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重型肝炎属于严重肝脏疾病，主要病理特点为大量肝细胞坏死，会造成肝脏合成、排泄、解毒、生物转化等功能发生严重失代偿或障碍，多表现为凝血机制障碍、肝性脑病、黄疸、腹水等，是肝病患者病死的主要原因之一[1-3]。白介素-35（interleukin-35，IL-35）是一种唯一由Treg 细胞分泌的细胞因子，具有扩增Treg 分化，抑制Th17 细胞亚群的分化、增殖及其细胞因子的分泌等作用，防止过度的自身免疫反应等作用，在乙型肝炎的发病过程中扮演重要的角色[4-6]。血浆透析滤过（plasma diafiltration，PDF）能够清除体内小分子水溶性物质、大分子的组织蛋白、蛋白结合毒素、炎症介质、细胞因子等，还能调节酸碱、水、电解质平衡，补充重型肝炎患者血液净化过程中丢失的凝血因子等有益物质，是治疗重型肝炎的有效手段。本研究选取萍乡市人民医院收治的40 例重型肝炎患者和40 例健康体检者，分析IL-35 在PDF 治疗重型肝炎前后的变化及其意义，旨在为临床治疗提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年7月～2019年7月萍乡市人民医院收治的40 例重型肝炎患者作为研究组，男29 例，女11 例；年龄20～67 岁，平均（36.52±2.65）岁；疾病类型；亚急性重症病毒肝炎13 例，急性重症肝炎2 例，慢性重症病毒性肝炎25 例。纳入标准：符合《慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）》[7]中重型肝炎相关诊断标准；入院后接受PDF 治疗。排除标准：原发性肝癌；入组前3 个月内接受糖皮质激素、胸腺肽等免疫调节剂治疗；代谢性肝病；自身免疫性疾病；药物性、酒精性肝病；妊娠期或哺乳期女性；血液系统疾病；甲、丙、丁、戊型病毒感染；精神疾患。选择同期在本院行健康体检的40 例健康者作为对照组，男26 例，女14 例；年龄21～65 岁，平均（37.01±2.49）岁。两组的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。两组受检者或家属签署知情同意书，本研究经医院医学伦理委员会审核批准。

1.2 方法

重症肝炎患者均接受积极内科综合治疗，如高能量低蛋白饮食、退黄、护肝、补充凝血因子和白蛋白、促肝细胞生长等。使用日本产KM-9000 型人工肝治疗仪和5A20 血浆分离器（川澄化学工业株式会社）行PDF 治疗，股静脉插管创建体外循环通路。治疗透析液为10 500 mL 0.9%生理盐水+105 mL 50%葡萄糖注射液+630 mL 5%碳酸氢钠注射液，总量为11 235 mL；血浆超滤速度为267 mL/h，血流速度为100～150 mL/min，透析液流速为2000 mL/h，血浆置换量为1600 mL，透析时间长为8 h。

1.3 观察指标

①对比两组血清IL-35 水平差异。②对比研究组治疗前、治疗后血清IL-35 水平、生化指标、电解质指标差异。③分析血清IL-35 水平与生化指标、电解质等指标的相关性。

分别抽对照组及研究组患者治疗前、治疗8 h 后5 mL 空腹静脉血，3000 r/min 离心10 min，获取上清液，放置在-80℃冰箱中保存，待检。使用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测血清IL-35 水平，仪器为美国BIO-RAD 公司的iMark 酶标仪，试剂盒由北京生物科技发展有限公司提供，严格按照试剂盒说明书操作，在酶标仪450 nm 处读取数据。采用Dimension Rxl Max 型全自动生化分析仪测天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、总胆红素（total bilirubin，TBil）生化指标。深圳凯特XI-921DT 电解质分析仪测定治疗前、治疗8 h 后电解质，如钠离子（Na+）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（

±s）表示，两组间比较采用t 检验；计数资料采用率表示，组间比较采用χ2 检验；相关性使用Spearman 相关性分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清IL-35 水平的比较

研究组的血清IL-35 水平为（23.23±6.32）pg/mL，低于对照组的（101.92±12.47）pg/mL，差异有统计学意义（t=35.599，P=0.000）。

2.2 研究组治疗前后各指标水平的比较

研究组治疗后的IL-35 水平高于治疗前，AST、ALT、TBil、Na+水平均低于治疗前，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 研究组治疗前后各指标水平的比较（

±s，n=40）

2.3 IL-35 与各指标的相关性分析

IL-35 与AST、ALT、TBil、Na+均呈负相关（P＜0.05）（表2）。

表2 IL-35 与各指标的相关性分析

3 讨论

乙型肝炎病毒（HBV）属于部分双链DNA 嗜肝病毒，机体感染后，能够募集、趋化单核细胞、淋巴细胞等炎症细胞浸润至局部肝脏，持续免疫损伤肝组织，随着病情发展可进展为慢性肝炎-肝硬化-肝衰竭，甚至肝细胞癌。HBV 感染后的临床转归取决于病毒数量、毒性、宿主的免疫应答能力，病毒感染后清除和防御病毒感染的关键在于机体的免疫应答能力[8-9]。IL-35是IL-12 细胞因子家族中的新成员，是由EB 病毒诱导基因3 和IL-12 p35 亚基的表达产物通过共价结合形成的异源性二聚体，在抑制炎症应答、维持调节性T 淋巴细胞功能中起重要作用。IL-35 还是机体重要的免疫抑制性细胞因子，免疫抑制效应包括以下几点：①通过间充质感细胞或直接诱导生产IL-35 调剂性B 细胞（Bregs），拮抗B 细胞增殖；②抑制效应T 细胞和诱导生成iTR35 细胞； ③下调DC 细胞表面的CD86、MHCⅠ/Ⅱ、CD8α、CD11c、CD40 等分子表达，促使细胞分泌IL-10； ④对巨噬细胞向M2 型分化起到促进作用，抑制M1 巨噬细胞分化等，最终发挥免疫负相调控作用[10-12]。本研究中，研究组血清IL-35水平低于对照组（P＜0.05），提示IL-35 水平与重型肝炎发生密切相关。分析原因在于HBV 可经HBx/NF-κB信号通路使IL-35 亚基启动子活性增强，诱导肝细胞分泌IL-35，增加慢性HBV 感染患者肝脏IL-35上调表达，减少肝细胞内源性IL-6 分泌，发挥抗HBV活性。

PDF 能通过大孔径中空纤维膜，滤出血液中含有蛋白结合毒素的血浆并丢弃，再经对流、弥散过程将水溶性毒素清除，最后将膜内保留的白细胞、红细胞、凝血因子、血小板等成分和体外新鲜血浆一起会输体内，不仅能清除各种有害物质，还能减少凝血因子和蛋白质的丢失，补充必要物质，维持机体酸碱、水电解质平衡与血流动力学稳，改善内环境，暂时替代衰竭肝脏的部分功能，为肝细胞再生及肝功能恢复创造条件或等待机会进行肝移植，疗效肯定[13-15]。相关研究[16]显示，PDF 治疗后AST、ALT、TBil、球蛋白（GLB）低于治疗前，提示PDF 能有效改善重型肝炎肝功能。本研究中，研究组治疗后AST、ALT、TBil、Na+水平低于治疗前（P＜0.05），与上述研究结果相似，同时治疗后IL-35高于治疗前；IL-35 与AST、ALT、TBil、Na+呈负相关（P＜0.05），提示检测血清IL-35 水平可评估重型肝炎治疗效果，预测预后。IL-35 能通过抑制HBV 特异性CD8+ T 细胞和促进Tregs 细胞分泌IL-10，抑制抗病毒免疫，维持病毒感染慢性化；通过早期T 细胞G1 期细胞分裂形成阻碍，抑制Th1、Th17、树突状细胞等致炎T 淋巴细胞活性，发挥免疫抑制和抗炎功能，下调IL-17 等致炎因子和促进IL-10 等抗炎因子释放；促进调节T 细胞的增殖、增强其抑制功能，参与疾病进展[17-18]。IL-35 能通过机体特定的信号通路，结合T 细胞表面的受体，产生新型免疫细胞，抑制免疫；抑制CD4+ T 细胞分化成为Th17 细胞，使机体清除HBV 能力减弱。IL-35 还能促进STAT1 信号通路活化，诱导B 细胞转化为Bregs 细胞，促进IL-35+ Bregs细胞形成，其与CD19+B 细胞共培养后能够抑制B 细胞增殖，发挥调控免疫作用；还能经抑制IL-4 和GATA3 表达，阻碍Th2 细胞增殖，还可对Th2 细胞向Tregs 细胞转变进行调控[19-20]。

综上所述，IL-35 在重型肝炎发病过程中起关键重要，检测LI-35 水平能评估重型肝炎患者预后，指导临床治疗。

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