淋巴细胞主动免疫联合黄体酮治疗原因不明复发性流产的疗效分析
高 原 沈宇清 郑亮玉
广东省开平市中心医院妇产科，广东开平 529300
［摘要］目的 探讨淋巴细胞主动免疫联合黄体酮治疗原因不明复发性流产的疗效。 方法 选取本院2014年9月～2015年9月收治的72例不明原因复发性流产患者作为研究对象，根据治疗方式的不同分为对照组（32例）和联合治疗组（40例）。对照组怀孕前不做任何形式的治疗，妊娠后肌内注射人绒毛膜促性腺激素；另外，每天肌内注射40 mg黄体酮。联合治疗组采用淋巴细胞主动免疫联合黄体酮治疗。比较两组治疗前后的干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）水平以及妊娠成功率、流产率。 结果 联合治疗组治疗后的IFN-γ水平显著低于治疗前及对照组治疗后，IL-4水平显著高于治疗前及对照组治疗后，差异有统计学意义（P＜0.05）。联合治疗组的妊娠成功率显著高于对照组，流产率显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 淋巴细胞主动免疫联合黄体酮治疗原因不明复发性流产效果显著，值得临床推广应用。
［关键词］淋巴细胞主动免疫；黄体酮；原因不明复发性流产
复发性流产主要是指连续2次或2次以上在孕周＜20周或胎儿体重＜500 g时发生的妊娠丢失，临床发生率为1%～3%［1-2］。其形成原因较复杂，目前比较明确的原因主要包括染色体异常、生殖解剖结构异常、生殖系统感染、自身免疫因素等。另外，有近一半以上的复发性流产原因不明，临床上称为原因不明复发性流产［3-4］。近年来，淋巴细胞主动免疫治疗在临床中被广泛应用，关于其治疗有效性的探讨也明显增多［5-6］。本研究选取本院收治的原因不明复发性流产患者作为研究对象，探讨淋巴细胞主动免疫联合黄体酮治疗原因不明复发性流产的效果。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2014年9月～2015年9月本院妇产科收治的72例不明原因复发性流产患者作为研究对象，依据治疗方式的不同分为对照组（32例）和联合治疗组（40例）。对照组中，年龄20～43岁，平均（29.8±10.4）岁；流产情况：2次自然流产者22例，3次流产者8例，4次及以上者2例。联合治疗组中，年龄21～42岁，平均（29.6±10.1）岁；流产情况：2次自然流产者27例，3次流产者10例，4次及以上者3例。两组的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。
1.2 方法
对照组怀孕前不做任何形式的治疗，妊娠后肌内注射人绒毛膜促性腺激素（HCG）（上海凯创生物技术有限公司，国药准字H20150236）2000IU，隔天注射1次，直到妊娠12周停止注射。另外，每天肌内注射40 mg黄体酮（上海通用药业股份有限公司，国药准字H31021403），连续用药到妊娠12周停止注射。
联合治疗组采用淋巴细胞主动免疫联合黄体酮治疗，抽取患者静脉血30 ml，进行淋巴细胞的常规性分离，制备磷酸缓冲盐溶液（PBS缓冲液），其中磷酸二氢钾（KH2PO4）0.27 g，磷酸氢二钠（Na2HPO4）1.42 g，氯化钠（NaCl）8 g，氯化钾（KCl）0.2 g，加去离子水约800 ml充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1 L。通过PBS缓冲液洗3次，制成淋巴细胞悬液，将浓度调整为 20×106～40×106/ml，吸取0.5～0.8 ml悬液在妊娠者双侧前臂4～6个点进行皮内注射。间隔3～4周再注射1次，主动免疫治疗3次作为1个疗程。另外，每天肌内注射40 mg黄体酮，连续用药到妊娠12周停止注射。
1.3 观察指标
比较两组治疗前后的干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）水平，取肘静脉血液2 ml，通过淋巴细胞分离液对外周血单核细胞进行分离，采用PBS缓冲液洗3次，通过10%小牛血清将浓度调整为1×106/ml，加入1%的植物血凝素，放置在37℃下，再放到5%二氧化碳孵箱培养68 h，离心后对上清液进行收集，在-80℃进行保存待测。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法进行检测，试剂盒购自深圳晶美生物工程公司，严格按照说明书进行操作。此外，记录两组的妊娠成功率、流产率。
1.4 统计学处理
采用SPSS 19.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以.jpg)
±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。2 结果
2.1 两组治疗前后IFN-γ、IL-4水平的比较
两组治疗前的IFN-γ、IL-4水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。对照组治疗后的IFN-γ、IL-4水平与治疗前比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。联合治疗组治疗后的IFN-γ水平显著低于治疗前及对照组治疗后，IL-4水平显著高于治疗前及对照组治疗后，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。
表1 两组治疗前后IFN-γ、IL-4水平的比较（ng/L，.jpg)
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2.2 两组妊娠成功率及流产率的比较
联合治疗组的妊娠成功率显著高于对照组，流产率显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。
表2 两组妊娠成功率及流产率的比较［n（%）］
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3 讨论
研究［7-8］显示，胚胎携带者拥有50%的具有异于母体的组织抗原，其不被母体免疫系统排斥主要依赖于母胎之间的免疫耐受关系，如果此种免疫耐受情况被破坏，就会发生复发性流产［9-10］。按照病因和发病机制进行划分，可将复发性流产分为同种免疫型复发性流产和自身免疫型复发性流产，同种免疫型复发性流产又被称为不明原因复发性流产。目前认为同种免疫型复发性流产的可能原因是父方和母方人类白细胞抗原具有过高的相容性，父系抗原无法正确地对母体形成刺激，从而不能正常产生保护胚胎的封闭抗体，进而造成携带者父系抗原的胚胎被母体免疫系统识别并杀伤［11-12］。淋巴细胞主动免疫治疗原理是通过大剂量的父系或第三方淋巴细胞注射，对母体免疫系统形成刺激，促使母体产生足够量的封闭抗体，形成免疫耐受环境，进而促使胚胎正常发育［13-14］。
IFN-γ主要由活化的辅助性T细胞（Th细胞）和自然杀伤细胞（NK细胞）产生，其生物学功能主要包括免疫调节，诱导多种抗原提呈细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ/Ⅱ类分子（MHC-Ⅰ/Ⅱ分子），活化单核、巨噬细胞并增强其溶菌活性及分泌IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α等。IFN-γ还能活化中性粒细胞、NK细胞，刺激血管内皮细胞和白细胞合成的黏附分子，促进Th1细胞发育和抑制Th2细胞活化与增殖，刺激B细胞产生的抗体类型向调理素方向转变。IL-4对于B细胞、T细胞、肥大细胞、巨噬细胞和造血细胞都有免疫调节作用，能够促进B细胞MHCⅡ类抗原、人免疫球蛋白E Fc段受体Ⅱ（FcεRⅡ/CD23）和CD40的表达，并可增强B细胞的提呈抗原能力，使免疫系统对小量抗原刺激发生免疫应答。IL-4是T细胞自身分泌的生长因子，可单独维持Th2的增殖，也可刺激肥大细胞增殖，还具有促进巨噬细胞提呈抗原和杀伤肿瘤细胞的功能，这可能与调节MHCⅡ类抗原和FcR表达有关［15］。
本研究结果显示，联合治疗组治疗后的IFN-γ、IL-4水平均优于治疗前和对照组治疗后，联合治疗组的妊娠成功率、流产率优于对照组，提示淋巴细胞主动免疫治疗可通过不同层面和环节有效发挥免疫调节作用，进而提高封闭抗体在母胎界面的作用，有利于改善IFN-γ、IL-4水平，促进母体对胚胎的免疫保护，能够有效保护胎儿，减少免疫排斥作用，降低流产率。
综上所述，淋巴细胞主动免疫联合黄体酮治疗原因不明复发性流产效果显著，值得临床推广应用。
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Effect analysis of lymphocyte immune actively combined with progestin in the treatment of unexplained recurrent spontaneous abortion
GAO Yuan SHEN Yu-qing ZHENG Liang-yu
Department of Obstetrics and Gynecology，Center Hospital of Kaiping City in Guangdong Province，Kaiping 529300，China
Department of Obstetrics and Gynecology，Center Hospital of Kaiping City in Guangdong Province，Kaiping 529300，China
［Abstract］Objective To explore the effect of lymphocyte immune actively combined with progestin in the treatment of unexplained recurrent spontaneous abortion.Methods 72 cases of unexplained recurrent spontaneous abortion from September 2014 to September 2015 in our hospital were selected and divided into the control group （32 cases）and the combination treatment group （40 cases）according to different treatment methods.The control group was not given any treatment before pregnancy，intramuscular injection of human chorionic gonadotropin was given after pregnancy.In addition，intramuscular injection of 40 mg progestin in every day，the combination treatment group was given lymphocyte immune actively combined with progestin.The level of IFN-γ and IL-4 before and after treatment in the two groups was compared，and the pregnancy success rate and abortion rate in the two groups was compared.Results The level of IFN-γ after treatment in the combination treatment group was lower than that before treatment and in the control group after treatment，the level of IL-4 after treatment in the combination treatment group was higher than that before treatment and in the control group after treatment，with significant difference （P＜0.05）.The pregnancy success rate in the combination treatment group was higher than that in the control group，the abortion rate in the combination treatment group was lower than that in the control group，with significant difference（P＜0.05）.Conclusion The effect of lymphocyte immune actively combined with progestin in the treatment of unexplained recurrent spontaneous abortion is significant，it is worthy of clinical promotion and application.
［Key words］Lymphocyte immune actively；Progestin；Unexplained recurrent spontaneous abortion
［中图分类号］R714.21［文献标识码］A
［文章编号］1674-4721（2016）04（a）-0114-03
（收稿日期：2016-01-19本文编辑：祁海文）