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1.苏州大学药学院，江苏苏州 215123；2.默沙东研发（中国）有限公司，北京 100000

[摘要]目的建立反相高效液相色谱（RP-HPLC）分析方法测定口腔速溶膜剂中他达拉非（TDF）的含量。方法用溶剂浇铸法制备每2 cm×3 cm理论含药量为20 mg的他达拉非口腔速溶膜剂。采用色谱柱：Cosmosil 5 C18-MS-Ⅱ（4.6×250 mm，5 μm），以乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液（44:56）为流动相，检测波长：285 nm，流速：1.0 ml/min，柱温40℃，进样量20 μl，测定他达拉非口腔速溶膜剂中的药物含量。结果他达拉非在0.8～40 μg/ml的浓度范围内线性关系良好（R2=0.9998）；日内精密度相对标准偏差RSD为0.002%～0.963%，日间精密度RSD为1.22%～1.83%，平均加样回收率为99.22%，定量限为0.902 ng，检测限为0.271 ng。他达拉非口腔速溶膜剂中的药物含量为96.43%。结论建立的他达拉非RP-HPLC分析方法专属性强，精密度、回收率高，稳定性良好，适用于他达拉非口腔速溶膜剂中药物的含量测定。

口腔速溶膜剂（Orodispersible Films，ODFs）是一种口服速释膜剂，供口含、舌下给药和口腔内局部贴敷，经唾液润湿并黏附在给药部位，膜溶解或分散同时释放药物的一种膜制剂[1-2]。ODFS优点：无需饮水，使用方便，迅速起效，无卡喉危险，儿童或老年患者可方便服用，患者顺应性得到提高[3]。他达拉非（Tadalafil，TDF），商品名：西力士（Cialis），主治男性勃起功能障碍（ED），其能够显著改善男性勃起功能减退和早泄症状[4-5]。2003年TDF经FDA批准在美国上市，2004年12月登录中国。迄今为止，临床上应用的是TDF片剂，一般在性活动前半小时服用[6]。该口服片剂具有溶散时限长、溶出度低、药效慢的特点，此外，无水时患者不能或者很难服用片剂，且吞咽困难的患者不能服用[7]。而口腔速溶膜剂恰好弥补以上缺点，同时可提高药物的生物利用度[8-9]，服用后经唾液溶解分散，药物起效快，提高患者的服药顺应性，所以开发TDF口腔速溶膜剂意义重大。本研究以聚乙烯醇1788为成膜材料，聚乙二醇400为增塑剂，海藻酸钠为崩解剂，十二烷基硫酸钠为表面活性剂，水为溶剂，采用溶剂浇注法制备TDF口腔速溶膜剂，并深入探讨建立利用反相高效液相色谱（RP-HPLC）测定其含量的方法，现报道如下。

岛津LC2010A高效液相色谱仪；JA2003N电子天平（上海精密仪器有限公司）；MS1/MS2迷你振荡器（广州仪科实验室技术有限公司）；DHG-9140A电热恒温鼓风干燥箱 （上海精宏实验设备有限公司）；H-1650台式高速离心机（湘仪离心机仪器有限公司）。

他达拉非（批号：20150409，苏州大学自制）；乙腈为色谱纯，购自西格玛奥德里奇；低粘度聚乙烯醇1788（PVA 1788）、聚乙二醇 400（PEG 400）为化学纯，购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；海藻酸钠（ALGNa）、十二烷基硫酸钠（SDS）为化学纯，购自国药集团化学试剂有限公司；水为超纯水 （产自实验室纯水仪）；其他试剂为分析纯。

将135 mg PVA 1788加入4 ml纯化水中，放置在70℃水浴中充分搅拌溶解，完全溶解后依次加入33.8 mg PEG 400、13.5 mg ALG-Na 和 8 mg SDS，维持70℃水浴持续搅拌至成澄清溶液，超声除去气泡。加入过120目筛的100 mg TDF，磁力搅拌均匀后超声。所得制剂均匀涂布在不锈钢板（10 cm×3 cm）上，随后水平放置在60℃电热恒温鼓风干燥箱中干燥2 h后拿出，自然冷却后将形成的膜从不锈钢板上剥离，切割成2 cm×3 cm/片的TDF口腔速溶膜剂。

色谱柱：Cosmosil 5 C18-MS-Ⅱ（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液（44∶56），检测波长：285 nm，流速：1.0 ml/min，柱温：40℃，进样量：20 μl。

空白制剂溶液：按“2.1”项下制备不含TDF处方的空白膜剂，取1片（2×3 cm2）置于50 ml容量瓶中，加10%总体积的0.1%三氟乙酸溶散，加50%总体积的乙腈溶解，用0.1%三氟乙酸定容后混匀，精密吸取1 ml置于50 ml容量瓶中，用乙腈/0.1%三氟乙酸（1:1）定容后混匀即得。

对照品溶液：精密称取20 mg TDF至50 ml容量瓶中，加50%的乙腈溶解，用0.1%三氟乙酸定容后混匀，精密吸取1 ml置于50 ml容量瓶中，用乙腈/0.1%三氟乙酸（1:1）定容后混匀即得。

供试品溶液：取 1片（20 mg）TDF的 ODFs置于50 ml容量瓶中，按空白制剂溶液制备方法制备即得。

取“2.3”项下制备的空白制剂、对照品和供试品溶液，离心，按“2.2”色谱条件测定，考察专属性。结果表明，该色谱条件下，无杂质干扰测定，峰形好，柱效较高，方法专属性强（图1）。

精密称取50 mg的TDF至50 ml容量瓶中，加25 ml乙腈将药物溶解，用0.1%三氟乙酸定容后混匀，得TDF储备液，用乙腈/0.1%三氟乙酸（1:1）稀释成 0.8、1.6、8、20、40 μg/ml的标准溶液。离心后，按“2.2”色谱条件测定。以峰面积（A）为纵坐标，质量浓度（C）为横坐标绘制标准曲线（图2），得到回归方程：A=19 021.1642C-179.9919，R2=0.9998。 结果表明，TDF溶液在0.8～40 μg/ml范围内成良好线性关系。

精密称取20 mg TDF至50 ml容量瓶中，按“2.3”项下对照品溶液制备方法，制备低深度（0.8 μg/ml）、中浓度（8.0 μg/ml）和高浓度（40.0 μg/ml）的三种标准溶液，在 0、2、4、6、8 h 测定，计算各浓度水平峰面积（A）的相对标准偏差（RSD），得日内精密度（表 1）；连续5 d测定各浓度标准溶液，计算5 d中各浓度水平峰面积（A）的 RSD，得日间精密度[10]（表 2）。 结果表明，方法的精密度良好。

按“2.6”项下的方法制备低、中和高浓度的标准溶液，每个浓度各5份，过滤后按“2.2”项下色谱条件测定，计算回收率（表3）。结果表明，含量测定方法的回收率高。

取“2.3”项下的对照品溶液，用乙腈/0.1%三氟乙酸（1:1）逐步稀释至主峰的响应值约为噪音水平的10倍（图3），得TDF定量限为0.902 ng；响应值约为噪音水平的3倍（图4），得TDF的检测限为0.271 ng。

取“2.6”项下制备的低、中和高浓度的TDF标准溶液，室温下放置 0、2、4、6、8、24 h 后取样，离心后按“2.2”项下色谱条件进样，外标法计算浓度，得出TDF标准溶液3个浓度的RSD分别为1.00%、0.40%和0.79%（表 4）。结果表明，0.8～40 μg/ml范围内，TDF 溶液室温下24 h内是稳定的。

取 2×3 cm2TDF 的 ODFs，按“2.3”项下制备方法制备供试品溶液，离心后按“2.2”项下色谱条件测定。外标法计算含量为96.43%（n=3，RSD为0.84%）。

TDF是新一代PDE5抑制剂，相对西地那非和优地那非，它有更长半衰期（17.5 h），长达36 h的治疗时间窗，患者服药更灵活，能从容、自然地进行性生活，更大程度上获得生理、心理满足[11-12]。临床研究表明，TDF对各种病因和各种程度ED患者的勃起功能有有效的改善，包括难治性ED，如重度脊髓损伤后、糖尿病性及前列腺切除术后ED等[13-14]。

文献资料表明，采用HPLC方法，可有效检测TDF原料药及片剂中的主药含量[15-20]。但迄今为止，未见到TDF口腔速溶膜剂含量测定相关文献报道。本研究建立TDF的RP-HPLC分析方法学，线性回归方程：A=19 021.164 2C-179.991 9，R2=0.9998，日内精密度在0.002%～0.963%之间，日间精密度在1.22%～1.83%之间，平均回收率为99.22%，测定膜剂中TDF含量为96.43%。本研究所建立的分析方法专属性强，精密度、回收率高，稳定性良好，可用于TDF口腔速溶膜剂中药物含量测定。

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Reverse phase high performanceliquid chromatography analysis of Tadalafil in Orodispersible Films

ZHAO Zong-liang1GAO Ying2CAO Qing-ri1▲
1.College of Pharmaceutical Sciences,Soochow University,Jiangsu Province,Suzhou 215123,China;2.Merck Sharp&Dohme Research And Development(China)Co.,Ltd.,Beijing 100000,China

[Abstract]ObjectiveTo establish ananalytical method of reverse phase high performance liquid chromatography (RPHPLC)to analyze the Tadalafil(TDF)content in Orodispersible Films(ODFs).MethodsTDF-loaded ODFs with a loading capacity up to 20 mg TDF in an area of 2 cm×3 cm were prepared using a solvent casting method.The chromatographic column was Cosmosil 5 C18-MS-Ⅱ (4.6×250 mm,5 μm)and mobile phase of acetonitrile-0.1%Trifluoroacetic Acid (44:56)were used,the detection wavelength was set at 285 nm,the flow rate was 1.0 ml/min,the column temperature was maintained at 40℃ and the injection volume was 20 μl.The drug content in TDF-loaded ODFs was analyzed.ResultsThe TDF concentration range with good linear relationship was 0.8-40 μg/ml,R2=0.9998.The RSD of intra-day was in the range of 0.002%-0.968%,RSD of inter-day was in the range of 1.22%-1.83%.Mean result of recovery rate was 99.22%.The limit of quantitation(LOQ)was 0.902 ng and the limit of detection(LOD)was 0.271 ng.The drug content of TDF-loaded ODFs was 96.43%.ConclusionThe RP-HPLC method of TDF showed high specific,good precision,recovery rate and stability.This method is suitable for thedetermination of drug content of TDF-loaded ODFs.

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）12（a）-0008-04

▲通讯作者：曹青日（1974-），男，吉林延边人，博士，副教授，研究方向：新型纳米制剂与缓控释制剂研发

（收稿日期：2017-10-19 本文编辑：孟庆卿）