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肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）的发病率在世界范围内位列第5，在我国位列第3，且呈逐年上升趋势[1-2]。有研究表明，在HCC的发生、发展过程中，肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophage，TAM）与HCC相互影响、相互作用，促进肝癌发生和发展[3-4]。miRNA在免疫调控中起到重要作用，其中包括miRNA-122。本研究拟探讨TAM中的miRNA-122表达对肝癌的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月～2018年1月在我院进行诊断的20例肝癌患者作为HCC-1组，男11例，女9例；年龄 38～64 岁，平均（45.3±6.4）岁；患者均为原发性肝癌。另选取20例健康人作为C-1组，男15例，女5例；年龄 35～61 岁，平均（41.8±7.1）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会审核批准，所有患者均知晓本研究情况并签署知情同意书。

选取40只健康SD裸鼠，雄性，平均体重（200±25）g，由九江学院动物中心提供[合格证号：SCXK（赣）2007-0005]，将其随机分为HCC组与Scamble组，每组各20只。实时定量检测试剂盒、内切酶、荧光定量PCR检测引物、质粒提取试剂盒、人外周血淋巴细胞分离液于南昌长城生物公司购买。

1.2 方法

1.2.1 采集外周血TAM 分别采集两组患者的清晨空腹静脉血约10 ml，经3000 r/min离心10 min，保留分层液及以上部分于-24℃保存。采用q-PCR法检测两组患者外周血miRNA-122水平。

1.2.2 构建肝癌裸鼠模型 HCC组20只裸鼠皮下注射0.5 ml肝癌Hep-2细胞悬液，密度约为1×105个/ml，建立肝癌裸鼠模型。Scamble组20只裸鼠于皮下注射0.5 ml生理盐水。造模后，每天分别在HCC组与Scamble组中随机选取4只裸鼠模型，采用腹股动脉取血法收集两组裸鼠模型血约5 ml，以3000 r/min离心10 min，保留分层液及以上部分于-24℃保存。采集造模后5 d两组裸鼠模型的外周血单核细胞。

1.2.3 q-PCR法检测miRNA-122水平分别将HCC-1组、C-1组、HCC组与Scamble组得到的外周血单核细胞和TAM种植在6孔板中，经短暂孵育后提取总RNA，以miRNA-122特异性茎环引物进行反转录，以人U6做为内参，采用CT法对miRAN-122进行q-PCR定量分析[5-6]。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（

±s）表示，两组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCC-1组与C-1组患者TAM中miRNA-122水平的比较

HCC-1 组患者的 miRAN-122 水平[（0.52±0.21）ng/ml]显著低于 C-1 组[（0.84±0.43）ng/ml]，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 HCC组与Scamble组裸鼠TAM中miRNA-122水平的比较

造模2 d后，HCC组裸鼠TAM中的miRNA-122水平显著低于Scamble组，差异有统计学意义（P＜0.05）（图1）。

图1 HCC组与Scamble组裸鼠TAM中miRNA-122水平的比较

（*P＜0.05）

3 讨论

受肿瘤源性生长因子尤其是巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）的影响，单核细胞在肿瘤微环境中分化为巨噬细胞，主要包括Ⅰ型巨噬细胞（M1）和Ⅱ型巨噬细胞（M2），二者均具有显著的可塑性、多功能性、极化性等特点[7-8]。但M1和M2巨噬细胞生理功能是绝然不同的。M1是一种典型的活化巨噬细胞，具有分泌促炎性因子、趋化因子、抗原提呈等作用，从而激发免疫应答，发挥免疫监视功能。而M2巨噬细胞为替代性活化巨噬细胞，其功能与M1巨噬细胞相反，其抗原提呈能力较弱，且促进IL-10与TGF-β表达，抑制免疫应答。此外，M2巨噬细胞还具有清除异物、促进伤口愈合、血管再生等作用[9-10]。因此，M2巨噬细胞可通过抑制抗原提呈细胞活性、促进T细胞增殖等方式降低肿瘤细胞免疫应答[11]。

TAM与肿瘤之间存在密切联系。一方面，肿瘤环境可影响单核巨噬细胞分化；另一方面，分化后的TAM又可抑制肿瘤免疫应答，促进肿瘤细胞生长发育。在肿瘤微环境中，单核巨噬细胞浸润到肿瘤组织后，肿瘤组织分泌的IL-6与IL-10因子可通过招募巨噬细胞聚集，产生PEG2，从而诱导并促进巨噬细胞分化为近似M2表型的TAM。而分化成熟的TAM直接分泌EGF、IL-6、CXCL-8等因子维持肿瘤细胞增殖，促进血管生成和抑制获得性免疫[12-13]。此外，TAM具有增殖、迁移、转移等肿瘤新生物的关键特征[14]，其水平与肿瘤生长和转移的下降率成负相关，且较多的临床研究表明，TAM增高与肿瘤患者预后不良成正相关[15-17]。

在肿瘤基质中存在许多巨噬细胞的分泌物，可直接刺激肿瘤细胞的生长和促进肿瘤细胞迁移和转移。这些因子包括上皮生长因子（EGF）、FGF家族因子、TGF-β、血管内皮生长因子、趋化因子和细胞因子。IL-1β可促进肿瘤转移。在IL-1β基因的敲除鼠中黑色素瘤细胞或乳腺、前列腺肿瘤均不会转移，表明了IL-1β在肿瘤微环境中的重要性。在与肿瘤细胞共培养的实验中，通过在巨噬细胞中TNF-α依赖的MMP诱导，巨噬细胞可增加恶性细胞的侵袭性[18]。在肺癌，通过促进基质和血管生长因子的生成，TAM可促进肿瘤的发展。

TAM产生和释放一些免疫调控因子，如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10 和 IL-12[19-20]。据报道，这些因子可以直接或间接抑制抗肿瘤免疫反应，大量的实验与临床研究表明，TAM与癌症的发展密切相关。TAM产生上皮生长因子、血管内皮细胞、炎症细胞因子及趋化因子，促进肿瘤的存活、增殖和入侵[20]。此外，局部炎症或肿瘤细胞释放的免疫抑制介质削弱了宿主的抗肿瘤反应，并且促进肿瘤进展。

目前研究认为miRNAs与肿瘤形成密切相关，其中miRNA-122在肝脏中是特异表达，而且表达量较高。相关研究发现miR-122在肝癌组织中表达水平越低，肝癌分化越差，暗示着不良预后。

综上所述，肝癌患者及肝癌裸鼠模型TAM中的miRNA-122水平偏低，miRNA-122具有调控肝肿瘤生长的作用，临床研究需要进一步深入。

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