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p140Cap基因目前被认为是一种抑癌基因，在乳腺癌细胞如MCF7和T47D中有表达，通过去除和获得p140Cap，发现影响乳腺癌细胞运动、侵袭和体内肿瘤生长。p140Cap蛋白在多种肿瘤组织和细胞株中表达减弱或者消失，包括肾癌、肺癌、前列腺癌等[1-2]。

乳腺癌的发生、发展是一个复杂过程，乳腺癌浸润性生长和远处转移导致患者预后差，乳腺癌切除术后容易引起肝脏和肺脏转移，单纯的手术技巧改善无法降低乳腺癌复发的风险。乳腺癌的化疗目前处于一个瓶颈期，研究发现p140Cap在乳腺癌组织中的表达明显降低或缺失，提示p140Cap可能是一个抑癌基因，其在乳腺癌的发生、发展中起着重要的作用。

p140Cap蛋白通过调节整合素和生长因子受体在肿瘤的形成中起着抑制肿瘤的作用[3]。整合素是细胞表面重要受体，通过将细胞外基质的化学成分和力学状态信息传入细胞，介导细胞和细胞间及细胞外基质间相互作用。对于癌症，整合素也为肿瘤迁徙性散布所必需，如肿瘤细胞转移、侵袭和目标组织的定植[4]。p140Cap蛋白作为整合素下游重要的接头分子蛋白，可能起着调节肿瘤转移和侵袭作用，因此通过研究p140Cap蛋白在乳腺癌中的表达，不但能预测乳腺癌的预后，而且有可能作为乳腺癌治疗的潜在靶点。本研究通过免疫组化技术检测p140Cap在乳腺癌中的表达及临床预后意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取符合纳入标准的2012年6月～2017年6月在鹰潭市人民医院就诊住院的246例原发性乳腺癌患者作为病例组，选取60例乳腺癌旁组织作为对照组。

1.2 实验方法

应用免疫组化技术检测p140Cap在246例乳腺癌组织和60例乳腺癌旁组织的表达水平，利用统计学方法分析p140Cap在乳腺癌和癌旁组织中的表达水平、在临床参数（年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期）中及在分子生物学指标[雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体（HER-2）]中的表达水平和相关性。

1.3 实验试剂

用于免疫组织化学染色的一抗多克隆兔抗人p140Cap抗体购自Novus，即用型快捷免疫组织化学MaxVision试剂盒、DAB显色试剂盒购于福州迈新生物技术公司。

1.4 免疫组织化学的步骤

按照抗体及免疫组织化学试剂盒说明书进行，将组织切片脱蜡和水化，放置枸橼酸钠缓冲液中高温抗原修复，PBS溶液冲洗3次，滴加1︰50稀释滴度的一抗，PBS溶液冲洗5次，滴加辣根过氧化物酶二抗，室温30 min，最后，经PBS洗涤后DAB显色，苏木素复染，封片。

1.5 免疫组化结果分析

光学显微镜下观察每张切片，选择4个不同视野，按照染色程度，计算p140Cap阳性和阴性细胞。每个视野的得分按照细胞染色强度和染色阳性细胞所占范围乘积来判断。评分标准：①染色强度计分中，不染色记为0分，淡黄色记为1分，浅褐色记为2分，深褐色记为3分。②染色面积计分中，0～25%细胞染色记为1分，＞25%～＜50%细胞染色记为2分，50%～75%细胞染色记为3分，＞75%细胞染色记为4分。结果取两者评分之乘积，染色强度与阳性细胞百分比乘积≥6分为免疫反应高表达，乘积＜6分判为低表达[5]。

1.6 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行分析，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 p140Cap在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的比较

p140Cap在乳腺癌组织中的阳性表达率为33%，在乳腺癌旁组织中的阳性表达率为70%，p140Cap在乳腺癌组织中的表达降低。p140Cap在乳腺癌组织和乳腺癌旁组织中表达阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 p140Cap在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的比较[n（%）]

与乳腺癌旁组织比较，*P＜0.05

2.2 免疫组化检测p140Cap在乳腺癌旁组织中表达图像

p140Cap在乳腺癌组织中的高表达和低表达如下图（图 1）。

图1 免疫组化检测乳腺癌中p140Cap蛋白表达（细胞质×200）

2.3 免疫组化检测p140Cap在乳腺癌旁组织中表达图像

p140Cap在乳腺癌旁组织中的高表达和低表达见图2。

图2 免疫组化检测乳腺癌旁组织中p140Cap蛋白表达（细胞质×200）

2.4 p140Cap在乳腺癌组织中的表达同临床病理参数关系分析

p140Cap的表达同乳腺癌患者的肿瘤直径、年龄、腋窝淋巴结转移、组织学分级、ER状态、PR状态、HER-2状态有关（P＜0.05），而与患者的肿瘤分期无关（P＞0.05）（表2）。

表2 p140Cap在乳腺癌组织中的表达同临床病理参数关系分析[n（%）]

3 讨论

p140Cap由srcin1基因编码，在人类、小鼠、大鼠、狗、牛和斑马鱼srcin1基因编码是保守的[6-7]。在乳腺癌中，p140Cap通过激活Csk的Src负性调节物，影响乳腺癌的侵袭和远处转移[8-11]。

细胞凋亡指的是在内环境稳定状态下，由基因控制的细胞的自主的、有序的死亡。既往研究发现在大肠癌中，恶性肿瘤细胞出现凋亡，可以对肿瘤治疗起重要作用，p140Cap表达降低会引起大肠癌凋亡，促进肿瘤细胞生长，增强了癌细胞的侵袭和转移的能力[12]。

体外实验显示，p140Cap降低乳腺癌细胞在ECM蛋白中的扩散能力、迁移和侵袭能力。p140Cap静默加速细胞在ECM上早期扩散，诱导成纤维细胞样变形，并且增加细胞移动和侵袭[13]。在乳腺癌细胞中，p140Cap可能通过Src和Rac激活表达控制非依赖性生长，p140Cap高表达抑制体内肿瘤生长，p140Cap低表达增加体内肿瘤的形成[14-15]。

p140Cap在乳腺癌中的表达程度同乳腺癌患者的肿瘤直径、年龄、腋窝淋巴结转移、组织学分级、ER、PR、HER-2状态有关，而与患者的肿瘤分期无关。结合本实验研究，p140Cap在乳腺癌中作为一种肿瘤抑制剂，在细胞增殖、肿瘤生长中具有广泛的作用。

综上所述，目前p140Cap与乳腺癌的研究甚少，本研究提示p140Cap在乳腺癌中起着负性调节作用，其作用机制尚需进一步研究。

[参考文献]

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