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维生素在儿童的正常生长发育中必不可少，合理均衡地摄入维生素是儿童体格、智力正常发展的保证。维生素E发现于20世纪20年代，因为和人类的健康息息相关，一直受到广大学者的关注，对其研究也越来越多。维生素E又称生育酚（tocopherol）或抗不育维生素，为脂溶性维生素，金黄色或淡黄色黏稠油状物，易溶于脂肪、乙醇等有机溶剂，不溶于水，对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感。维生素E能有效减少皱纹的产生、降低细胞耗氧量、抗动脉粥样硬化、抑制脂质过氧化及形成自由基、降低胆固醇、预防高血压、防止血液凝固、预防治疗甲状腺疾病、改善血液循环、保护皮肤免受紫外线和污染的伤害、加速伤口愈合等作用[1-4]。同时研究提示维生素E具有抗氧化、免疫调节、控制炎症、基因表达和认知能力的调控等作用[5-6]。人体自身不能合成维生素E,对儿童血浆中维生素E的浓度进行测定不仅可以对儿童营养状况进行调查研究，也可以为临床上合理补充维生素E提供相关依据。维生素E的测定方法有二阶导数光谱法、HPLC法、气相色谱法等，各种方法各有特点[7-15]。超高液相色谱（UPLC）是以超高速、超高灵敏度、超高分离度为特点的液相色谱。本研究参照高效液相色谱法，改用UPLC法测定，旨在建立一种快速、准确测定儿童血浆中维生素E浓度的方法，现报道如下。

1 仪器及试剂

1.1 仪器

Waters-ACQUITY-UPLC超高效液相色谱仪（美国Waters公司），Sar-torius BT125D电子天平（德国赛多利斯仪器系统有限公司），Empower数据处理系统，MULTIFUGE X1R超高速离心机（美国Thermo公司），XW-80A涡旋混合器（上海医科大学仪器厂）。

1.2 试剂

对照品：维生素E（中国药品生物制品检定所，批号：100138-200603）；甲醇、乙腈：色谱纯（美国 Fisher公司）；水：自制超纯水，水机（PURELAB ELGA公司，英国）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用Waters公司BEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；取处理好的溶液 5 μl进样（进样量），以0.3 ml/min 的流速测定；甲醇-水（96∶4）为流动相；柱温为30℃；选择291 nm为检测波长（维生素E）。

2.2 样品

储备液的配制：精密称定维生素E对照品5 mg，用甲醇稀释到50 ml量瓶中，充分混匀既得维生素E的储备液（1000 mg/L）。血样预处理：取儿童血浆 200 μl，按v/v为8：2的比例加入甲醇和异丙醇140 μl，涡旋30 s，加入正己烷1 ml，涡旋1 min，在室温条件下高速离心 120 s（12 000×g），取离心后上清液 700 μl，吹干，用100 μl的甲醇溶液复溶。

2.3 线性关系

取空白儿童血浆10份（每份200 μl），将不同浓度维生素E 50 μl加入空白血浆中，配成浓度为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.2 μg/ml溶液，按“2.2”操作，按拟定色谱条件以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，作线性回归，得标准曲线方程：y=118296x+11644，r2=0.9997,线性范围为 1～60 μg/ml。

2.4 空白试验

血浆按照“2.2”的处理方法和上述色谱条件进行实验，实验结果发现血浆中内源性杂质对维生素E不造成干扰（图 1、图 2）。

图1 浓度为19.56 μg/L.L-1维生素E标本的色谱图（保留时间为t=1.70 min）

图2 维生素E标准品经 2.2处理后血药浓度为20 μg/mL.L-1色谱图（保留时间为t=1.62 min）

2.5 稳定性试验

2.5.1 储备液稳定性试验

取储备液分别在 1、3、5 d，配制标准使用液 4 μg/ml，50 ug/ml直接进样测定，峰面积 RSD 为 0.7%（4 μg/ml）、2.1%（50 μg/ml），表明储备液至少在 5 d 稳定。

2.5.2 血样稳定性试验

取同一供试品溶液，按上述色谱条件，采用高中低浓度的维生素E标本，在0、8、16、24 h进行测定，得到的峰面积RSD分别为2.4%（高浓度组）、2.1%（中浓度组）、1.1%（低浓度组）。结果提示血浆中的维生素E在24 h内稳定。

2.6 重复性试验

取同一个批号的维生素E对照品精密称定5 mg，按样品测试条件进行测定，求得维生素E含量的RSD值为1.2%

2.7 回收率试验

在标本中加入0.5～2倍的维生素E标准品后，按血样预处理的方法进行处理，按照“2.1”的色谱条件测定，计算回收率，回收率在97.2%～110.0%，RSD值为 0.63%（表 1）。

表1 维生素E血药浓度的回收率实验统计表

2.8 样品测定结果

本实验采用UPLC法测定300例健康儿童血浆中维生素E的含量，测得浓度范围为16.31～32.23 μmol/L，平均值为（24.27±7.69） μmol/l。

3 讨论

维生素E易溶于正己烷而与水溶性成分分离，可达到提纯的作用，本研究中使用少量异丙醇溶解、定容，增大了测定浓度。选择吸收波长291 nm作为测定波长，灵敏度高，响应值强，主峰周围无其他杂峰干扰，专属性强。本研究建立了UPLC测定儿童血浆中维生素E浓度的方法，结果提示本方法分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于儿童血浆中维生素E含量的测定，可为临床补充维生素E提供依据。维生素E有着广泛的药物功能，尤其是其优良的抗氧化性，在新生儿疾病的预防和治疗方面具有积极作用和重要意义，也是新生儿正常生长发育所必需的物质[16]。王晓燕等[16]总结了维生素E在儿科中的应用发现维生素E作为体内重要的抗氧化剂在治疗新生儿缺血性脑病、贫血、新生儿硬肿、新生儿高胆红素血症和新生儿尿布皮炎等疾病中都有一定的效果。口服维生素E后经过被动扩散进人到小肠上皮细胞,在人体内吸收率存在差异，不同个体中的吸收率为20%～60%不等；在这个过程中胰腺功能、胆汁酸盐活性、脂肪的摄入量等因素都会影响其吸收率。

维生素E在体内不能合成，必须从食物中获得，目前普遍认为成人维生素E的日需要量为15～20 mg,过量使用维生素E会导致机体免疫能力下降，同时还会影响其他维生素的吸收。近年来对维生素E的日补充剂量和毒副作用的研究引起了广大学者的关注，梁世秀[17]研究了海参对维生素E的需要量以及维生素E对海参非特异免疫的影响，分别用不同剂量的维生素 E 喂养海参 60 d，结果显示 100 mg/（kg·d）维生素E喂养组生长速率最快，体内超氧化物歧化酶活性最高，因此适量补充维生素E有利于增加机体的免疫力。对于儿童维生素E的日补充剂量参照成人标准，但是由于儿童特殊的身体结构和生理功能，笔者认为维生素E的成人补充剂量不能完全反应儿童维生素E的补充剂量，因此，应该对不同年龄阶段体内维生素E的正常含量做出评价。不同年龄阶段或者不同个体维生素E的日补充剂量也是今后的研究方向，特别是对早产儿和新生儿维生素 E的治疗剂量的研究也亟待解决。

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