李 浩1闫聪颖2侯殿臣3▲

1.内蒙古民族大学临床医学院，内蒙古通辽 028000；2.河北医科大学第一医院心内科，河北石家庄 050000；3.内蒙古民族大学第二临床医学院（内蒙古林业总医院）胸外科，内蒙古牙克石 022150

[摘要]目的初步探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中转移相关蛋白1（MTA1）和增殖细胞核抗原（Ki-67）的表达并分析其相关性。方法采用SP免疫组织化学方法检测2011年1月～2017年1月内蒙古林业总医院经胸外科手术切除并经病理科存档，符合实验条件的46例NSCLC组织和20例癌旁正常对照组织中MTA1和Ki-67的表达，分析MTA1和Ki-67之间的相关性及其与NSCLC临床病理参数的关系。结果NSCLC组织中MTA1和Ki-67的阳性率分别为65.22%和54.35%，均显著高于癌旁对照组织中的15%和20%（P<0.05）；NSCLC组织中MTA1和Ki-67的表达无相关性（r=0.064，P>0.05）；NSCLC发生淋巴结转移组MTA1表达的阳性率高于无淋巴结转移组（P< 0.05）；Ki-67表达的阳性率在NSCLC低分化组高于高中分化组（P<0.05）。结论MTA1和Ki-67可能在NSCLC转移及肿瘤细胞侵袭过程中具有重要作用。

[关键词]MTA1；Ki-67；非小细胞肺癌

非小细胞肺癌（NSCLC）是人类最常见的恶性肿瘤之一，其发病率仍有上升趋势，严重损害人类健康。以手术为主的综合治疗在NSCLC治疗过程中已经取得了突破性进展，靶向生物治疗为对抗肿瘤提出新的方向。转移相关蛋白1（MTA1）是高度失调的癌基因之一[1]，研究发现MTA1在转录调节中具有重要作用，它通过调节蛋白泛素化而改变蛋白质稳态，并且导致DNA损伤反应，进而参与肿瘤生物学功能的调节[2]。增殖细胞核抗原（Ki-67）是与细胞周期密切相关的核抗原[3]，除静止期以外，表达于细胞周期的各个阶段。Ki-67蛋白表达在预测肿瘤细胞的增殖状态和肿瘤的未来治疗过程中起重要作用[4-5]。本研究利用免疫组化方法，结合临床意义初步探讨MTA1和Ki-67在非小细胞肺癌中的表达，为NSCLC的早期诊断和靶向治疗提供理论依据。

1.1 对象

选取内蒙古林业总医院2011年1月～2017年1月经胸外科手术切除并经病理科存档的符合实验条件的NSCLC癌组织46例，配对切取并筛选出符合实验条件的距肿瘤边缘﹥5 cm的癌旁肺组织作为对照20例，所有患者术前均未行放化疗，术后病理检查证实为NSCLC。其中男性27例，女性19例；诊断时年龄36～77岁；鳞癌20例，腺癌26例；根据国际肺癌研究协会第8版国际肺癌TNM分期标准[6]进行分期，T1期10例，T2期28例，T3期4例，T4期4例；低分化15例，中分化27例，高分化4例；存在淋巴结转移28例，未发生淋巴结转移18例。

1.2 试剂和方法

兔抗人MTA1多克隆抗体购于武汉博士德生物工程有限公司，兔抗人Ki-67单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。所有标本均经10%甲醛溶液固定，取石蜡包埋组织4 μm厚度连续切片，石蜡切片常规脱蜡、脱水、置入抗原修复液中修复。采用SP法免疫组化染色，滴加一抗，具体操作按说明书进行。4℃孵育过夜，二氮基联苯胺（DAB）显色、苏木精复染。碱性磷酸盐（PBS）缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断标准

每张切片的染色结果需由两位经验丰富的病理科医师审阅。MTA1以细胞质和（或）细胞核出现淡黄色、棕黄色或棕褐色颗粒物为阳性。在显微镜高倍镜视野下，根据阳性染色细胞占所观察细胞比例记分：0分为≤10%，1分为﹥10%～25%，2分为﹥25%～50%， 3分为﹥50%～75%，4分为﹥75%～100%；按细胞显色强度记分：0分为无色，1分为浅黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。然后以阳性细胞所占百分比记分与显色强度记分的两项乘积进行综合评分，﹥2分为阳性表达，≤2分为阴性表达。

Ki-67的表达部位主要在细胞核，其结果判定采用相对定量法：对每张切片随机选取5个高倍镜视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞占观察细胞的百分比。阳性细胞比率﹤20%为阴性表达，≥20%为阳性表达。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关性分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2.1 MTA1和Ki-67在NSCLC组织中和癌旁对照组织中的表达情况

MTA1和Ki-67在NSCLC组织中表达的阳性率分别为65.22%和54.35%，显著高于癌旁对照组织中15.00%和20.00%，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 NSCLC和癌旁对照组织中MTA1、Ki-67阳性表达率的比较[n（%）]

2.2 MTA1和Ki-67与NSCLC临床病理参数的关系

NSCLC组织中MTA1的表达与性别、年龄、病理类型、分化程度无关（P>0.05），与NSCLC是否发生淋巴结转移有关（P<0.05）。Ki-67在NSCLC组织中的表达与性别、年龄、病理类型、淋巴结转移无关（P>0.05），与NSCLC的分化程度有关（P<0.05），见表2。

表2 MTA1和Ki-67在NSCLC组织中的表达[n（%）]

2.3 MTA1和Ki-67在NSCLC组织中的相关性

Spearman相关性分析结果显示，MTA1和Ki-67在NSCLC组织中的表达无明显关系（P>0.05），见表3。

表3 MTA1和Ki-67在NSCLC组织中表达的相关性分析（例）

上皮间质转化（EMT）在胚胎发育和癌症进展过程中起到重要作用，MTA1不仅在多种人类肿瘤中高表达[7]，而且能够参与EMT过程，从而调节肿瘤细胞的生物学功能[8]。MTA1是多种恶性肿瘤转移过程的关键调节因子，MTA1通过上调STAT3转录活性增强乳腺癌的肺转移，促进细胞增殖、侵袭和转移，并能够促使血管生成[9-10]。MTA1可通过直接调节E-钙黏蛋白来增强恶性胸膜间皮瘤（MPM）细胞的转移，而且检测到MTA1的过表达与MPM患者的不良预后相关[11]。研究显示[12]，MTA1能与Snail或Slug一起抑制食管鳞状细胞癌细胞中E-钙黏蛋白的启动子活性，参与调节EMT过程，并改变肿瘤细胞的生物学活性。Ki-67被确定为许多肿瘤化疗敏感性和肿瘤病情评估的重要因素[13]，在乳腺癌研究中，Ki-67与淋巴结转移密切相关，并且可通过Ki-67的检测评估乳腺癌细胞对化疗的敏感性[14]。亦有研究发现，即使利用shRNA沉默Ki-67基因后，该蛋白仍可在癌细胞中被检测到，可能是因为Ki-67具有良好的稳定性，或者其翻译后降解未在癌细胞中发生[15]。

本实验采用免疫组化方法探讨MTA1和Ki-67在NSCLC中的表达及相关性的分析。研究结果显示，MTA1和Ki-67在NSCLC组织中的表达显著高于癌旁对照组织中的表达（P<0.05）；NSCLC发生淋巴结转移者MTA1的阳性率高于无淋巴结转移者（P<0.05）；Ki-67在NSCLC低分化组织中的表达高于高中分化者（P<0.05）；在NSCLC组织中MTA1和Ki-67的表达无明显关系（P>0.05）；研究结果显示，MTA1可能参与NSCLC的转移、扩散，而Ki-67可能参与肿瘤细胞浸润、侵袭能力的调节，其机制的明确仍需大量深入研究。

综上所述，MTA1、Ki-67可能是肿瘤调节过程的新标靶，其早期检测有助于肿瘤的早期诊断和预后评估，MTA1、Ki-67作为肿瘤的潜在分子标志物，其调节机制的明确，将会成为推动肿瘤研究发展的动力。

[1]Kumar R，Wang RA.Structure，expression and functions of MTA genes[J].Gene，2016，582（2）：112-121.

[2]Yang H，Xu L，Qian H，et al.Correlation between insulinlike growth factor binding protein 3 and metastasis associ ated gene 1 protein in esophageal squamous cell carcinoma[J]. Mol Med Rep，2016，13（5）：4143-4150.

[3]Choy B，LaLonde A，Que J，et al.MCM4 and MCM7，potential novel proliferation markers，significantly correlated with Ki-67，Bmi1，and cyclin E expression in esophageal adenocarcinoma，squamous cell carcinoma，and precancerous lesions[J].Hum Pathol，2016，57：126-135.

[4]Mungle T，Tewary S，Arun I，et al.Automated characterization and counting of Ki-67 protein for breast cancer prognosis：a quantitative immunohistochemistry approach[J]. ComputMethodsPrograms Biomed，2017，139：149-161.

[5]郑文凤，李颖霞，陈奎生，等.USP22、MTA1及Ki-67蛋白在食管鳞癌中的表达及相关性[J].世界华人消化杂志，2013，（28）：2915-2921.

[6]张用，毕建平，皮国良，等.国际肺癌研究协会第八版国际肺癌TNM分期修订稿解读[J].肿瘤防治研究，2016，43（4）：313-318.

[7]原甜甜，衣艳梅，李济伟，等.沉默 MTA1表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响[J].现代肿瘤医学，2015，23（14）：1944-1947.

[8]Azadeh Andisheh-Tadbir，Ali Dehghani-Nazhvani，Mohammad Javad Ashraf，et al.MTA1 Expression in Benign and Malignant Salivary gland Tumors[J].Iran J Otorhinolaryngol，2016，28（84）：51-59.

[9]Fan C，Lin Y，Mao Y，et al.MicroRNA-543 suppresses colorectalcancergrowthandmetastasisbytargetingKRAS，MTA1 and HMGA2[J].Oncotarget，2016，7（16）：21825-21839.

[10]夏娟，刘建平，刘智.肿瘤转移相关基因1在食管鳞癌中的表达及其与微血管生成的关系分析[J].中国当代医药，2015，22（33）：17-20，24.

[11]Caihua Xu，Fei Hua，Yihuan Chen，et al.MTA1 promotes metastasis of MPM via suppression of E-cadherin[J].J Exp Clin Cancer Res，2015，34：151.

[12]Weng W，Yin J，Zhang Y，Qiu J，Wang X.Metastasis-associated protein 1 Promotestumor invasion by downregulation of E-cadherin[J].Int J Oncol，2014，44（3）：812-818.

[13]张连美，仲纪祥，孙苏安.EGFR、ALK和Ki-67在非小细胞肺癌中的表达及相关性分析[J].临床肺科杂志，2017，22（1）：4-7.

[14]Sinn HP，Schneeweiss A，Keller M，et al.Comparison of immunohistochemistry with PCR for assessment of ER，PR，and Ki-67 and prediction of pathological complete response in breast cancer[J].BMC Cancer，2017，17（1）：124.

[15]Chierico L，Rizzello L，Guan L，et al.The role of the two splice variants and extranuclear pathway on Ki-67 regulation in non-cancer and cancer cells[J].PLoS One，2017，12（2）：e0171815.

Expression and correlation of MTA1 and Ki-67 in non small cell lung cancer

LI Hao1YAN Cong-ying2HOU Dian-chen3▲
1.Clinical Medical School of Inner Mongolia University for Nationalities,Tongliao 028000,China;2.Department of Cardiology,the First Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050000,China;3.Department of Thoracic Surgery, the Second Clinical Medical School of Inner Mongolia University for Nationalities(Inner Mongolia Forestry General Hospital),Yakeshi 022150,China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expressions of metastasis associated protein 1(MTA1)and proliferating cell nuclear antigen(Ki-67)in non-small cell lung cancer(NSCLC)tissues and their correlation.Methods46 cases of NSCLC tissues and 20 cases of normal tissues in Inner Mongolia Forestry General Hospital from January 2011 to January 2017 were selected as the research objects,immunohistochemistry of SP was used to detect the expressions of MTA1 and Ki-67 in NSCLC tissues and adjacent paracancerous tissues.The correlation between their expression and pathologic parameters were analyzed by statistics.ResultsThe positive expressions rate of MTA1 and Ki-67 in NSCLC tissues were 65.22%and 54.35%,significantly higher than the positive expressions rate of 15%and 20%in normal tissues(P<0.05); there was no significant relationship between the expressions of MTA1 and Ki-67 in NSCLC tissues(r=0.064,P>0.05); the positive expression rate of MTA1 in the group of lymph node metastasis of NSCLC was higher than that without lymph node metastasis(P<0.05);the positive expression rate of Ki-67 in low differentiation group of NSCLC was higher than that in high differentiation group(P<0.05).ConclusionThe abnormal expressions of MTA1 and Ki-67 may play an important role in the invasion and metastasis of NSCLC.

[Key words]MTA1;Ki-67;Non small cell lung cancer

[中图分类号]R735.1

[文献标识码]A

[文章编号]1674-4721（2017）04（b）-0084-03

（收稿日期：2017-03-02 本文编辑：任 念）

[作者简介]李浩（1990-），男，内蒙古民族大学临床医学院外科学专业在读硕士研究生，研究方向：胸外科疾病的基础与临床

▲通讯作者：侯殿臣（1965-），男，教授，硕士研究生导师，研究方向：胸外科疾病的综合治疗