陈宇倩1　赵俊军2
1.大连市中心医院超声科，大连　116033；2.大连市中心医院病理科，大连　116033

[摘要]目的探讨转移相关蛋白2（MTA2）和基质金属蛋白酶-7（MMP-7）在结肠癌中的表达及其意义。方法选取本院2012年1月～2014年12月的60例结肠癌标本作为观察组，选取30例结肠癌旁组织作为对照组。应用免疫组化SP法检测MTA2、MMP-7蛋白在结肠癌与癌旁组织中的表达情况以及在肿瘤不同分化程度、不同临床分期、有无淋巴结转移及远处转移情况下的表达水平。结果MTA2和MMP-7在结肠癌中的阳性表达与分组、分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关，差异有统计学意义（P＜0.05）。MTA2和MMP-7在结肠癌中的阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论MTA2和MMP-7与结肠癌的恶性程度有关，对结肠癌的侵袭转移起促进作用，能够参与结肠癌的发展过程，可作为判断结肠癌预后评估的参考指标。

[关键词]结肠癌；转移相关蛋白2；基质金属蛋白酶-7；免疫组化

结肠癌是一种严重危害人类健康的常见恶性肿瘤，其复发与转移会对患者的预后产生很大影响[1]。对结肠癌侵袭转移相关因素及机制的研究有助于为临床预测、控制以及治疗提供十分重要的客观指标。

近年来，国内外学者筛选出了一种肿瘤转移相关基因MTA家族，其是肿瘤转移相关基因中较重要的一种，主要参与组成组蛋白去乙酰基酶（NuRD），发挥基因转录抑制功能，通过调节雌激素通路、细胞凋亡以及细胞骨架等路径能够促进肿瘤侵袭转移[2-3]。深入研究MTA基因家族的结构特点和功能有利于分析恶性肿瘤的转移机制。目前，研究较详细的MTA家族成员为MTA1基因。已有研究证实，MTA1可能通过影响信号转导方式发挥作用，其阳性表达率与结肠癌等恶性肿瘤的大小、病程分期和肿瘤分化程度等密切相关[4-5]。MTA2与MTA1蛋白有65%的同源性，研究显示[6]，MTA2在多种肿瘤细胞中表达且与肿瘤的分化程度、浸润深度、临床分期以及有无淋巴结转移等密切相关。

基质金属蛋白酶（matrix meta11oproteinases，MMPs）是一类水解基底膜（BM）和细胞外基质（ECM）的蛋白水解酶家族，其中MMP-7可水解BM和ECM中的Ⅳ型胶原等多种成分，在恶性肿瘤的侵袭和转移中发挥着很重要的作用。其基因表达水平和淋巴结转移、TNM分期密切相关[7]。

本研究主要探讨MTA2在结肠癌中的表达及同MMP-7蛋白是否具有明显相关性，分析其在结肠癌发生、发展、侵袭和转移过程中的作用，以期为评估预后和治疗提供理论依据。

1.1　一般资料

选取本院2012年1月～2014年12月经手术切除并确诊为结肠癌的60例标本作为观察组，选取30例结肠癌旁组织作为对照组。观察组患者中，男性35例，女性25例；年龄51～77岁，平均65.2岁；高-中分化30例，低分化30例；伴淋巴结转移36例，不伴淋巴结转移24例；有远处转移6例，无远处转移54例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期25例，Ⅲ～Ⅳ期35例。所有患者均根据WHO中结肠癌的标准进行分型，手术前未做放化疗等。本研究经本院医学伦理委员会批准，患者及其家属均知情同意。

1.2　方法

1.2.1　材料MTA2和MMP-7蛋白浓缩液均购于Santa Cruz公司。

1.2.2　免疫组织化学染色SP法①石蜡切片脱蜡、水化，自来水冲洗，进行抗原修复；②滴加过氧化物酶阻断剂；③切片上滴加动物非免疫血清，室温下孵育10 min；④除去血清，切片上滴加第一抗体，4℃过夜；⑤除去PBS，切片上滴加生物素标记的第二抗体，室温下孵育10 min，PBS冲洗3次，3 min/次；⑥除去PBS，切片上滴加链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶试剂，室温下孵育10 min，PBS冲洗3次，3 min/次；⑦滴加新鲜配制的DAB显色试剂显色；⑧水冲洗，苏木素复染，经梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

1.3　判定标准

MTA2和MMP-7染色阳性的细胞均在细胞质中，以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性，选择阳性细胞比较集中的区域，共10个（400倍），计数阳性细胞的百分率，取平均值。以阳性细胞≥10%为阳性，＜10%为阴性。

1.4　统计学处理

采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料采用x2检验，相关性采用Spearman等级相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1　MTA2表达与临床病理特征的关系分析

MTA2在结肠癌中的阳性表达与分组、分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1　MTA2表达与临床病理特征的关系分析（n）

2.2　MMP-7表达与临床病理特征的关系分析

MMP-7在结肠癌中的阳性表达与分组、分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2　MMP-7表达与临床病理特征的关系分析（n）

2.3　MTA2和MMP-7阳性表达率的比较

MTA2和MMP-7在结肠癌中的阳性表达率比较，差异无统计学意义（x2=0.543，P=0.461）（表3）。

表3　MTA2和MMP-7阳性表达率的比较[n（%）]

 

与MMP-7比较，*P＞0.05

MTA家族是近年来国内外学者筛选出的与肿瘤转移有关的基因中较重要的一种，产物涉及MTA1、MTA2、MTA3以及MTA1s和MTA3L等类似分子[8-10]。

研究显示[11-16]，MTA2的表达水平与乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、食管癌、胰腺导管癌、喉癌等肿瘤的临床分期、有无淋巴结转移及病理学分级相关，但关于MTA2在结肠癌中的表达及与MMP-7蛋白是否具有明显相关性的报道较少。

本研究结果显示，MTA2的表达水平与结肠癌的临床分期及分化程度密切相关，在肿瘤的侵袭过程中能够发挥重要作用，这与上述文献中的结论相似。本研究结果也显示，MTA2在结肠癌伴远处转移与不伴远处转移中的表达水平比较，差异无统计学意义，这可能与样本例数相对不足有关，有待在今后的研究中继续探讨。

MMPs家族是一类作用于基底膜和细胞外基质的肽链内切酶[7]。细胞的迁移和细胞外基质重建的动态平衡是由MMPs及其抑制剂——金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitor of meta11oproteinases，TIMPs）共同来维持的，其平衡失常是导致肿瘤细胞侵袭、转移的关键性因素[17-18]。

MMP-7属于MMPs家族中的一个亚型，能够降解构成细胞外基质和基底膜的主要结构蛋白——Ⅳ型胶原和层粘连蛋白，在肿瘤的侵袭转移中起着关键作用[19]。临床研究显示，MMP-7的阳性表达强度与食管癌等多种肿瘤的分化、局部浸润程度、有无淋巴结转移以及Dukes分期呈正相关（P＜0.05），但是其临床意义还没有肯定的结论，尚需进一步探讨。

本研究结果显示，MMP-7表达水平在结肠癌和癌旁组织、结肠癌低分化组和高分化组、有淋巴结转移组与无淋巴结转移组及TNM分期Ⅲ～Ⅳ期与TNM分期Ⅰ～Ⅱ期中比较，差异有统计学意（P＜0.05），提示MMP-7的表达水平与结肠癌的临床分期、有无淋巴结转移及分化程度具有相关性，其可能在肿瘤的侵袭转移过程中发挥重要作用。MMP-7在未伴有远处转移及伴有远处转移中的表达水平比较，差异无统计学意义。

有研究显示[20]，MTA2既有影响转录的活性，也有促进MMP-7分泌的活性，能够发挥基底膜的溶解作用而引起肿瘤的进展。本研究联合检测了结肠癌组织中的MTA2和MMP-7表达情况，其在结肠癌中的表达无显著相关性，而在结肠癌中的相互作用还有待于扩大样本进一步研究。

综上所述，MTA2和MMP-7在结肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织，其与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴结转移具有相关性，提示MTA2和MMP-7与结肠癌的恶性程度有关，其对结肠癌的侵袭转移起促进作用，能够参与结肠癌的发展过程，故可作为判断结肠癌预后的参考指标。

[1]侯蕊，申兴斌，张志勇.MTA2在结肠癌中的表达及意义的研究[J].临床和实验医学杂志，2015，14（8）：620-622.

[2]Zhu CJ，Zhang S，Liang Y，et al.E1icitation of metastasis associated protein 2 expression in the phagocytosis by murine testicu1ar Serto1i ce11s[J].Biochem Biophys Res Commun，2014，445（3）：667-672.

[3]刘博.食管癌淋巴结转移及MTA2的表达对患者预后影响的临床病理研究[D].石家庄：河北医科大学，2008.

[4]徐华，杜彬，周序珑，等.新的肿瘤转移相关基因-MTA家族[J].生命的化学，2005，25（6）：449-451.

[5]张金龙，王海娟，刘健，等.结肠癌组织中MTA1的表达水平及定位与患者预后的相关性研究[J].癌症进展，2012，10（3）：216-220

[6]史娟.长链非编码RNA SNHG5通过结合MTA2抑制胃癌生长[J].中国病理生理杂志，2015，31（10）：1842.

[7]Luukkaa H，K1emi P，Hirsimaki P，et al.Matrix meta11oproteinase （MMP）-7 in sa1ivary g1and cancer[J].Acta Onco1，2010，49（1）：85-90.

[8]Covington KR，Fuqua SA.Ro1e of MTA2 in human cancer[J]. Cancer Metastasis Rev，2014，33（4）：921-928.

[9]Lu J，Jin ML.Short-hairpin RNA-mediated MTA2 si1encing inhibits human breast cancer ce11 1ine MDA-MB231 pro1iferation and metastasis[J].Asian Pac J Cancer Prev，2014，15（14）：5577-5582.

[10]陈磊，郑树艳，黄永望，等.MTA2对喉癌细胞系Hep-2的增殖、迁移和侵袭的影响[J].中国实验诊断学，2015，19（6）：883-885.

[11]Ji Y，Zhang P，Lu Y，et al.Expression of MTA2 gnne in ovarian epithe1ia1 cancer and its c1inica1 imp1ication[J].J Huazhong Univ Sci Techno1og Med Sci，2006，26（3）：359-362.

[12]李秀娟，李明霞，赵轶峰，等.食管鳞癌组织MTA2表达与淋巴管生成关系探讨[J].中华肿瘤防治杂志，2014，21（9）：674-677.

[13]Zhou J，Zhan S，Tan W，et a1.P300 binds to and acety-1ates MTA2 to promote co1orecta1 cancer ce11s growth[J]. Biochem Biophys Res Commun，2014，444（3）：387-390.

[14]吕洋，刘博.食管鳞癌组织MTA2表达与淋巴结转移相关性的探讨[J].中华肿瘤杂志，2012，19（1）：45-49.

[15]Chen DW，Fan YF，Li J，et al.MTA2 expression is a nove1 prognostic marker for pancreatic ducta1 adenocarcinoma[J].Tumor Bio1，2013，34（3）：41-45.

[16]王述华，齐艳丽，张俊毅，等.MTA2在非小细胞肺癌中的表达及意义[J].中国肺癌杂志，2010，13（8）：777-779.

[17]张超贤，郭李柯.超声内镜结合血清基质金属蛋白酶7 和9表达对胃癌术前分期的临床意义[J].中山大学学报·医学科学版，2015，36（4）：590-598.

[18]曹春宇，刘祖炳，李松财，等.幽门螺杆菌感染及相关胃溃疡中基质金属蛋白酶的水平研究[J].中华医院感染学杂志，2015，25（20）：4650-4652.

[19]Zhang F，Tanasa B，Merkurjev D，et al.Enhancer-bound LDB1 regu1ates a corticotrope promoter-pausing repression program[J].Proc Nat1 Acad Sci USA，2015，112（5）：1380-1385.

[20]Cheng CY，Chou YE，Ko CP，et al.Metastasis tumor-associated protein-2 knockdown suppresses the pro1iferation and invasion of human g1ioma ce11s in vitro and in vivo[J].J Neuroonco1，2014，120（2）：273-281.

Expression and significance of metastasis associated protein 2 and matrix metalloproteinase -7 in colorectal cancer

CHEN Yu-qian1ZHAO Jun-jun2
1.Department of U1trasound,Centra1 Hospita1 of Da1ian City,Da1ian　116033,China；2.Department of Patho1ogy,Centra1 Hospita1 of Da1ian City,Da1ian 116033,China

[Abstract ] Objective To exp1ore expression and significance of metastasis associated protein 2 （MTA2) and matrix meta11oproteinase -7 （MMP-7) in co1orecta1 cancer. Methods 60 cases of co1orecta1 cancer specimen from January 2012 to December 2014 in our hospita1 were se1ected as the observation group,30 cases of co1orecta1 cancer adjacent tissues were se1ected as the contro1 group.Expression condition of MMP-7 and MTA2 protein in co1orecta1 cancer and adjacent tissues and its expression 1eve1 in different degree of differentiation,c1inica1 stage,1ymph node metastasis and distant metastasis were detected by immunohistochemistry SP method. Results The positive expression of MTA2 and MMP-7 in co1orecta1 cancer was re1ated to the grouping,differentiation degree,1ymph node metastasis and TNM stage,with significant difference （P＜0.05).There was no significant difference in the positive expression rate of MTA2 and MMP-7 in co1-orecta1 cancer （P＞0.05). Conclusion MTA2 and MMP-7 are re1ated to the ma1ignant degree of co1orecta1 cancer,which can promotes the invasion and metastasis of co1orecta1 cancer and it is invo1ved in the deve1opment of co1orecta1 cancer,can be used as a reference index for eva1uating the prognosis of co1orecta1 cancer.

[Key words] Co1orecta1 cancer；Metastasis associated protein 2；Matrix meta11oproteinase-7；Immunohistochemistry

[中图分类号] R363.2　

[文献标识码] A　

[文章编号] 1674-4721（2016）03（b）-0061-04

[作者简介]陈宇倩（1980-），女，黑龙江省哈尔滨市人，主治医师

收稿日期：（2015-12-31　本文编辑：祁海文）