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生脉饮（党参方）由党参、麦冬、五味子等3 味药材组成，具有益气复脉、养阴生津的功效。用于气阴两亏、心悸气短、脉微自汗[1]。

生脉饮（党参方）[1]现收载于部颁标准第10 册，除合剂的常规检验外，只有一项相对密度检验项。生脉饮中五味子具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心等的作用，在方中发挥重要作用[2-3]。因此，参考相关文献[4-17]，本实验采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）测定生脉饮中五味子醇甲的含量，为生脉饮（党参方）的质量控制方法提供理论依据，现报道如下。

1 仪器与材料

安捷伦1100 高效液相色谱仪（美国Agilent 公司）；五味子醇甲对照品（批号110857-201714，购于中国食品药品检定研究院）；甲醇（美国Fisher）为色谱纯；纯化水（Millipore；Milli-Q Direct 8）；0.45 μm 微孔滤膜（上海市新亚净化器件厂）。生脉饮（党参方）（840001批、840002 批、840003 批）、阴性样品制备所用的原料均由颈复康药业集团有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用安捷伦C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（62∶38），检测波长为250 nm；流速：1.0 ml/min，柱温：常温。分离度应＞1.5。理论板数按五味子醇甲计算应≥2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称定五味子醇甲对照品，加甲醇制成浓度为0.08336 mg/ml 五味子醇甲的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取生脉饮（党参方）5 ml，置于10 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.4 阴性样品的制备

按生脉饮（党参方）处方配制不含五味子的阴性样品，依“2.3”项下方法制备即得。

2.5 专属性试验

按“2.1”项下的色谱条件，将“2.2”项下的对照品溶液、“2.3”项下的供试品溶液及“2.4”项下的阴性样品溶液，分别注入高效液相色谱仪，进行测定。结果显示，阴性无干扰（图1）。

图1 生脉饮（党参方）的HPLC 图

A.缺五味子阴性样品；B.五味子醇甲对照品；C.生脉饮（党参方）

2.6 线性关系实验

精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成含五味子醇甲0.4168、0.2084、0.08336、0.04168、0.02084 mg/ml的对照品溶液，按照“2.1”项下色谱条件注入高效液相色谱仪。以对照品峰面积为纵坐标（Y），浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，见图2。得回归方程Y=2×107X（r=1，n=5），结果表明，五味子醇甲在0.02084～0.41680 mg/ml 范围内，线性关系良好。

图2 标准曲线图

2.7 精密度实验

取“2.2”项下的对照品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件，各重复进样6 次，记录每次的色谱峰面积，计算RSD 值，结果显示五味子醇甲RSD 为0.23%，表明仪器精密度良好。

2.8 重复性实验

取同一批已知浓度生脉饮（党参方），精密量取6份，按“2.3”项下的制备方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果显示，五味子醇甲的平均含量为168.7 μg/ml，RSD 为0.87%（n=6）。表明重现性良好。

2.9 稳定性实验

按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别在0，1，2，3，......，22，23，24 h 进样10 μl，记录色谱峰面积，结果显示，峰面积RSD 值为0.4%。表明样品在24 h 内稳定。

2.10 加样回收实验

精密量取已测定五味子醇甲含量的生脉饮（含量为0.1687 mg/ml）6 份，精密吸取25 ml 至50 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀；再精密吸取5 ml，分别加入“2.2”项下的五味子醇甲对照品溶液5 ml，混匀，即可。按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果显示，五味子醇甲平均回收率为102.9%，RSD 值为0.7%（表1）。

表1 加样回收实验结果（n=6）

2.11 定量限

取标准曲线中最低浓度的对照品，按“2.1”项下的色谱条件进行检测，然后按倍数稀释对照品溶液。结果五味子醇甲浓度为0.2084 μg/ml 时信噪比为10∶1，定量限为2.084 ng。

2.12 检测限

取标准曲线中最低浓度的对照品，按“2.1”项下的色谱条件进行检测，然后按倍数稀释对照品溶液。结果五味子醇甲浓度为0.08336 μg/ml 时信噪比为3∶1，检测限为0.8336 ng。

3 样品含量测定

按上述所建方法，测定颈复康药业集团有限公司生产的生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量，每批样品做平行样，结果取平均值（表2）。结果表明，3 批五味子醇甲含量分别为：840001 批1.827 mg/支，840002批1.736 mg/支，840001 批1.703 mg/支，3 批生脉饮（党参方）中五味子醇甲整体平均含量为1.755 mg/支，平均RSD 值为0.1%。

表2 生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量（n=2）

3 讨论

生脉饮（党参方）疗效较好，受广大患者的好评。但现行标准中除合剂的常规检验外，只有一项相对密度检验项，并没有含量测定项，为确保生脉饮药品质量，本实验对生脉饮（党参方）的质量控制进行了研究。五味子为处方中一味重要中药材，其中含木脂素类成分，以五味子醇甲为代表，本实验采取高效液相色谱法对生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量进行研究。

本实验建立了生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量的测定方法，具有准确、灵敏度高、操作简单、分离效果好、阴性无干扰等优点。实验结果提示，3 批生脉饮（党参方）中五味子醇甲的平均含量分别为1.827、1.736 和1.703 mg/支，整体平均含量为1.755 mg/支，平均RSD 值为0.1%。本实验可为生脉饮（党参方）中质量控制研究提供理论依据，可更为全面的反映药品质量，亦对其他制剂研究提供借鉴。

实验过程中也对色谱条件进行了考察：采用Agilent 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；YMC-pack 色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）两个色谱柱进行样品分离，结果提示，Agilent 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）的分离效果更好。流动相选取甲醇-水（62∶38）和甲醇-水（56∶44）两个流动相进行样品分离，结果提示，甲醇-水（62∶38）分离效果更好。对前处理方法做了考察，最终确定为直接稀释取续滤液即得，操作步骤简单，省时省力。

本研究结果提示，五味子醇甲的进样量在0.02084～0.41680 mg/ml 范围内，与其峰面积呈良好的线性关系，回归方程Y=2×107X（r=1，n=5）；精密度、稳定性、重复性良好。平均加样回收率为102.9%（RSD=0.7%）。

从目前研究数据来看，颈复康药业集团有限公司生产的3 批生脉饮（党参方）质量控制较为稳定。还有待搜集更多批次生脉饮（党参方）进行研究分析。

综上所述，本研究所建立的方法，准确、灵敏、简便，可用于生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量测定

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