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乳腺癌是严重危害女性健康的常见肿瘤，发病率逐年上升，是引起女性死亡的重要原因[1-2]。我国乳腺癌每年新增病例占世界新发病例的12.2%，每年乳腺癌死亡病例占总死亡的9.6%[3-4]。其发病过程呈现一个多因素、多基因参与的复杂过程。在乳腺癌确诊病例中约有2/3为雌激素受体（ER）阳性的乳腺癌，因此深入研究ER信号通路的影响因素，有助于全面揭示ER阳性乳腺癌的发病机制，为ER阳性乳腺癌的治疗提供新的靶点。

近年来的研究显示，乳腺癌的发生、发展与表观遗传的变化密切相关。KDM3A作为JMJD家族中的一员[5]，是目前研究比较深入的去甲基化酶。KDM3A通过其去甲基化酶的功能，特异性催化H3K9me1/2的去甲基化，从而解除组蛋白抑制效应而调节基因表达，实现促进乳腺癌发生、发展的作用[6]。目前KDM3A表达与乳腺癌临床病理特征之间的关系尚未见报道。本研究利用免疫组化的方法检测了KDM3A在乳腺癌组织及正常乳腺组织中的表达，分析KDM3A与临床病理特征的关系，探索其在乳腺癌发病过程中的作用。

1　资料与方法

1.1　临床资料和试剂

乳腺癌及正常乳腺组织标本来源于沈阳医学院附属中心医院，KDM3A鼠抗人单克隆抗体购自美国Abcam公司，SP免疫组化试剂盒和DAB显色液均购自北京中杉金桥生物技术公司。

1.2　检测方法

免疫组化染色采用SP法，置65℃恒温烤箱烘烤4 h后，石蜡切片经脱蜡，抗原修复，血清封闭，加鼠抗人KDM3A（滴度1︰500）置4℃孵育过夜，室温复温后反复磷酸盐缓冲液（PBS）清洗；加生物素标记的二抗，室温10 min，PBS冲洗，用辣根过氧化物酶标记的链霉素亲和素复合物孵育，PBS冲洗，DAB染色，苏木精复染，脱水，透明，封片。实验中应用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3　结果判定

KDM3A染色以细胞核出现黄色或棕色颗粒为阳性。无阳性细胞为0分，阳性细胞1%～25%为1分，＞25%～50%为2分，＞50%～75%为3分，＞75%为4分。细胞无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。高倍镜下随机选3个高倍视野，每个视野计数200个细胞，每例切片至少评价1000个细胞。然后根据两者的乘积判断阳性等级，0分为阴性，1～4分为弱阳性，5～8分为中度阳性，9～12分为强阳性。

1.4　统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件对数据进行分析，计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　KDM3A在正常乳腺组织及乳腺癌组织中的表达

KDM3A蛋白在乳腺癌组织中的阳性率为89.0%（89/100），在正常乳腺组织中的阳性率为66.7%（20/30），两者阳性表达率比较差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1　JHDM2A蛋白在正常乳腺组织和癌组织中的表达（n）

2.2　KDM3A蛋白表达与乳腺癌临床病理特征的关系

KDM3A在乳腺癌组织中呈高表达（图1），这一结果提示KDM3A可能与临床病理特征有相关性。本实验进一步分析了KDM3A蛋白表达与临床病理特征之间的关系，结果显示，KDM3A表达和瘤体的大小、ER表达具有相关性（P＜0.05），和患者年龄、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、HER2、Ki67及脉管及软组织侵犯无明显关联，差异无统计学意义（P＞0.05）（表2）。

图1　免疫组化图（SP染色法，40×）

A.正常乳腺组织；B.乳腺癌组织

表2　JHDM2A蛋白表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系

3　讨论

KDM3A拥有广泛的生物学功能，参与多种生物学过程，包括核受体激活、精子生成、能量代谢、低氧调节和癌症发生等[7-9]。迄今为止，文献报道显示，KDM3A在多种肿瘤中呈高表达，通过多种途径促进肿瘤的进程。有文献报道，在前列腺癌中KDM3A的表达高于邻近组织，且差异显著[10]。近期研究显示，KDM3A通过调控雄激素受体的转录活性，参与前列腺癌的进程[11]。在肺腺癌细胞中，KDM3A调控Foxp 3的转录水平，增加抑制性细胞因子的分泌，促进肺腺癌细胞的免疫逃逸[12]。KDM3A经由其下游靶基因MCAM促进尤因肉瘤的侵袭和转移[13]。KDM3A与其共激活因子HIF1α共同增强糖酵解途径，促进膀胱癌的进程[14]。对大肠癌的研究显示，癌症组织中KDM3A的表达量明显增高，使用RNA干扰技术下调KDM3A表达可显著降低大肠癌细胞系的增殖能力和侵袭力[15]。肾癌组织KDM3A的表达量显著高于癌旁组织[16]。KDM3A调节卵巢癌的干性和耐药性[17]，促进非小细胞肺癌的肿瘤发生[18]。此外，KDM3A除作为雄激素受体的共激活蛋白外，研究显示KDM3A还参与了雌激素受体调控的基因表达激活过程，作为雌激素受体的调节因子，促进雌激素受体下游靶基因的表达[6，9]。

本研究结果显示，KDM3A在乳腺癌中的阳性率为89.0%，在正常乳腺组织中的阳性率为66.7%，KDM3A在乳腺癌组织中呈高表达，差异有统计学意义，提示KDM3A可能在乳腺癌的发生、发展中发挥重要作用。临床病理特征的分析显示，KDM3A的高表达与瘤体的大小和ER表达具有相关性。KDM3A可能通过调节ER信号通路，发挥促进乳腺癌生长的作用。KDM3A的高表达可能预示着快速的肿瘤生长，是一个预后不良的指标，因此KDM3A有望成为乳腺癌治疗的新靶点。

[参考文献]

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