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在常见的女性恶性肿瘤之中，宫颈癌是导致女性癌症中高死亡率的重要因素之一[1-2]。近年来，在全球不同发展水平的国家中，宫颈癌死亡率都有回弹上升的趋势。大量的流行病学研究也表明[3-5]，宫颈癌及癌前病变的主要发病原因之一是HPV感染。并且目前也已经证实，HPV存在有多种亚型。据报道，并非感染了HPV就一定会有相应症状，只有持续性的感染HPV，才能最终导致宫颈癌的发生，通过HPV的检测可以提前对早期宫颈疾病进行筛查。本课题研究对象是在我院治疗的宫颈病变患者，从他们中筛选符合条件的进行检测。根据检测结果不同采取相应的治疗措施，之后再对其预后情况跟踪。目的是观察宫颈癌前病变与人乳头瘤病毒阳性感染之间的相关性，为预测宫颈癌提供一些参考价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月～2016年11月我院宫颈病变门诊收治的101134病例患者，年龄30～65岁，平均（46.25±5.62）岁。以最终病理检查结果为依据，并符合国际癌症协会修订的《TBS分类法》诊断标准[6]。依据病理结果将筛选的患者分成三组：宫颈癌组（n=19 368例）、宫颈癌前病变组（n=36361例）和宫颈炎组（n=45405例）。宫颈癌组：平均年龄（45.13±5.21）岁；病程 1～4 年，平均（3.05±0.27）年。宫颈癌前病变组：平均年龄（41.12±4.65）岁；病程 1～3 年，平均（2.61±0.42）年。宫颈炎组：平均年龄（42.06±5.68）岁；病程 1～4 年，平均（2.66±0.56）年。三组患者的一般资料差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

入组患者的筛选条件如下：无血缘关系；只有单一性伴侣；非烟民；未做过宫颈方面手术；每个患者签署知情同意书；非孕妇；且1周内无性生活；最近没做过阴道用药（含阴道冲洗）；无其他合并性疾病，如肝肾脏器功能不全；之前未患过免疫系统方面的疾病；无器官移植手术史，无慢性消耗性疾病；如果是宫颈癌患者，之前未采用免疫治疗、放化疗；筛选患者的常见症状：白带增多、瘙痒、性交后出血、阴道出血等。

1.2 HPV-DNA样品的采集与检测方法

医生以截石位取样，对外阴及宫颈外口进行相应消毒处理，由固定医师将宫颈取样器轻轻插入宫颈管，抵达宫颈内口后停留10 s，逆时针或者顺时针旋转5圈后取出取样器，然后立即放于小试管中，试管内含专利保护剂。之后封盖处理，将样品马上低温保存，需在15 d之内检测，在取样过程中一定注意样品标本的取样量足够。

1.2.1 HPV阳性情况检测取宫颈组织，采用甲醛固定，常规石蜡包埋。之后常规脱蜡至水、微波抗原修复；加1∶100 HPV第一抗体，并用预吸收的HPV抗体以及正常羊血清作为阴性对照组，37℃孵育过夜，采用PBS洗5 min×3次；而后加入HRP标记的抗山羊第二抗体，37℃孵育 1～2 h；PBS洗 10 min×3 次。

1.2.2 HPV亚型情况检测取宫颈组织标本，用液氮（4℃）保存；检测的时候取出50 mg组织，参考试剂盒上的说明书操作：①提取宫颈组织的DNA；②采用加热法将其分解为单链核苷酸即扩增PCR；③RNA与DNA的一条单链的杂交。

1.3 观察指标及评价标准

以显色反应作为判定方法，有清楚蓝紫色圆点说明是阳性，反之为阴性。检测的HPV亚型（包括16、18、31、33、35、39、51、52、53、56、58、59、66、68）。

1.4 统计学方法

试验中的数据采用SPSS17.0软件分析，以χ2进行检验，以四分位和中位数间距（Q75～Q25）计量资料表示HPV阳性感染率的分布情况，以P＜0.05表示差异上有统计学意义。

2 结果

2.1 三组患者的HPV检出情况

宫颈炎组的HPV检测阳性率为14.12%，显著低于宫颈癌前病变组阳性率为 55.46%（χ2=43.21，P＜0.05），此外，宫颈癌前病变组阳性率，宫颈癌前病变组的HPV阳性感染率（55.46%）显著高于宫颈癌组（88.32%），差异有统计学意义（χ2=53.21，P＜0.05）。

2.2 宫颈癌及宫颈癌前病变组的HPV亚型分布情况

在宫颈癌前病变组中，CINⅠ患者感染的主要亚型是 HPV52、HPV33、HPV16；CINⅡ患者感染率的主要亚型是 HPV58、HPV18、HPV16；CINⅢ患者中感染的主要亚型是HPV58、HPV52、HPV16。在宫颈癌患者中，感染的主要亚型是HPV18和HPV16（表1）。

2.3 宫颈癌前病变组与宫颈癌组HPV多重感染情况

宫颈癌组中无二重感染、三重感染及多重感染，宫颈癌组均是单一感染；宫颈癌前病变组二重感染发生率显著高于三重及多重感染率（P＜0.05）（表2）。

表1 宫颈癌前病变组与宫颈癌组中HPV亚型的分布情况[n（%）]

表2 宫颈癌前病变组和宫颈癌组中HPV多重感染情况[n（%）]

与本组三重及多重感染比较，χ2=33.82，*P=0.013；χ2=38.42，#P=0.021；χ2=33.13，▲P=0.016

3 讨论

宫颈癌的病程发展比较缓慢，该病是常见的一种女性恶性肿瘤，在全世界各类发展水平的国家都如此，死亡率＞50%[7-8]。该病的发病机制，主要是宫颈内的上皮发生了瘤变。根据瘤变的程度不同分为三级：CINⅢ、CINⅡ、CINⅠ，这三种级别宫颈癌前病变都有可能发展成宫颈癌。级别越大，致癌率也越大[9-12]。

国内外研究表明[13-16]，持续性的HPV感染是该病的致病因素之一，尤其是高危型HPV感染，和癌变密切相关。HPV是一种闭环DNA病毒，有特异双链[17]。人体容易收到侵袭的部位是：皮肤、口腔黏膜、外阴生殖道等。在临床调查上，关于HPV感染的资料很多，均能证明HPV感染与宫颈病变有密切的关系。根据序列不同[19-20]，HPV可以分为200多种，对人致病的有40多种，30多种和生殖道癌变密切相关。HPV感染在宫颈癌病变上以单一感染为主，最常见的是HPV16和HPV31，但是并非都是单一感染，部分患者有多重感染情况。在宫颈癌患者中，更多是单一感染情形。本研究结果证明，宫颈癌变可能性和HPV感染呈正相关，本课题研究结果也和所检索的文献中试验结果一致。有研究证实，在该病的发病方面，HPV感染是必要致病因子。不过近年较新的研究证实，并不是所有的感染了HPV的患者都会发展成宫颈癌。对多数的妇女来说，即使感染了HPV，可能也会自行消失。这其中，只有7%左右的患者发现成为持续感染，最终可能为宫颈癌变的比例是25%左右[21]。

宫颈癌前病变并不是一定会发展为宫颈癌，部分患者即使不进行治疗也会自动痊愈，但是发展为宫颈癌的可能还是存在的，所以在宫颈癌前病变早期进行干预，对于防治宫颈癌的发生和发展有一定价值。一方面，保持良好心态，积极和医生配合，进行HPV感染治疗，这对于宫颈癌前病变的防治有重要意义。另外，药物干预方面，美国已研制出宫颈癌预防性疫苗，可以对癌前病变进行针对性的干预。因此，通过HPV检测的方法对广大妇女人群进行宫颈疾病的检验，对宫颈疾病方面的预防、控制及随访、预后评价有重要意义。

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[Abstract]Objective To observe the infection of HPV in cervical precancerous lesion group and cervical cancer group in order to explore the correlation between different subtypes of HPV and cervical precancerous lesions as well as cervical cancer.Methods A total of 101 134 patients treated in our hospital from January 2015 to November 2016 were selected as research objects.According to the pathological results,they were divided into three groups:cervical cancer group(n=19 368),cervical precancerous lesion group(n=36 361),and cervicitis group(n=45 405).The positivity rate of HPV was calculated after HPV test and HPV-DNA subtype detection.Results Among HPV positive infection cases,the positivity rate of HPV in the cervicitis group was significantly lower than that of the cervical precancerous group(χ2=43.21,P＜0.05),and the positivity rate of HPV in the cervical precancerous lesion group was greatly higher compared with that in the cervical cancer group(χ2=53.21,P＜0.05),which were displayed statisticaldifferences.The main subtypes in the cervical cancer group were infection of HPV16 and HPV18 accounting for 49.97%and 41.12%,respectively.For CINⅠpatients in the cervical precancerous lesion group,the infection of HPV52,HPV33,and HPV16 were the main subtypes accounting for 35.33%,12.50%,and 19.63%,accordingly.For CINⅡpatients in the cervical precancerous lesion group,the infection of HPV58,HPV18,and HPV16 were the main subtypes,25.64%,23.14%,and 16.25%accordingly.For patients with CINⅢin the cervical precancerous lesion group,the infection of HPV58,HPV52,and HPV16 were the main subtypes accounting for 18.82%,18.59%,and 36.90%.In the cervical cancer group,participants were only presented with single infection,withoutdouble,triple or multiple infection.In the cervical precancerous lesion group,double infection rates in CIN,CIN,and CINⅢpatients were significantly higher than those in triple and multiple infection.Conclusion In the cervical precancerous lesion group,the main subtypes of HPV infection are HPV 16,HPV 18,HPV 52,and HPV 58.In the cervical cancer group,the two main subtypes of HPV infection are HPV 18 and HPV 16.On multiple infection rate,the cervical precancerous lesion group was higher compared with that in the cervical cancer group.HPV detection has a higher effectiveness in the prevention and treatment of cervical diseases,which can help patients understand and prevent cervical lesions in advance.It is of great significance on the disease prevention,control and prognosis evaluation.