不同产地石菖蒲中丁香酚含量的比较
肖冰梅1　李　冬1　杨思宇1　陈建荣2▲
1.湖南中医药大学药学院，长沙　410208；2.长沙学院，长沙　410022
［摘要］目的比较不同产地石菖蒲中丁香酚的含量，从中筛选出较优种质资源，为建立菖蒲属种质资源快繁体系提供科学依据。 方法采用石油醚冷浸法提取样品，以丁香酚为对照品，进行薄层色谱鉴定，并在270 nm处用紫外分光光度法测定其含量。　结果长沙县产石菖蒲中丁香酚平均含量为26.99 μg/m1，宁乡县产的为14.49 μg/m1。结论长沙县产的石菖蒲中丁香酚含量高于宁乡县产。
［关键词］石菖蒲；丁香酚；冷浸法；紫外分光光度法；薄层色谱法
石菖蒲是中医常用的芳香开窍药，有化湿开胃、开窍豁痰、醒神益智的功效。临床广泛用于癫痫、痰厥、热病神昏、健忘、中风失语、耳鸣、阿尔茨海默病等的治疗。据研究，石菖蒲中含有多种单萜类成分、倍半萜化合物、松香烷型二萜类化合物、芳香族化合物（α_细辛醚，β_细辛醚，丁香酚等），丁香酚是主要活性成分之一，具有抗菌、健胃的作用，与β_细辛醚配伍能有效治疗阿尔茨海默病［1_9］。
石昌蒲目前以野生为主，很少有家种。多年来无保护的滥采，使得资源量逐年下降。同时，销量在逐渐增长，从2002年起出口量呈上升趋势，使得药材资源更加紧缺。据此，本研究收集了两个产地的石菖蒲资源，以丁香酚为对照品进行含量分析，以筛选出较优种质资源，为建立菖蒲属种苗快速繁殖体系提供科学依据。
1 仪器与方法
1.1 仪器
超声仪（上海必能信超声有限公司）、真空干燥箱（上海福玛实验设备有限公司）、天平、研钵、碘量瓶、量筒、薄层分析用玻片、层析槽、薄层显色用喷壶、毛细管、紫外分光光度计（日本岛津公司）、比色皿、容量瓶（10、50、100 m1）数只、移液管、烧杯。
1.2 试剂与材料
石油醚（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）、CMC_Na、硅胶G、硅胶GF254、浓硫酸、乙醇（分析纯）、氯仿（分析纯）、香草醛、丁香酚标准品、样品溶液。
本研究所用样品材料由湖南中医药大学中药鉴定学教研室肖冰梅教授鉴定为石菖蒲（Acorus tatarinowii），分别采自长沙县和宁乡县。
1.3 实验方法
1.3.1 样品提取
采用冷浸法和超声法分别进行提取并比较。
1.3.1.1 冷浸法　分别取自长沙县跳马乡和宁乡县流沙河镇采集的新鲜石菖蒲根、茎各10 g，于研钵中捣碎，置于碘量瓶中，再各放入100 m1石油醚，于阴凉处浸渍24 h，过滤后置于干净的碘量瓶中，冷藏保存备用。
1.3.1.2 超声提取法［10］分别取自长沙县跳马乡和宁乡县流沙河镇采集的新鲜石菖蒲根、茎各10 g，于研钵中捣碎，置于具塞锥形瓶中，各加入100 m1石油醚进行超声，然后抽滤，将滤液置于干净的碘量瓶中，冷藏保存备用。工艺条件：功率600 W，超声时间20 min。
1.3.2 薄层鉴定［11_12］
1.3.2.1 薄层板的制备　将硅胶G与CMC_Na溶液按照1∶3的比例置于研钵中调成均匀的糊状，用玻璃棒将其均匀涂抹在干净的玻片上，厚薄适当，将铺好的板置于水平桌面上晾干备用。用前置于110℃烘箱内活化30 min。
1.3.2.2 标准品的制备　将2 m1丁香酚标准品溶液置于50 m1容量瓶中，加入石油醚定容至刻度线，得到4 μg/m1的标准品溶液，待用。
1.3.2.3 点样　距薄层板底边1 cm处划一横线作为起始线，在起始线上点样，用毛细管分别吸取少量标准品与样品于薄层板上。
1.3.2.4 展开 以氯仿_石油醚（10∶1）为展开剂于展开槽中展开，待展开剂上行到距薄层板上端1 cm处取出薄层板。
1.3.2.5 显色 以5%香草醛硫酸溶液为显色剂，待展开剂完全干燥后，于通风橱内均匀地喷上显色剂，置于105℃烘箱内加热显色。观察色斑颜色与位置。
1.3.3 紫外分光光度法测定
1.3.3.1 对照品溶液的制备　将2 m1丁香酚标准品溶液置于50 m1容量瓶中，加入石油醚定容至刻度线，摇匀，即得到4 μg/m1的标准品溶液。
1.3.3.2 样品溶液的制备 将2.1中所得的样品溶液用移液管各精密吸取1 m1于100 m1容量瓶中，加石油醚定容至刻度线，摇匀，即得样品溶液。
1.3.3.3 最佳检测波长的选择 取丁香酚对照品溶液，用蒸馏水溶液做空白对照，在190～400 nm波长下进行扫描，选取最大吸收波长280 nm作为测定波长。
1.3.3.4 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液，分别加石油醚稀释制成2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 μg/m1的一系列梯度浓度的标准品溶液。在190～400 nm波长范围内测定吸光度。结果显示，在8～20 μg/m1的范围内吸光度呈良好的线性关系，方程为y=0.0512x+ 0.0402（r2=0.9997）（图1）。

 
图1　丁香酚对照品标准曲线
1.3.3.5 样品测定 取样品溶液在190～400 nm波长范围内扫描，测定最大吸收波长处的吸光值，代入标准曲线方程，计算出样品溶液中所含丁香酚的含量。
1.3.3.6 精密度试验　每一份样品溶液按照上述测定方法重复测定三次，计算吸光度的平均值及RSD值。
2 结果
2.1 提取方法
通过两种提取方法得到的样品，每批测3份，每份测3次。在270 nm处测得的结果如表1。冷浸法提取的样品中丁香酚含量均明显高于超声法提取的样品。
表1　两种不同提取方法测得的丁香酚含量

2.2 薄层鉴定
样品溶液1～4号与标准品在薄层板上相同位置显示出相同颜色斑点（图2）。计算斑点的Rf值，标准品与样品的Rf值相差很小（表2），由斑点的颜色与位置可以确定样品中含有丁香酚。

 
图2　样品与标准品溶液薄层色谱图
表2　薄层鉴定的Rf值

1.长沙县跳马乡冷浸提取样品；2.长沙县跳马乡超声提取样品；3.宁乡县流沙河镇冷浸提取样品；4.宁乡县流沙河镇超声提取样品；5.丁香酚标准品溶液
2.3 精密度试验结果
样品吸光度的RSD值均在2%范围以内（表3），说明试验精密度良好。
表3　冷浸法提取的样品吸光度及RSD值

2.4 丁香酚含量测定
测定2批样品共计10份，长沙县产的石菖蒲所含丁香酚的平均含量为26.99 μg/m1，宁乡县产的为14.49 μg/m1（表4）。
表4　两个产地石菖蒲中丁香酚含量的测定

3 讨论
综合文献来看，对石菖蒲的研究主要集中在化学成分、药理作用以及中成药的应用方面，如石菖蒲对中枢神经系统有镇静作用，用于治疗癫痫病及其他神经系统疾患，有较好的疗效。临床还常用于冠心病、肺心病等属于痰浊气滞之胸痹者的治疗。石菖蒲的去油水煎液具有抗心律失常、降血脂、抑菌等作用［13_15］。除此以外，石菖蒲还具有耐水湿、适应性强等优点，很适合作为岸边水景及水体绿化的物种。其不仅能起到净化水体的作用，还能改善水体生态环境，促进退化水体生态系统的恢复［16_19］。由此可知，石菖蒲具有较高的药用价值、观赏价值和净水功能。对其进行种苗快速繁殖技术的研究将产生较好的社会效益和经济效益。石菖蒲广泛分布于黄河以南地区，不同产地出产的药材所含的主要化学成分存在很大的差异性［20］，选用哪个产地的资源作为种苗快繁技术研究的适宜材料尚未见报道。因此，笔者收集了不同产地石菖蒲资源，以其有效成分丁香酚为对照品，进行薄层色谱鉴定，并在270 nm处用采用紫外分光光度法测定其含量。通过比较不同产地石菖蒲中丁香酚含量的高低，从中筛选出较优种质资源。
本研究表明，来自同一产地、分别用冷浸法提取与超声法提取的样品中丁香酚含量有显著性差异（P＜0.05），采用石油醚冷浸法提取比较适合。
本研究对来自不同产地、均用冷浸法提取的样品测定丁香酚含量，长沙县石菖蒲中丁香酚含量明显高于宁乡县的样品，表明长沙产的石菖蒲较宁乡产的石菖蒲更适合作为快速繁殖技术研究的资源材料。
本研究为下一步研究石菖蒲种苗快速繁殖技术提供了科学依据，进而为石菖蒲资源的综合应用奠定了优良的物质基础。
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A comparative study on the content of eugenol in Rhizoma Acori Tatarinowii from different parts
XIAO Bing-mei1LI Dong1YANG Si-yu1CHENG Jian-rong2▲
1.Co11ege of Pharmacy，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha　410208，China；2.Changsha Co11ege，Changsha 410022，China
［Abstract］Objective To compare the content of eugeno1 in Rhizoma Acori Tatarinowii from different regions，and to sift better germp1asm resources.So that we can provide scientific basis for estab1ish a rapid propagation system of Acorus germp1asm resources.Methods Samp1es were extracted by petro1eum quenching，identified by TLC with eugeno1 as reference substance，then the eugeno1 content were determined by u1travio1et spectrophotometric method at 270 nm.Results The eugeno1 content of the samp1es produced in Changsha County Rhizoma Acori Tatarinowii was 26.99 μg/m1，the eugeno1 content of samp1es produced in Ningxiang yie1d was 14.49 μg/m1.Conclusion The eugeno1 content of samp1es produced in Changsha County Rhizoma Acori Tatarinowii is higher than that produced in Ningxiang yie1d.
［Key words］Rhizoma Acori Tatarinowii；Eugeno1；Co1d-maceration；U1travio1et chromatography；Thin 1ayer ana1ysis
［中图分类号］R284.1
［文献标识码］A
［文章编号］1674-4721（2016）04（c）-0008-04
［基金项目］湖南省科学技术厅科技计划一般项目（2013 NK3076）
［作者简介］肖冰梅，女，博士，教授，研究方向：中药鉴定与资源
▲通讯作者：陈建荣，女，博士，副教授，研究方向：生物技术
（收稿日期：2016_02_01　本文编辑：王红双）