郑悦康 区金结

广东省中山市疾病预防控制中心，广东中山 528403

[摘要]目的了解珠三角某市腹泻患者沙门菌感染情况，分析沙门菌菌株的血清型分布、耐药性和分子特征。方法2015年全年对珠三角某市内哨点医院的腹泻患者的粪便标本进行沙门菌监测，对分离到的沙门菌进行血清分型、药物敏感试验和PFGE分子分型。结果2015年珠三角某市内哨点医院共检出沙门菌365株，男女比例为1.52∶1（220/145）；各年龄段均可感染沙门菌，以婴幼儿为主，＜1岁占42.2%。血清型以鼠伤寒沙门菌及其变种为主，分子分型表现较大的遗传多样性。结论在珠三角某市引起感染性腹泻的沙门菌主要为鼠伤寒沙门菌及其变种，沙门菌耐药谱和PFGE图谱无明显关联。

[关键词]沙门菌；腹泻；血清分型；脉冲场凝胶电泳；耐药性

沙门菌广泛分布于自然界，寄生于人和动物体内，亦常见于污染的蛋、奶及其制品、肉类、食品、饲料、水产品和污水等外环境[1]。2000～2009年，我国每年非伤寒沙门菌发病约900万人次[2]。据统计在世界各国细菌性食物中毒中，沙门菌引起的食物中毒常列榜首。全球每年约有1600万沙门菌感染病例[3-4]。本文为了解2015年珠三角某市腹泻患者沙门菌感染的情况，对该市哨点医院监测所得沙门菌菌株进行血清分型、药物敏感试验和PFGE分子分型，现报道如下。

2015年1月1日～12月31日，珠三角某市各哨点医院从患者粪便标本中分离并经生化鉴定后上送的沙门菌菌株共365株。

SBG肉汤、沙门菌显色培养基、XLD平板均购自广东迪景微生物科技有限公司；诊断血清购自丹麦SSI公司；XbaⅠ限制性内切酶、D Buffer购自美国Promega公司，蛋白酶K购自MercK公司；PFGE分型专用琼脂糖Seakem Gold购自瑞士Lonza公司；脉冲场电泳仪、凝胶成像仪均购自美国Bio-Rad公司，VITEK-2 compact购自法国生物梅里埃公司。

医院上送的菌株经营养肉汤复苏，接种XLD平板，37℃培养过夜。挑取菌株进行血清学分型。

采用VITEK-2 compact及其配套药敏试剂。结果判断参照美国临床实验室标准化研究所（CLSI）出版的药物敏感试验指南（2015版）[5]。

参照美国PulseNet的标准操作方法[6]，将实验菌株进行脉冲场电泳后产生的DNA图谱，根据成像设备要求保存图像为*.img或*.1sc文件，转换成*.tif文件，用于Bionumerics软件进行聚类分析，输出亲缘关系树状图谱。

采用基于条带比较的Dice系数衡量PFGE带型之间的相似度，相似度为100%者视为同一PFGE型。采用基于药敏比较的Categorical（value）系数衡量药敏之间的相似度。

男性患者沙门菌的检出率高于女性（表1）。

表1 不同性别检出沙门菌数量的比较

＜1岁年龄段患者沙门菌的检出率较高（表2）。

表2 不同年龄段检出沙门菌数量的比较

5～11月份菌株数量占比较高（表3）。

表3 全年各个月份检出沙门菌数量的比较

血清型 I4，5，12：i：-检出数占比最高（表 4）。

表4 不同血清型沙门菌检出数的比较

鼠伤寒及其变种沙门菌在2015年全年数量较多，对其中的51株鼠伤寒及其变种沙门菌进行PFGE和药敏试验，其PFGE聚类分析见图1，药敏聚类分析见图2。

 

图1 51株鼠伤寒沙门菌PFGE聚类分析图

药敏结果中黑色框代表耐药，灰色框代表中度敏感，白色框代表敏感AMP为氨苄西林，SAM为氨苄青霉素/舒巴坦，TZP为哌拉西林，TAZ为哌拉西林/他唑巴坦，CFZ为头孢唑林，CXM为头孢呋辛，CTT为头孢替坦，CAZ为头孢他啶，CRO为头孢曲松，CTX为头孢噻肟，FEP为头孢吡肟，ATM为氨曲南，IPM为亚胺培南，MEM为美罗培南，AMK为阿米卡星，GEN为庆大霉素，TOB为妥布霉素，CIP为环丙沙星，LEV为左氧氟沙星，F为呋喃妥因，SXT为复方新诺明，AMX为阿莫西林，TIC为替卡西林，CFR为头孢氨苄，CEC为头孢克罗，CMZ为头孢美唑，FOX为头孢西丁，OFLX为氧氟沙星，ETP为厄他培南，MXF为莫西沙星。

 

图2 51株鼠伤寒沙门菌药敏聚类分析图

本研究感染沙门菌病例中，男女比例为1.52∶1（220/145），男性患者比女性多，与相关报道相符[7]。其中2/3以上的病例发生在3岁以下儿童，而1岁以内儿童占比更达42.2%，提示儿童的免疫力弱，极易受到沙门菌的感染，由于全年样品量低，尚不能说明年龄与沙门菌之间所存在的关系，但人群对沙门菌普遍易感，这与相关报道相符[8-9]，因此应引起重视。沙门菌在5～11月检出较多，这与本地区地处热带北缘，光照充足，热量丰富，夏秋季气温高湿度大导致食物易受细菌污染有关。

血清分型中，365株沙门菌分成48个血清型，沙门菌前4位血清型构成比从高到低为鼠伤寒变种沙门菌 [I4，5，12：i：-] 占比 47.2%， 斯坦利沙门菌占比11.2%，肠炎沙门菌占比10.7%，鼠伤寒沙门菌占比5.2%。鼠伤寒沙门菌及其变种共占比达52.4%，与省内报道基本相同[10-11]。

鼠伤寒及其变种沙门菌检出率在2015年占比最高，因此对同时做了PFGE和药敏试验的51株鼠伤寒及其变种沙门菌进行聚类分析。根据药敏结果，将51株鼠伤寒及其变种沙门菌分成个24耐药谱型。PFGE采用XbaⅠ酶切，将51株鼠伤寒及其变种沙门菌分成34个PFGE型，在分子水平上表现较大的遗传多样性。通过对PFGE图谱和耐药谱的对比，PFGE图谱相同可有不同耐药谱，反之亦然，推断两者之间没有明显的关联[11]。

2009～2013年，珠三角某市某医院未检测到对亚胺培南耐药的沙门菌菌株[12]。而在2015年的鼠伤寒沙门菌中发现有3株菌对亚胺培南中度敏感，表明鼠伤寒沙门菌对某些药物逐渐产生耐药，因此应加强细菌的耐药监测[13]。

15304，15308两个菌株均来源自同一患者，而粪便样品相隔4 d采集，其分子分型、血清型和耐药谱均完全相同，应该是同一克隆的菌株，可说明第二次采样时该患者体内病原菌尚未清除完全，医院需及时并有针对性地给患者用药。

15144，15162，15164，15165 这 4 个菌株来源不同的患者，年龄段在1岁以下，患者居住在不同的镇区，采集时间均在7月份，并且在同一家医院采集。该4株菌的PFGE型、血清型和耐药谱均完全相同，为鼠伤寒沙门菌及其变种的优势PFGE型别，有可能是同一克隆的菌株，至于是否暴发或院内感染，我们需对患者、可疑食品、居住地等环境标本中分离的沙门菌进行溯源分析。在今后工作中，还需不断加大监测力度，搜集更多菌株以充实数据库，探索PFGE型别和耐药谱的关联性。同时我们也要认识到只有结合病原学和流行病学信息，才能更好地把握疾病传播特点和发挥PFGE技术在疾病防控、突发公卫事件/疫情处置中的作用[14-15]。

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Surveillance and the pathogenic feature analysis of Salmonella in a city of Pearl River Delta in 2015

ZHENG Yue-kang OU Jin-jie
Center for Disease Control and Prevention of Zhongshan City in Guangdong Province,Zhongshan 528403,China

[Abstract]ObjectiveTo understand the situation of Salmonella infection in diarrhea patients in a city of Pearl River Delta,to analyze the serotype distribution,drug resistance and molecular characterization of Salmonella strains.M ethodsSalmonella surveillance was conducted for the fecal specimen of the diarrhea patients in a sentinel hospital in a city in earl River Delta in 2015,and the isolated Salmonella strains were further given serotyping,antimicrobial susceptibility testing,and PFGE typing.ResultsIn 2015,there were 365 strains of Salmonella detected in sentinel hospital in a city of Pearl River Delta.The ratio ofmale and female was 1.52∶1 (220/145).Salmonella could infect all ageswhichmainly on infants,and 42.2%were less than 1 year old.There was Salmonella Typhimurium and its variants were the main serotype,while all the molecular typing showed great genetic diversity.ConclusionSalmonella typhimurium and its variants were the dominant serotype causing infectious diarrhea in a city of Pearl River Delta.There was no significant correlation between Salmonella resistance patterns and PFGE typing.

[Key words]Salmonella;Diarrhea;Serotype;Pulsed field gel electrophoresis;Drug resistance

[中图分类号]R378.2+2

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）08（a）-0148-04

（收稿日期：2017-07-05 本文编辑：许俊琴）

[基金项目]广东省中山市社会发展公关计划（医疗）项目（2014 A1FC190）

[作者简介]郑悦康（1979-），男，汉族，本科，副主任技师，研究方向：微生物检验