王 雪1付 巍2杨 柳1李建民1▲徐艳明1▲

1.黑龙江中医药大学佳木斯学院实验中心，黑龙江佳木斯 154007；2.黑龙江省佳木斯市肿瘤医院内科，黑龙江佳木斯 154007

[摘要]目的研究水飞蓟宾乳霜对中波紫外线（UVB）诱导的裸鼠皮肤损伤模型的影响，包括对皮肤水分、pH值、黑色素和血红素的影响。方法将40只裸鼠分成空白组、模型组、阳性对照组和水飞蓟宾组4组，每组10只。空白组每天给与抚摸，模型组每天给与抚摸后进行UVB照射，阳性对照组和水飞蓟宾组在接受UVB照射前分别将资生堂悠莱甄弹柔采和水飞蓟宾乳霜均匀地涂抹在裸鼠的背部皮肤上，然后对模型组、阳性对照组和水飞蓟宾进行UVB照射，每次照射20 min，连续照射15 d，使裸鼠的背部皮肤受损，照射结束后采用德国CK公司生产的皮肤测试仪对裸鼠的背部皮肤进行检测。结果模型组与空白组相比，水分含量明显减少，pH值增高，黑色素与血红素的含量明显增多，差异有统计学意义（P＜0.05）；阳性组和水飞蓟宾组与空白组和模型组相比，水分含量增加，pH值下降，黑色素和血红素含量明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论中药化妆品水飞蓟宾可以提高皮肤的含水量，减少色素沉着，降低外界刺激对皮肤的伤害，对已受损的皮肤具有良好的修复和改善作用。

[关键词]裸鼠；水分；pH值；黑色素；血红素

随着人们生活水平的提高和现代科学技术的发展，化妆品的种类越来越多，目前大多数人热衷于中药化妆品的研发和使用。中药化妆品是由纯中药制成或在中药或中药有效成分中添加化学成分的一种用于改善皮肤质量的物质。该化妆品与现代化妆品相比具有历史悠久、功能多样、纯天然性和整体辨治的特点。现代研究显示，中药水飞蓟宾具有保肝、抗肿瘤、改善人体的认知功能及抗氧化作用[1]，但中药水飞蓟宾对皮肤质量的研究还未见报道。本文采用德国CK公司生产的皮肤测试仪对裸鼠的背部皮肤进行检测，观察水飞蓟宾对皮肤水分、pH值、黑色素和血红素的影响，现报道如下。

SPF级雌性健康裸鼠40只，体重10～12g[由长春市亿斯试验动物技术责任有限公司提供，合格证号SCXK-（吉）2014-0002]，资生堂悠莱甄弹柔采（上海卓多姿中国化妆品有限公司，批号20161215），水飞蓟宾乳霜（自制，批号20150601），德国CK公司生产的皮肤测试仪，紫外光疗仪（Sigma公司），紫外线辐照计（北京师范大学光电仪器厂）。

1.2.1 水飞蓟宾化妆品的制备 将16醇和十六烷基糖苷、单硬脂酸甘油酯、橄榄油、角鲨烷、十六-十八醇混合后升温至80℃溶解制得油相；将甘油加入去离子水中，升温至80℃，加入对羟基苯甲酸甲酯，搅拌至全部溶解，制得水相；然后，将水相加入油相中，均质8 min，搅拌降温至40℃，加入用丙二醇分散的水飞蓟宾，搅拌至分散均匀，制成含1.0%杜仲提取物的乳霜。

1.2.2 仪器使用方法 ①水分的测量：测量时将水分测试探头垂直地压在裸鼠背部的皮肤表面，探头顶部被压回一段距离，1秒钟内听到提示声音并在主机上显示结果。每1个部位测量3次，取平均值。②pH值的测定：测量前先用pH=7.0和pH=4.0的标准溶液对仪器进行校正。测量前将测试探头浸泡于氯化钾缓冲液中，测试时把探头放在蒸馏水中清洗一下，轻轻甩掉多余蒸馏水后将探头垂直放在裸鼠背部的皮肤表面，按一下测试探头上的绿色开关，1秒钟后听到提示声音并读取结果。每1个部位测量3次，取平均值。③皮肤黑色素的测定：Mexameter MX18具有2个测量参数，其中M为黑色素数值，该值越大，说明皮肤中黑色素的含量越高。将仪器的探头垂直地贴在裸鼠背部的皮肤表面，探头内有一弹簧保证每次测试时探头的压力恒定。1秒钟测试完毕，仪器发出提示声音并读取显示在屏目上的数据。④皮肤血红素的测定：Mexameter MX18具有2个测量参数，其中E为血红素数值，该值越大，说明皮肤中血红素的含量越高。将仪器的探头垂直地贴在裸鼠背部的皮肤表面，探头内有1个弹簧保证每次测试时探头的压力恒定。1秒钟测试完毕，仪器发出提示声音并读取显示屏数据。

1.2.3 模型的制备 使用SS-04B型紫外线光疗仪，将裸鼠置于紫外光疗仪灯具下照射，照射距离40 cm，每天照射20 min，出现水疱、红肿等，光照暂停至症状缓解，照射15 d，达到累计照射剂量UVB为0.15 mJ/cm2。紫外线的照射剂量按公式以下计算，照射强度通过紫外线辐照计来测定。照射剂量（J/cm2）=照射强度（W/cm2）×照射时间（s）。

1.2.4 分组及给药 将40只雌性裸鼠分成4组，分别是空白组、模型组、阳性对照组和水飞蓟宾组。将资生堂悠莱甄弹柔采和水飞蓟宾乳霜每天均涂抹在阳性对照组和水飞蓟宾组裸鼠的背部皮肤上，每次涂抹至裸鼠的背部皮肤均被相应的化妆品覆盖且厚度适中，涂抹好的裸鼠至于UVB下进行照射；模型组每天予以抚摸并在UVB下进行照射；空白组每天予以抚摸，不进行UVB照射。15 d后采用皮肤测试仪对裸鼠的背部皮肤进行检测，观察水飞蓟宾对裸鼠背部皮肤的影响。

采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用 t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

从裸鼠背部的皮肤可以看出给予化妆品的各组与模型组相比皮肤表面光滑有弹性，色素沉着明显减少。

2.2.1 对皮肤水分和pH值的影响 阳性组和水飞蓟宾组与空白组和模型组相比，水分含量明显降低，差异有统计学意义 （P＜0.05），而阳性组与水飞蓟宾组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），但水飞蓟宾组与阳性组相比水分略有增加。阳性组和水飞蓟宾组与空白组和模型组相比pH值降低，差异有统计学意义（P＜0.05），而阳性组和水飞蓟宾组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）（表1）。

表1 水飞蓟宾乳霜对皮肤水分和pH值的影响（±s）

 

与空白组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05

2.2.2 对皮肤黑色素和血红素的影响 阳性组和水飞蓟宾组与空白组和模型组相比黑色素含量明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），而阳性组与水飞蓟宾组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），但阳性组黑素含量与水飞蓟宾组相比略有减少。阳性组和水飞蓟宾组与空白组相比血红素含量有所增加，但无显著性差异，而阳性组和水飞蓟宾组与模型组相比血红素含量明显降低，模型组与空白组相比血红素含量明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2 水飞蓟宾乳霜对皮肤黑色素和血红素的影响（±s）

 

与空白组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05

水是保持皮肤清洁、滋润、细嫩的特效而廉价的美容剂。人体皮肤表层水分在12%～15%时，皮肤光滑而有弹性。一旦缺少水分引起的干燥则严重影响肌肤的健康。研究显示，脸部处于干燥状态3 d，皮肤会起皮、长皱纹、皮肤色素沉积加快；干燥时间＞7 d，会产生色斑，堆积毒素，需要3个月恢复；全身干燥状态＞30 d，会生成各种顽固性色斑、皱纹，皮肤老化速度加快3年[2-5]。中药通过益气养血、健运脾胃、滋养肺肾等途径补充了水分的来源，促进了水运的调畅，保证了水分在体表的持久作用[6]。

皮肤表面的pH值是机体生物学活动在表皮的表达，还可影响角质形成、细胞甚至真皮的生物学功能。在不同的生长发育时期，皮肤表面的pH值会发生变化，但偏酸性仍然是正常动物pH值的表现。pH值偏高容易引起皮肤干燥和瘙痒，严重者则容易产生接触性皮炎。研究显示，长期处在较高pH值的环境下，会使皮肤产生念珠菌[7]。对皮肤表面pH值的测量是了解皮肤生物状态、维持皮肤功能、延缓皮肤衰老、防止和加速某些皮肤病愈合的有效途径[8-13]。

皮肤颜色能够反映皮肤屏障的完整性和敏感性，有助于判断美白祛斑化妆品的功效和色素性皮肤病的诊断和治疗，因此对皮肤颜色进行客观的评价在皮肤科学及美容医学中具有重要的作用[14-16]。

本研究首次采用德国CK公司生产的皮肤测试仪对中波紫外线造成的裸鼠皮肤损伤进行测试，结果显示水飞蓟宾可以改善皮肤的水分和pH值，减少皮肤的色素沉着，从而减轻紫外照射对皮肤的损伤，对提高皮肤质量和延缓皮肤衰老有重要的作用。

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Experimental study on the effect of Silybin on skin quality of nude mice

WANG Xue1FU Wei2YANG Liu1LI Jian-min1▲ XU Yan-ming1▲
1.Experimental Center,Jiamusi College of Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine,Jiamusi 150047,China;2.Department of Medicine,Cancer Hospital of Jiamusi City in Heilongjiang Province,Jiamusi154007,China

[Abstract]ObjectiveTo study the influence of Silybin cream on skin damage of nude mice model induced by UVB,including skin moisture,pH value,melanin and heme.Methods40 nude mice were divided into 4 group,they were the blank group,the model group,the positive control group and the Silybin group.The blank group was given a touch every day,and the model group was given UVB exposure every day after touching.Nude mice′s back in the positive control group and the Silybin group was smeared by Shiseido yurao zhenlai and Silybin cream before irradiated by UVB,nude mice in the model group,the positive control group and the silybin group were irradiated by UVB for 15 days continually,each time 20 min,the back of nude mice was damaged,the back was tested by the skin tester produced by German CK company after irradiating.ResultsThe moisture content in the model group decreased distinctively compared with the blank group,pH value increased,melanin and heme content increased,with significant difference(P＜0.05).The moisture content in the positive control group and the Silybin group increased compared with the blank group and the model group,pH value decreased,melanin and heme content decreased,with significant difference(P＜0.05).ConclusionSilybin can increase skin moisture,decrease hyper pigmentation,reduce skin damaged by outside stimulus,and repair damaged skin effectively.

[Key words]Nude mice;Moisture;pH value;Melanin;Hemoglobin

[基金项目]黑龙江省应用技术研究与开发计划项目（PC13S15）；黑龙江中医药大学科研基金项目（201120）

[作者简介]王雪（1984-），女，硕士，中级职称，主要从事中药药理研究

▲通讯作者：李建民（1964-），男，教授，硕士生导师；徐艳明，女，讲师，主要从事中药新药研究与开发

（收稿日期：2017-09-11 本文编辑：祁海文）