巨细胞病毒属于疱疹病毒亚科，是引发人类疾病的常见病原体，可通过密切接触、输血、性行为、器官移植及母婴途径等方式传播。而2 型糖尿病（type 2 di abetes mellitus，T2DM）作为一种常见的慢性疾病，多发病于35～40 岁之后，其患者数量占糖尿病患者90%以上[1]。有研究指出，T2DM 患者体内产生胰岛素的能力并未完全丧失，部分患者体内胰岛素水平过高[2]，但其胰岛素作用效果较差，患者表现为胰岛素抵抗或胰岛素分泌相对不足等情况[3]。目前已有研究指出，巨细胞病毒感染与1 型糖尿病存在一定相关性[4]，但巨细胞病毒感染与T2DM 的相关性还未得到证实。基于此，本研究探究活动性巨细胞病毒感染DNA 载量与T2DM 患者T 淋巴细胞亚群的关系。

回顾性分析2019年10月至2020年5月萍乡市人民医院收治的80 例T2DM 患者的临床资料，按照活动性巨细胞病毒感染情况将其分为观察组（巨细胞病毒感染阳性，n=18）和对照组（巨细胞病毒感染阴性，n=62）。观察组中，男10 例，女8 例；年龄25～83 岁，平均（53.72±18.54）岁；病程7～24 个月，平均（15.63±6.24）个月。对照组中，男35 例，女27 例；年龄26～80岁，平均（45.69±16.33）岁；病程9～24 个月，平均（14.18±6.77）个月。两组的一般资料比较，差异有统计学意义（P＜0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准。纳入标准：①符合T2DM 诊断标准[5]；②临床资料完整；③均进行巨细胞病毒DNA、T 淋巴细胞亚群、胰岛功能相关检查。排除标准：①严重器质性病变者；②长期服用免疫抑制剂者；③恶性肿瘤者；④免疫功能缺陷者。

巨细胞病毒DNA 载量检测[6]：应用荧光定量PCR方法检测尿HCMV DNA，严格按试剂盒说明书操作，PCR 试剂盒为中山大学达安基因股份有限公司产品，PCR 扩增反应在ABI VIIA7 PCR 仪上进行，当其样本浓度≤500 拷贝数/ml 时判定为巨细胞病毒感染阴性，＞500 拷贝数/ml 时判定为巨细胞病毒感染阳性。

T 淋巴细胞亚群检测：抽取患者空腹静脉血5 ml，使用以1500 r/min，离心半径15 cm，离心10 min，去除上层清液，采用梯度离心法分离淋巴细胞，并制成悬液，使用贝克曼库尔特商贸有限公司生产的Gallios流式细胞仪检测CD4+T 淋巴细胞、CD8+T 淋巴细胞含量，并计算CD4+/CD8+比值。

胰岛功能检测：抽取患者空腹静脉血5 ml，使用以1500 r/min 离心10 min，收集血清，离心半径15 cm，使用默沙克生物酶联免疫试剂盒测量空腹C 肽（fasting C-peptide，FCP）、餐后2 小时C 肽（fasting 2 h Cpeptide，F2CP）水平。

比较两组T淋巴细胞亚群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）、胰岛功能（FCP、F2CP）水平，分析活动性巨细胞病毒感染DNA 载量与T 淋巴细胞亚群水平和胰岛功能的相关性。

采用SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，组间比较用t 检验；计数资料采用率表示，组间比较采用χ2 检验，采用Pearson 相关分析模型分析相关性，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

观察组的CD4+、CD4+/CD8+低于对照组（P＜0.05），CD8+高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 两组T 淋巴细胞亚群的比较（±s）

观察组的FCP、F2CP 水平低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2 两组胰岛功能的比较（ng/ml，±s）

巨细胞病毒感染DNA 载量与CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈负相关，与CD8+水平呈正相关（P＜0.05）（表3）。

表3 巨细胞病毒感染DNA 载量与T 淋巴细胞亚群水平和胰岛功能的相关性分析

大量研究表明，1 型糖尿病的发生发展与巨细胞病毒感染有极为密切的联系，病毒感染可直接或间接攻击胰岛细胞，导致胰岛细胞分泌胰岛素功能下降[7]。但与1 型糖尿病胰岛β 细胞严重受损不同，T2DM 胰岛细胞功能尚存，二者发病机制存在一定差异，病毒感染对T2DM 的作用有待考证。

巨细胞病毒为线性双链DNA 病毒，在人类中普遍易感，能对新生儿及免疫机能低下个体造成较为严重的并发症，且经原发感染后，病毒会长期潜伏于体内[8]。T 淋巴细胞亚群主要为CD4+和CD8+细胞，当病毒侵犯机体时，CD4+、CD8+细胞相互作用，发挥特异性免疫，抵抗病毒感染[9]。本次研究中，巨细胞病毒感染阳性患者CD4+细胞水平、CD4+/CD8+低于阴性患者，CD8+细胞水平高于阴性患者，差异有统计学意义（P＜0.05），提示巨细胞病毒激活状态会加重T2DM 患者机体免疫功能失衡，这与曹洁等[10]所研究结论相类似，其原因可能是巨细胞病毒基因复制活跃，患者体内发生免疫应答反应，在病毒抗原识别过程中，CD8+细胞大量复制，CD4+细胞大量消耗，从而引起T 淋巴细胞亚群数量发生变化。

巨细胞病毒感染会导致机体免疫失衡，免疫细胞分泌白介素-6、肿瘤坏死因子等因子，诱导机体发生胰岛素抵抗作用，降低胰岛素敏感性[11]。本研究结果显示巨细胞病毒感染阳性患者FCP、F2CP 水平低于阴性患者，差异有统计学意义（P＜0.05），提示巨细胞病毒会影响FCP、F2CP 水平，这与王柳明等[12]所研究结论相类似，其原因可能是巨细胞病毒感染胰岛β 细胞，并在胰岛β 细胞中潜伏、复制和增殖，其合成的蛋白质会引起胰岛β 细胞凋亡，同时巨细胞病毒感染胰岛β 细胞后通过交叉免疫作用引起特异性T 细胞产生抗体，这种抗体能够攻击胰岛β 细胞，造成胰岛β细胞损伤，并且在巨细胞病毒感染胰岛β 细胞后，会引起淋巴B 细胞、粒细胞、单核细胞富集，形成炎症微环境，释放出的细胞因子，会引起胰岛β 细胞功能失调，从而影响患者胰岛功能[13]。

本研究结果显示，巨细胞病毒感染DNA 载量与CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈负相关，与CD8+水平呈正相关（P＜0.05），提示T2DM 患者巨细胞病毒越活跃，患者免疫功能和胰岛功能越受影响，与刘春梅等[14]所研究结论相类似，这说明当T2DM 患者感染巨细胞病毒后，巨细胞病毒能通过直接损伤胰岛β 细胞和长期病毒感染导致患者自身免疫失衡，并影响其胰岛β 细胞正常功能，造成患者体内胰岛素分泌含量减少，加重T2DM 患者病情[15-16]。

综上所述，活动性巨细胞病毒感染DNA 载量与T2DM 患者CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈负相关，与CD8+水平呈正相关，故采取有效措施抑制患者免疫失衡状态，对治疗巨细胞病毒感染有利。

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Relationship between DNA load of active cytomegalovirus infection and T lymphocyte subsets in patients with type 2 diabetes mellitus

CAI Li-juan REN Mei LIU Jian-rong PAN Xing▲
Department of Clinical Laboratory, Pingxiang People's Hospital, Jiangxi Province, Pingxiang 337000, China

[Abstract] Objective To explore the relationship between DNA load of active cytomegalovirus infection and T lymphocyte subsets in patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM). Methods The clinical data of 80 patients with T2DM treated in Pingxiang People's Hospital between October 2019 and May 2020 were retrospectively analyzed. According to the active cytomegalovirus infection status, the patients were divided into observation group (positive cytomegalovirus infection, viral DNA load＞500 copies/ml, n=18) and control group (negative cytomegalovirus infection, viral DNA load≤500 copies/ml, n=62). The T lymphocyte subsets (CD4+, CD8+, CD4+/CD8+) and pancreatic islet function (fasting Cpeptide [Fins], fasting 2 h C-peptide [F2CP]) were compared between the two groups. Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation between DNA load of active cytomegalovirus infection and levels of T lymphocyte subsets and pancreatic islet function. Results The level of CD4+cells and CD4+/CD8+in observation group were significantly lower than those in control group, while the level of CD8+ cells was higher than that in control group, the differences were statistically significcant (P＜0.05). The levels of FCP and F2CP were lower in observation group than those in control group, the differences were statistically significcant (P＜0.05). The DNA load of cytomegalovirus infection was negatively correlated with CD4+, CD4+/CD8+, Fins and ISI, and was positively correlated with CD8+level (P＜0.05). Conclusion The DNA load of active cytomegalovirus infection is closely related to the T lymphocyte subsets of patients with T2DM. The more active cytomegalovirus in the body of patients, the greater the degree of body's immune imbalance and the more severe the islet function damage. It is necessary to take corresponding treatment methods to improve the cytomegalovirus infection status.

[Key words] Cytomegalovirus; DNA load; Type 2 diabetes mellitus; T lymphocyte subsets

[中图分类号] R587.1

[文献标识码] A

[文章编号] 1674-4721（2021）10（c）-0161-03

[基金项目]江西省萍乡市科技计划项目（2019PY040）。

[作者简介]蔡丽娟（1986-），女，硕士，主要从事PCR 检测方面的研究。

（收稿日期：2021-04-29）