桂如.HPLC法测定氧氟沙星的含量［J］.广东药学，2004，14（4）：31-32.
［10］关日晴，饶春意.HPLC法测定氧氟沙星栓剂的含量［J］.广东药学，2004，14（5）：15-16.
［11］付晓航.高效液相色谱法测定氧氟沙星胶囊中氧氟沙星的含量［J］.化学分析计量，2005，14（4）：28-30.
［12］龚淼.HPLC法测定氧氟沙星滴耳液的含量［J］.中国实用医药，2009，21（5）：163-164.
［13］陈格.氧氟沙星片淋洗水的检测方法研究［J］.海峡药学，2005，14（4）：71-72.
［14］吕冀，苏玉永，陈华庭.高效液相色谱法测定氧氟沙星凝胶的含量及有关物质［J］.中国医院药学杂志，2007，27（5）：690-691.
［15］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［M］.北京：化学工业出版社，2005：642.
［16］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：870.
［17］陆娟.诺氟沙星胶囊在不同介质中的体外溶出度比较［J］.中国医药指南，2012，10（9）：400-401.
［18］徐燕，杨蕾，刘峰，等.空心胶囊对溶出度测定的影响［J］.四川生理科学杂志，2008，30（3）：118-119.
Improvement on dissolution test of ofloxacin capsule
QIN Song LI Na
Jiaozuo Institute for Contro1 of Food and Drug in Henan Province，Jiaozuo 454000，China
Jiaozuo Institute for Contro1 of Food and Drug in Henan Province，Jiaozuo 454000，China
［Abstract］Objective To discuss the improvement on disso1ution test of of1oxacin capsu1e.Methods The disso1ution of of1oxacin capsu1e was tested by HPLC and the test resu1t of improved method was compared with pharmacopoeia method.Results There was favourab1e 1inear re1ation between concentration and peak area in the concentration range of 0.022_0.22 mg/m1（r=0.9999），recovery rate=99.51%，RSD=0.48%（n=6）.Conclusion The improved method is more accurate，precise and scientific with high specificity.The test resu1t of improved method is more satisfactory than the resu1t of pharmacopoeia method.
［Key words］Of1oxacin capsu1e；HPLC；UV-VIS spectrophotometer；Disso1ution rate
［中图分类号］R927.2［文献标识码］A
［文章编号］1674-4721（2016）04（c）-0012-03
［作者简介］秦松（1981-），男，河南省辉县市人，本科，药理室主任，主管药师，擅长各类药物分析和微生物检验，2011年被评为“河南省食品药品监管系统优秀检验能手”
（收稿日期：2016-02-13 本文编辑：王红双）