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目前，准分子激光角膜原位磨镶术（laser-assisted in situ keratomileusis，LASIK）已被广泛应用于矫正屈光不正，飞秒激光的引入使得该种手术更为精准，获得了满意的增视效果。干眼是该种手术较为常见的术后并发症，使得部分患者的生活质量受到严重影响[1]。自体血清眼水用于干眼的治疗效果肯定，但传统配置过程中，为避免污染，引入的防腐剂或抗菌素不利于眼表的修复。本研究应用无防腐剂自体血清对飞秒激光LASIK 后中、重度干眼患者进行治疗，取得了较为满意的治疗效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年8月～2019年8月在我院行飞秒激光制瓣的LASIK 后患者，术后1月复诊时确诊为干眼（中、重度）的患者42 例（84 眼），其中男16 例，女26 例；年龄18～36 岁。纳入标准：同时满足以下三项[2]，具体如下。①有干燥感、异物感、烧灼感、疲劳感、不适感、视力波动等主观症状之一者，填写眼表疾病指数[3]（ocular surface disease index，OSDI），OSDI 问卷评分＞22 分者；②泪膜破裂时间（BUT）≤10 s 或Schirmer I试验结果（无表面麻醉）≤10 mm/5 min；③有角结膜荧光素染色阳性者。排除标准：①严重贫血患者；②干燥综合征或其他全身疾病所致干眼患者；③眼表急性感染患者；④乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒、人类免疫缺陷病毒阳性者。

根据随机数字表法将患者分为对照组和实验组。对照组21 例（42 眼），男7 例，女14 例；年龄18～36岁。实验组21 例（42 眼），男9 例，女性12 例；年龄19～34岁。两组患者的性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。所有患者均获完全知情同意，同时本研究获得我院医学伦理委员会审核批准。

1.2 方法

对照组患者采用0.1%玻璃酸钠滴眼液（爱丽，参天制药，生产批号：3HT0091）点眼的常规治疗，每日6次。实验组患者采用无防腐剂自体血清眼水治疗，患者入组后，用灭菌真空采血管经肘前静脉采集全血20 ml，标记后室温下静置2 h，离心机3500 r/min 离心15 min。无菌实验室超净工作台内抽取上层血清，生理盐水稀释至20%后分配封装于4 支带细菌滤过装置的眼水瓶内（OSD 型眼水瓶，美国Aptar 公司），编号后，交予患者，并告知保存和使用方法：避光直立放置，开启前-20℃保存，开启后4℃保存，每日6 次滴双眼，开启1 瓶后限使用1 周，之后每周依次开启新的眼水瓶使用。两组患者局部点眼连续治疗28 d，于治疗后7、14、28 d 定期随访。

1.3 观察指标及评价标准

所有患者于治疗后7、14、28 d 复诊，记录治疗前和治疗后各时间点的主观症状评分、客观体征检查结果和不良反应发生情况。治疗结束后，实验组行自体血清眼药水污染情况检测。

1.3.1 主观症状评估采用国际通用的OSDI 问卷评估主观症状，OSDI 值=所有回答问题的总分×25/回答的问题数。正常：≤12 分；轻度干眼：＞12～22 分；中度干眼：＞22～32 分；重度干眼：＞32～100 分[3]。

1.3.2 客观体征检查 ①BUT 检查：使用生理盐水润湿的荧光素染色条（天津晶明新技术开发有限公司）行眼表染色，裂隙灯钴蓝光下观察，嘱患者自然瞬目2～3 次后保持睁眼，秒表记录泪膜首次出现黑斑的时间。②角膜荧光素染色：上述方法行眼表染色，裂隙灯下观察，将角膜按颞上、颞下、鼻上、鼻下象限分为4个区，每个区为0～3 分，无染色为0 分，1～30 个点状着色为1 分，＞30 个点状着色但染色未融合为2 分，出现角膜点状着色融合、丝状状物及溃疡等为3 分，各区评分后相加为总分值。③Schirmer I 试验：使用标准泪液检测滤纸条检测（天津晶明新技术开发有限公司），无表面麻醉下置于下穹隆中外1/3 处，测试5 min 记录滤纸润湿长度，滤纸润湿长度与泪液分泌量成正比。

1.3.3 不良反应发生情况记录点眼后是否有眼部刺激状和眼表损伤等情况发生。

1.3.4 自体血清眼药水污染情况检测实验组患者于治疗后28 d 时回收全部眼药水瓶，超净工作台内剪开瓶口，吸取剩余自体血清送检行细菌及真菌培养。

1.4 统计学方法

采用SPSS 13.0 统计学软件进行数据分析，符合正态分布的计量资料采用均数±标准差（

±s）表示，两组间比较采用t 检验，不符合正态分布者转换为正态分布或转换变量后行统计学分析；计数资料用率表示，组间比较采用χ2 检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者治疗前后OSDI 评分的比较

两组患者治疗前及治疗后7 d 的OSDI 评分比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后14、28 d，两组患者的OSDI 评分均低于治疗前，且实验组低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组患者治疗后7 d 的OSDI 评分分别与本组治疗前比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表1）。

表1 两组患者治疗前后OSDI 评分的比较（分，

±s）

与同组治疗前比较，①P＜0.05；与对照组同时间点比较，②P＜0.05

2.2 两组患者治疗前后客观体征指标的比较

2.2.1 两组患者治疗前后BUT 的比较两组患者治疗前及治疗后7 d 的BUT 比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后14、28 d，两组患者的BUT 均长于治疗前，且实验组长于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组患者治疗后7 d 的BUT 分别与本组治疗前比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表2）。

表2 两组患者治疗前后BUT 的比较（s，

±s）

与同组治疗前比较，①P＜0.05；与对照组同时间点比较，②P＜0.05

2.2.2 两组患者治疗前后角膜荧光素染色评分的比较两组患者治疗前的角膜荧光素染色评分比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；实验组患者治疗后7、14、28 d的染色评分均低于治疗前，对照组患者治疗后14、28 d的染色评分均低于治疗前，差异有统计学意义（P＜0.05）；对照组治疗后7 d 的染色评分与治疗前比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；实验组患者治疗后7、14、28 d 的染色评分均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表3）。

表3 两组患者治疗前后角膜荧光素染色评分的比较（分，

±s）

与同组治疗前比较，①P＜0.05；与对照组同时间点比较，②P＜0.05

2.2.3 两组患者治疗前后Schirmer I 试验结果的比较两组患者治疗前及治疗后7、14 d 的泪液分泌量比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后14、28 d，两组患者的泪液分泌量均多于治疗前，且在治疗后28 d，实验组的泪液分泌量多于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组患者治疗后7 d 的泪液分泌量分别与本组治疗前比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表4）。

表4 两组患者治疗前后Schirmer I 试验结果的比较（mm，

±s）

与同组治疗前比较，①P＜0.05；与对照组同时间点比较，②P＜0.05

2.3 两组患者的不良反应发生情况

在治疗过程中，两组患者均未见不良反应发生。

2.4 自体血清眼药水污染情况的检测结果

所有送检标本细菌及真菌培养结果均为阴性，即自体血清眼水在使用和保存过程中未受到细菌及真菌的污染。

3 讨论

干眼是由于泪液的量或质或流体动力学异常引起的泪膜不稳定和（或）眼表损害，从而导致眼不适症状及视功能障碍的一类疾病[4]。准分子激光屈光手术日渐成熟，而LASIK 以其高度的安全性、有效性、稳定性和可预测性已成为最主要的屈光手术方式之一。但无论飞秒激光还是传统制瓣的LASIK 后均会发生不同程度的干眼[5]，发生机制主要有以下几点：①LASIK 中角膜瓣制作时将不可避免会切断眼12 点和3 点位置的神经纤维，虽然有报道证实将角膜瓣的蒂做在鼻侧，以减少神经纤维的损伤，从而减少干眼的发生，但激光在切削中央部角膜基质过程中也会损伤到角膜神经纤维，继而导致角膜知觉下降，瞬目反射减少，导致泪液挥发增加，并影响了泪膜重建，从而引起干眼[6-7]；②角膜基质的切削去除导致LASIK 后的角膜曲率改变，致使泪膜的表面张力和稳定性的下降；③术中角膜刀、负压吸引环等手术器械的机械刺激、反复表麻药的使用和术后使用滴眼液的毒性损伤，都会损伤角膜上皮细胞壁的微绒毛及杯状细胞，使泪液中黏蛋白成分减少，导致泪膜稳定性下降[8-9]。此外，有研究指出飞秒激光或机械板层刀制瓣的方式不同可能会导致LASIK 后神经修复速度的差异和影响术后干眼发生[10-11]，因此本研究只选择目前更为普遍的飞秒激光制瓣的LASIK 后患者入组观察。

自体血清是治疗中、重度干眼的有效方式。自体血清用于治疗LASIK 后干眼的作用机制，除了直接的眼表润滑及各种生长因子的修复眼表上皮作用外，其内含有的神经生长因子（NGF）等，理论上可诱导LASIK 损伤的角膜神经修复，进而改善眼表泪液分泌反射系统，这或许是自体血清治疗LASIK 后干眼的重要机制。本研究中，两组患者经治疗后主观症状和客观体征均有改善，且与对照组比较，实验组患者的指标改善更快、更显著，提示与常规的人工泪液相比，自体血清滴眼液在LASIK 后干眼治疗中更具优势。

虽然自体血清滴眼液的配置是在无菌条件下进行的，但因其内含有较多的蛋白成分，临床使用和保存过程易被微生物污染，这使得其在临床中的使用大大受限。目前临床中有研究使用抗菌素作为自体血清的稀释剂，或在配置过程中加入某种防腐剂以减少其在使用和保存过程中污染的概率，但引入的防腐剂及抗菌素的眼表毒性作用不容忽视。已有大量研究证实了多种抗菌素和防腐剂对角膜上皮生长的抑制作用及其对泪膜稳定性的负面作用[12-13]。因此理想化的自体血清滴眼液的使用方式是不使用防腐剂或抗菌素稀释，方便使用并可有效避免污染的容器来封装自体血清。本研究中选用带细菌滤过装置的眼水瓶对自体血清进行灌装和封存。该种眼水瓶采用双通道路径的独特设计，挤压瓶体滴药时，液体通道通过带有弹簧的阀门式瓶嘴单相不可逆地排出瓶外，放松瓶体后吸入瓶内补充负压的空气是通过另一侧0.2 μm 的微孔滤膜进入，从而保证瓶内的液体不被外界病原菌污染，实现眼科门诊自行配置不含防腐剂眼水的目的。本研究中实验组患者最后一次随访时回收眼药水瓶，菌培养结果均为阴性，提示这种眼水瓶在临床使用过程中使得其内液体不被外界病原菌污染的可靠性。本研究配置的自体血清滴眼液采用生理盐水作为稀释液，只起到稀释和缓冲的作用，未加入抗菌素或防腐剂，从而避免了眼表的毒性作用。

临床中使用的自体血清被配置成10%～20%的不同浓度，用于治疗包括中重度干眼、角膜上皮持续性缺损等眼表损害，均被证实了有效性[14-17]。但由于自体血清中包含的某些因子，如转化生长因子β（TGF-β）等浓度远高于正常泪液，而TGF-β 等因子过高浓度反而会抑制角膜上皮的生长[18-19]。本研究使用20%浓度的自体血清用于LASIK 后干眼治疗效果显著，治疗后7、14、28 d 时，实验组的荧光素染色评分更低（P＜0.05），提示该浓度血清可显著促进眼表上皮修复，治疗过程中未见眼表损害。更低的浓度也避免了因抽取过多静脉血带来的患者畏惧和相关并发症。

综上所述，无防腐剂自体血清滴眼液可安全、有效地用于治疗LASIK 后的中、重度干眼患者，与常规人工泪液治疗相比更具优势，可迅速改善患者的主观症状，同时迅速改善泪膜稳定性并促进角膜上皮修复，无明显不良反应。配置过程中采用无需防腐剂添加的眼水瓶灌装和封存自体血清滴眼液可有效避免微生物污染，过程简单、快捷，适合临床推广使用。

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