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交叉配血试验是输血前必做的配合性试验，以确定受血者或供者血液中没有可测的不相配合的抗原和抗体成分，是安全输血的第一要素。患者血清/血浆与供者红细胞混合后的实验称为主侧交叉配血，而将供者血清/血浆与患者红细胞混合后的实验称为次侧交叉配血[1]。目前，微柱凝胶法（micro-column gel test，MGT）配血技术已被广泛应用于临床输血相容性检测[2]，但由于其灵敏度高的原因，配血不合率也高于其他检测方法。本研究对MGT 交叉配血次侧弱凝集的现象进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年9月～2020年10月在云浮市人民医院输血患者3606 例。MGT 交叉配血主侧相合、次侧弱凝集的120 例，其中男68 例，女52 例；年龄10个月～98 岁。本研究已通过医院医学伦理委员会审批。

1.2 试剂与仪器

微柱凝胶血型卡、微柱凝胶抗人球卡、低离子液（珠海贝索公司）；抗体筛查细胞、ABO 标准细胞（上海血液生物医药公司）；抗人球蛋白（抗IgG、抗C3d）检测卡（江苏力博医药生物技术股份有限公司），以上试剂均在有效期内使用。血型血清学离心机（Centrifuge 12 SⅡ）、孵育器（Incubator 37 SI）、CU600 型电热恒温水箱，北京白洋BY-120A 离心机，CU600 型电热恒温水浴箱。

1.3 操作方法

1.3.1 交叉配血标本经3000 r/min 离心1 min，分离血浆和血细胞，用低离子液制备0.1%左右的红细胞悬液，主侧加受血者血浆50 μL 和供者红细胞悬液50 μL，次侧加供者血浆50 μL 和受血者红细胞悬液50 μL，37℃孵育15 min，离心10 min 判读结果。红细胞在凝胶柱的上端或中间，判定为阳性；红细胞到达微柱的底部判定为阴性。

1.3.2 直接抗人球蛋白试验（DAT）检测用EDTA 抗凝血标本，BY-120A 离心机3500 r/min 离心1 min，取压积红细胞用生理盐水洗涤三次后配制1%的红细胞悬液，然后取50 μL 加至微柱凝胶抗人球卡中，血型血清学离心机离心10 min，肉眼观察结果。

1.3.3 DAT 分型在抗人球蛋白检测卡IgG、C3d 及Ctrl 三孔中分别加入50 μL 的1%红细胞悬液，血型血清学离心机离心10 min，肉眼观察结果。

1.3.4 热放散试验用EDTA 抗凝血标本，BY-120A 离心机3500 r/min 离心1 min，移除全部血浆，剩下的压积红细胞用盐水洗涤5～6 次，末次去掉上清液后加与压积红细胞等量的盐水，然后放45℃水浴箱放散10～15 min，期间轻轻振摇。放散后取出离心，用上清液进行抗体筛查。

1.3.5 供血者抗体筛查试验供血者标本3500 r/min离心1 min，在抗人球蛋白检测卡1、2、3 孔中分别加入50 μL 血浆及50 U 抗体筛查细胞，37℃孵育15 min，离心10 min 判读结果。

1.3.6 假凝集的判读由于受血者标本抗凝不好，导致标本中出现纤维蛋白丝，吸样时纤维蛋白丝被带到凝胶孔内，离心后结果出现一薄层红细胞卡在凝胶孔上层、大部分红细胞在凝胶孔底层的现象；用小吸嘴轻轻挑起薄层红细胞，可见到整层红细胞被挑起。

2 结果

2.1 交叉配血次侧弱凝集的原因

120 例交叉配血主侧相合、次侧弱凝集的患者中，DAT 阳性117 例（占97.50%），供者抗筛阳性2 例（占1.67%），假凝集1 例（占0.83%）；DAT 阳性患者的次侧配血凝集强度均弱于或等于其DAT 凝集强度。

2.2 DAT 阳性与5 例溶血性贫血的相关性

DAT 阳性117 例患者中，5 例患者初次配血时的血液标本呈现明显黄疸，对5 份标本进行免疫分型及放散试验，结果显示，5 例均为IgG 型；放散后抗体筛查全阴性4 例，放散后抗体筛查全阳性1 例，结果见表1。

表1 DAT 阳性与5 例溶血性贫血的相关性

Hb：血红蛋白；LDH：乳酸脱氢酶；G-6-PD：红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；AIHA：自身免疫性溶血性贫血

3 讨论

DAT 是辅助诊断贫血的方式，也是诊断AIHA 最直接的证据之一。DAT 阳性的主要原因：①红细胞抗原上吸附有自身抗体；②溶血性输血反应；③胎儿及新生儿溶血性疾病；④药物诱导的抗体；⑤被动获得的同种抗体；⑥非特异性吸附的蛋白；⑦由于细菌感染、自身抗体或同种抗体引起的补体激活和过客淋巴细胞产生的抗体[3]。DAT 阳性导致交叉配血次侧不合的现象在临床输血相容性检测中比较常见，尤其多见于消化科、重症监护病房、肿瘤科和肾病科[4]。这些非AIHA 患者球蛋白相对增高，可以导致球蛋白非特异性黏附于红细胞表面，从而导致DAT 阳性[5]。本研究结果显示，导致交叉配血次侧凝集的主要原因是患者DAT 阳性（占97.50%），这与林嘉等[6]研究结果一致。对于DAT 阳性导致的交叉配血次侧凝集，配血时只要次侧凝集强度弱于或等于DAT 凝集强度，可视为患者血液与供者红细胞配血相合，输注悬浮红细胞并不降低输血的有效性和安全性[6-7]。

本研究中，5 例较异常的DAT 阳性标本，标本离心后的血浆外观均呈明显黄疸，抗体筛查均为阴性；DAT免疫分型为IgG 型，放散试验4 例呈抗体筛查全阴性，1 例呈抗体筛查全阳性。5 例患者的出院诊断均与溶血性贫血相关：1 例药物性溶血性贫血，1 例地中海贫血，2 例G-6-PD 缺乏，1 例AIHA 待排。提示DAT 免疫分型和放散试验可以为临床提供一些直接或间接的诊断依据，辅助医生及时诊断及治疗。尽管还缺乏更多量的数据分析，但这5 例的配血对策应引关注。

药物性溶血性贫血是由于患者在使用某种药物后，体内产生相应的药物性抗体，导致DAT 阳性，红细胞被破坏，从而发生的免疫性溶血性贫血[8]。本研究中，该患者因长期口服抗肿瘤类药物致慢性溶血性贫血，入院后停用该药物，输注悬浮红细胞5.5 U，Hb 从45.3 g/L 上升到99.6 g/L。

地中海贫血是由于珠蛋白基因突变或缺失、以慢性进行性溶血为特点的一种血液疾病，在广东、广西地区分布最多[9]。此类患者在配血时应做到ABO 及Rh血型系统同型输注，以减少产生同种抗体的可能性[10]；另外，最好输注洗涤红细胞并滤除白细胞，以避免HLA 抗体的产生及与白细胞携带病毒相关疾病传播的风险[11]。

G-6-PD 缺乏症是人类最常见的酶缺乏症，大多数患者终生无症状，在接触已知氧化药物、感染或摄入蚕豆后出现急性溶血。此类患者输血时可选择悬浮红细胞或滤除白细胞的悬浮红细胞，尽量选择G-6-PD 正常的献血者血液，以提高输血疗效[12-13]。

AIHA 是临床中常见的获得性溶血性疾病，是由于机体产生针对自身红细胞抗原的抗体，导致红细胞破坏增加。此类患者的DAT 阳性的红细胞放散液只有自身抗体，并且患者没有近期输血史的情况下，可以输注配血主侧相合的悬浮红细胞[3]。

本研究中由供血者抗筛阳性导致的交叉配血次侧凝集，可以另选供血者进行重新配血，并将该抗筛阳性血液退回血站处理。假凝集导致交叉配血次侧不合，是由标本抗凝不充分，纤维蛋白析出所致，重新处理标本后配血主、次侧相合。

有研究认为，MGT 次侧配血不合对悬浮红细胞输注的安全性无影响，在确定受血者与献血者血型无误时，可取消MGT 次侧配血[14]。但笔者认为，MGT 次侧配血还是有必要性：①国内目前没有规定献血者必须做不规则抗体筛查，次侧配血阳性可以有助于配血人员发现献血者的不规则抗体，并反馈给血站，避免其血浆类制品用于临床，从而保障临床用血安全[15]。②DAT 不是输血相容性检测的常规项目，次侧交叉配血阳性可以有助于发现患者DAT 阳性，对于有溶血性输血反应、自身溶血性贫血和有近期输血史的DAT阳性患者，有必要进行红细胞放散试验，确定红细胞上放散下来的抗体特异性，为患者寻找安全有效的血液进行输注[16]。③次侧交叉配血阳性有助于发现受血者或供血者血型错误，避免输血不良反应的发生[15]。

综上所述，MGT 交叉配血次侧弱凝集绝大多数由患者DAT 阳性所致，交叉配血时次侧凝集强度不强于患者DAT 凝集强度即可；对于DAT 阳性且黄疸明显的标本应加以关注及分析，采取针对性的配血方案，以提高输血的安全性及有效性。

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