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缺血性脑卒中（CIS）是指由于患者颈动脉或椎动脉闭塞、狭窄或供血不足，而导致脑组织坏死的总称[1-2] ，是各神经科最常见的疾病。患者发病后，典型的症状表现如一过性局限性神经功能障碍、对侧肢体突发性麻木和感觉功能障碍等[3-4] 。由于病情进展十分迅速，甚至短至数分钟即可死亡，患者的筛查和预防工作尤为重要。近年来，随着医学技术的发展，越来越多的临床试验证实，遗传因素是患者出现颅外径内动脉和动脉硬化根本原因之一，相应的识别出CIS的易感基因，表达出致病的遗传本质，可进一步提高患者筛查结果的准确性。本研究对巨噬细胞移动抑制因子（MIF）-173G/C多态性与CIS的关联进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2017年12月～2018年11月在牡丹江医学院附属红旗医院治疗的146例CIS患者作为观察对象。纳入标准：①符合《中国急性缺血性脑卒中治疗指南 2010》中的CIS诊断标准[5]，且经头颅CT或 MRI证实；②首次发病患者；③个人资料完整。排除标准：①出血性脑卒中患者；②因外伤导致的CIS患者；③精神类疾病患者；④肝脏等脏器重度功能障碍患者；⑤免疫系统疾病患者等。将以上患者纳入卒中组，其中，男 78例，女 68例；年龄 46～67岁，平均（56.56±6.24）岁。选择同期在体检中心体检的143例健康人员作为比较对象，将其纳入健康组，其中男79例，女64 例；年龄 42～65 岁，平均（55.83±5.87）岁。两组的一般情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会同意，患者知情同意后，开始具体的研究工作。

1.2 实验方法

所有调查对象禁食12 h后，在次日晨抽取静脉血5 ml进行检测。具体方法如下。扩增MIF：提取基因组DNA，提取方法为酚氯仿抽提法。应用Primer 5.0软件设计引物：上游引物为5′-ACTAAGAAAGACCCGAGGC-3′，下游引物为 5′-GGGGCACGTTGGTGTTTA-3′，目标片长度为366 bp，引物由上海英俊生物技术有限公司合成。使用PE公司生产的9700型PCR扩增仪扩增。扩增反应体系均为10 μl，PCR反应程序为34个循环，依次为预变性95℃、变性95℃、退火54℃和延伸72℃，时间分别为5 min、30 s、40 s和45 s。以上完成后，延伸10 min。用浓度为2%的琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物[6-8] ；然后进行多态性分析。酶切体系包括5 μl的PCR扩增产物，5 U的 Alu-I限制性内切酶等，酶切温度为37℃，酶切时间10 h。配置浓度为3.0%的琼脂糖凝胶，取8 μl酶切产物置于0.5×TBE溶液中电泳，电压90 V，电泳时间50 min。结束后，观察结果并拍照。最后进行DNA测序，由上海英俊公司完成测序工作[9-11] 。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0溶解性软件分析结果，计数资料用百分率（%）表示，采用 χ2 检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组MIF-173G/C多态性位点基因型的比较

健康组和卒中组在GG、GC和CC基因型频率整体比较，差异有统计学意义（P<0.05）。在任意一项基因型频率方面比较，两组在GC型基因频率比较，差异无统计学意义（χ2 =0.469，P=0.493），但卒中组 GG型基因频率低于健康组（χ2 =7.624，P=0.006），CC 型基因频率高于健康组，差异有统计学意义（χ2 =9.393，P=0.002）（表1）。

表1 两组MIF-173G/C多态性位点基因型的比较[n（%）]

2.2 两组MIF-173G/C等位基因频率的比较

卒中组MIF-173G/C等位基因G的频率低于健康组，等位基因C的频率高于健康组，差异均有统计学意义（P<0.05）（表2）。

表2 两组MIF-173G/C等位基因频率的比较[n（%）]

3 讨论

CIS是我国最为常见的一类脑血管疾病，指由于脑部供血不足而导致脑组织坏死的总称。其致病因素较为复杂，如颅外径内动脉或椎动脉狭窄、闭塞或血栓形成等，均可导致发病[12-14] 。患者发病后，典型的症状表现如突发性眩晕、单侧肢体或面部麻木、全身乏力和血压异常波动等，由于CIS具有病情进展迅速的特点，即使患者立刻接受治疗，仍有80%的患者因病致残，如偏瘫和吞咽功能障碍等，严重影响患者后期的生存质量，死亡率高达40%左右[15-16] 。因此对CIS患者来说，疾病的筛查和预防工作，意义尤为重要。

近年来，随着医学技术的发展，已经证实高血压、糖尿病和肥胖症等患者是脑卒中发病的高危人群，以上患者也成为了脑卒中筛查的重点对象。但高血压等疾病可以说是“表”，其遗传因素才是内在的“本”，患者的发病是基因与环境和生活习惯等因素综合导致的结果。

在基因的研究方面，美国杜克大学医学中心医学研究所1995年成功克隆了MIF基因。其定位于22号染色体ql1.23区，全长为2119 bp，含有3个外显因子和2个内含子。高显示液相染色体图谱对MIF进行分析，发现MIF基因在+254T/C、+656C/G和-173G/C存在多态性位点。其中前两者位于内含子区，不表达，而-173G/C位于外显子区，因此MIF-173G/C具有更高的研究意义和价值，也成为现阶段医学研究的热点和重点。袁琳等[17] 以130例卵巢癌患者作为研究对象，研究MIF-173G/C多态性与患者遗传易感性间的关系，发现与携带MIF-173GG基因的人群比较，携带MIF-173GC/CC基因的人群罹患卵巢癌的风险降低了43.2%；蔡科科[18] 将98例前列腺癌患者与80例正常人群进行MIF-173G/C基因型比对，证实等位基因C增加了前列腺癌的发病风险等；周发琼等[19] 对恩施地区土家族银屑病患者MIF-173G/C多态性与银屑病的发病进行了关联研究，分析结果表明，银屑病患者CC基因型和C等位基因频率显著高于非银屑病患者。

根据以上研究结果，可见MIF-173G/C多态性与多种疾病的发病密切相关，本研究将其引入到脑卒中的研究中，从遗传因素的角度，进一步筛查出重点的防治对象。本研究结果显示，在MIF-173G/C多态性位点基因型分析结果方面，卒中组GG型基因频率低于健康组，CC型基因频率高于健康组（P<0.05）；在MIF-173G/C等位基因频率比较结果方面，卒中组MIF-173G/C等位基因G的频率低于健康组，等位基因C的频率高于健康组（P<0.05）。

另外考虑到脑卒中的发病在我国具有一定的地域性特点，相关资料统计，黑龙江脑卒中的发病率位于全国榜首，发病率是南方各省市平均值的5～6倍，是北方各省市平均值的2～3倍[20-22] 。而不同省份的患者和人群在基因角度本身就具有一定的区别，袁宁[23] 通过DNA测序技术和PCR-RFLP技术，对我国多个省份居民的MIF-173G/C进行研究和比较，发现湖南与浙江和广东居民MIF-173G/C等位基因频率分布趋势明显不同，却与日本人基因频率分布趋势相似。因此本研究结果同样仅对黑龙江较为适用。另外由于本实验例数和实验设备等条件的制约，在实验结果方面，有待其他专家或同行进一步验证。

综上所述，携带MIF-173CC基因的人群罹患脑卒中的风险更高，另外等位基因C增加了脑卒中的发病风险，建议在未来的脑卒中临床筛查中，将以上人群纳入重点的观察和防治对象。

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