潘丽英1黄福海2钟雪花3
1.深圳市宝安区沙井人民医院妇产科，深圳 518125；2.深圳市光明新区人民医院检验科，深圳 518106；3.深圳市宝安区沙井人民医院，深圳 518125

［摘要］目的探讨半乳糖凝集素-9（Galectin-9）在卵巢癌组织中的表达及其与临床病理参数间的相关性。方法选取本院2013年5月～2015年5月手术切除的60例卵巢癌组织标本作为研究对象，同时选取手术切除的50例卵巢良性肿瘤组织标本作为对照。应用免疫组织化学检测Galectin-9在良性卵巢组织和卵巢癌组织中的表达，并分析Galectin-9表达与卵巢癌临床病理参数间的相关性。结果Galectin-9分布于细胞核或细胞质内，50例良性卵巢组织中47例（94%）有Galectin-9表达。60例卵巢癌组织中仅26例（43.33%）有Galectin-9表达，两组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。不同临床分期、不同病理分期、有无淋巴结转移卵巢癌患者的Galectin-9阳性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论卵巢癌组织中的Galectin-9呈低表达，临床分期、病理分期、有无淋巴结转与移卵巢癌患者的Galectin-9阳性表达具有关系。Galectin-9的表达水平可能与卵巢癌的发生、病情进展以及预后密切相关。

［关键词］卵巢癌；半乳糖凝集素-9；相关性

细胞生长、凋亡、黏附以及聚集相关细胞信号通路已被证实参与了肿瘤的发生、发展［1-3］。半乳凝素-9 （Galectin-9）属内源性凝集素Galectin家族成员，最早从动物胚肾组织中分离获得，是由约130个高度保守的氨基酸序列组成的糖识别结构域，对β-半乳糖苷具有高度亲和性［4］。研究［5］显示，Galeetin-9可靶向进入细胞核内或细胞质，与细胞质和细胞核内的蛋白相互作用，通过细胞信号传导作用在介导细胞分化、凋亡、黏附、聚集及肿瘤转移等方面起重要作用。在广泛的人类实体瘤如肝癌、肺癌以及胃癌中，Galectin-9呈低水平表达［6-8］。本研究应用免疫组化检测Galectin-9在良性卵巢及卵巢癌组织中的表达，初步分析Galectin-9在卵巢癌发生、发展中的作用。

1.1 一般资料

选择本院病理科2013年5月～2015年5月手术切除的卵巢癌组织标本，采用随机抽样法共选取60例作为研究对象，所有标本临床资料完整。患者的年龄为50～70岁，平均（59.91±7.22）岁；≤60岁32例，＞60岁28例；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期33例；卵巢浆液性囊腺癌29例，黏液性囊腺癌31例；病理分期：G1期15例，G2期11例，G3期34例；淋巴结转移34例，无转移26例。同时收集本院病理科的50例卵巢良性肿瘤组织标本作为对照，年龄48～69岁，平均（59.27± 7.31）岁。两组的年龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 诊断标准

全部标本经10%甲醛固定、包埋、切片及HE染色，病理检查由同一位经验丰富的病理医师确认，所有标本均符合临床表现和影像学诊断。卵巢癌的临床和病理分期、组织类型以及淋巴结转移等均参照2002年国际抗癌联盟（UICC）标准拟定［9］。

1.3 纳入和排除标准

1.3.1 纳入标准①符合卵巢癌诊断标准；②术前均未行化疗以及免疫治疗等；③均为首诊患者；④患者知情同意。

1.3.2 排除标准①同时参与其他临床试验者；②合并其他系统原发性肿瘤者；③合并心、脑、肺、肝、肾等脏器功能不全者。

1.4 Galectin-9的免疫组织化学染色

对石蜡块进行连续切片，片厚4 μm，组织切片常规二甲苯脱蜡、水化以及枸橼酸抗原修复，3%过氧化氢溶液灭活，10%山羊血清封闭。应用Galectin-9兔抗人多克隆抗体（1∶2000）（Sigma公司）的稀释液4℃孵育过夜，漂洗；生物素标记的山羊抗兔二抗稀释液室温孵育2 h，漂洗，DAB显色，以PBS代替一抗作阴性对照；乙醇、二甲苯梯度脱水，中性树胶封片；显微镜下观察并拍照。

结果评价标准参照文献［10］。Galectin-9阳性结果位于细胞质或细胞核，由1名经验丰富的病理医师独立阅片，应用双盲法，镜下任取5个不同视野，具体如下。①按染色强度评分：不着色为0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；②按阳性细胞数计评分：＜5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。综合①②判断结果，其中0～1分为阴性（-），2～4分为弱阳性（+），5～8分为阳性（++），9～12分为强阳性（+++）。

1.5 观察指标

分析Galectin-9阳性表达与患者的年龄、临床分期、病理分期、组织类型以及淋巴转移等临床病理参数间的相关性。

1.6 统计学处理

采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料采用X2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 Galectin-9在良性卵巢组织和卵巢癌组织中的表达

Galectin-9在良性卵巢组织呈散在或弥漫表达，分布于细胞核或细胞质内，为粗细不一的棕黄色颗粒（图1A）；卵巢癌组织中的Galectin-9阳性反应呈低反应（图1B）。50例良性卵巢组织中，47例（94%）有Galectin-9表达；60例卵巢癌组织中，仅26例（43.33%）有Galectin-9表达，不同组之间比较，差异有统计学意义（X2=29.135，P＜0.01）（表1）。

2.2 Galectin-9表达与卵巢癌临床病理参数特征的关系分析

不同临床分期、不同病理分期、有无淋巴结转移患者的Galectin-9阳性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.01）（表1）。

目前卵巢癌尚缺乏特异性临床症状及有效筛查方法，故在早期常很难诊断，大部分患者被确诊时已处于肿瘤后期阶段［11-12］，因此，研究卵巢癌的发生、发展分子机制，探寻该病早期诊断的有效分子标志物以及治疗靶点具有重要的临床价值。本研究结果显示，Galectin-9分布于细胞核或细胞质内，在良性卵巢组织中呈散在或弥漫表达，而在卵巢浆液性囊腺癌、黏液性囊腺癌组织中均呈低反应，且Galectin-9在卵巢癌组织中的表达与临床分期、病理分期以及淋巴结转移有显著性相关（P＜0.01），而与年龄和组织类型无明显相关性（P＞0.05），提示Galectin-9可能是一个卵巢癌相关蛋白。

Galectin-9为Galectin家族成员，其基因定位在17q11.1，含有11个外显子。Galectin-9分布广泛，在胸腺、肺脏、肝脏、小肠、脾脏、肾脏以及肌肉组织等均被发现［13-15］。研究［16］显示，Galectin-9可调节免疫和炎症反应，同时引导肿瘤逃离免疫监视，在细胞生长、增殖、分化成熟、凋亡、黏附以及肿瘤转移等方面均发挥重要调节作用。Galectin-9的异常表达或低表达已在肝细胞癌、结直肠癌、胃癌、肺癌以及胶质瘤等人类恶性肿瘤组织中得到证实［6-8，17-18］。本研究结果显示，Galectin-9在临床分期、高病理分期及伴有淋巴转移的卵巢癌组织中的表达率更低，提示不同临床分期、不同病理分期、有无淋巴结转移卵巢癌患者的Galectin-9阳性表达率比较，差异有统计学意义。国外研究［19］显示，Galectin-9 mRNA表达在卵巢癌组织中呈低表达，再结合本研究结果，提示Galectin-9可能为潜在的临床诊断以及评估卵巢癌的重要因素，有可能成为卵巢癌靶向治疗的潜在靶点。

随着研究的不断深入，Galectin-9参与肿瘤的发生、发展调节日渐受到重视。以往研究［20］显示，Galectin-9能够扩增抑制性巨噬细胞，从而抑制Th17，上调调节性T细胞，在调节免疫反应在肿瘤细胞免疫逃逸中扮演着重要作用。目前，关于Galectin-9在卵巢癌中的调节作用的研究较少，其具体机制有待于进一步研究阐明。

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ExPression and significance of Galectin-9 in ovarian cancer

PAN Li-ying1HUANG Fu-hai2ZHONG Xue-hua3
1.Department of Obstetrics and Gynecology，Shajing People′s Hospital of Baoan District in Shenzhen City，Shenzhen 518125，China；2.Clinical Laboratory，People′s Hospital of Guangming New District in Shenzhen City，Shenzhen 518106，China；3.Shajing People′s Hospital of Baoan District in Shenzhen City，Shenzhen 518125，China

［Abstract］Objective To explore expression of Galectin-9 in ovarian cancer tissue and correlation with clinical pathological features. Methods 60 ovarian cancer tissues in our hospital from May 2013 to May 2015 were selected as the research group，at the same time，50 cases of benign tumor resection were selected as control group.Expression of Galectin-9 in cancer and benign tumor ovarian tissues were detected by immunohistochemistry method.Relationship between expression of Galectin-9 and clinical pathological features in ovarian cancer tissues was analyzed. Results Galectin-9 was located in the nucleus or cytoplasm.47 cases（94%）was expressed by Galectin-9 in 50 cases of benign ovarian tumor tissues，which was higher than 26 cases（43.33%）in 60 ovarian cancer tissues，with significant difference （P＜0.01）.Galectin-9 positive expression rate in ovarian cancer tissues with different clinical stages，different pathological grades，and presence of lymph node metastasis was different，with significant difference（P＜0.01）. Conclusion Galectin-9 expression is low in ovarian cancer tissues，and it is related to pathological grades，lymphatic metastasis and clinical stages，which may be closely related to the occurrence，development and prognosis of ovarian cancer.

［Key words］Ovarian cancer；Galectin-9；Correlation

［中图分类号］R737.31

［文献标识码］A

［文章编号］1674-4721（2016）04（b）-0036-03

［基金项目］广东省深圳市宝安区科技计划社会公益项目（2015230）

［作者简介］潘丽英（1978-），女，广西平果县人，壮族，本科，主治医师，研究方向：妇科肿瘤的病因诊断、治疗及预后

收稿日期：（2015-10-20 本文编辑：祁海文）